噬菌體的污染防治方法

1、 噬菌體的污染和防治 在很多發(fā)酵生產(chǎn)中，如氨基酸發(fā)酵、丙酮-丁醇發(fā)酵和抗生素發(fā)酵中經(jīng)常遇到噬菌體（bacteriaphage）污染，引起溶菌，并隨之消滅發(fā)酵遲緩或停止發(fā)酵等特別現(xiàn)象。本節(jié)主要介紹噬菌體污染的特征，檢查方法及防治措施。 一 噬菌體污染的特征 1 發(fā)酵液光密度上升緩慢，甚至下降，肉眼可見(jiàn)發(fā)酵液漸漸變清；2 耗糖速度緩慢或停止，產(chǎn)物生成量少或不增加，發(fā)酵液中殘?zhí)歉撸?產(chǎn)生大量泡末，發(fā)酵液呈粘稠狀；4 菌體不規(guī)章，甚至消滅畸形。二 噬菌體的檢查方法 1雙層瓊脂平板法 （1）&#

2、160;雙層瓊脂平板的制備：先用78mL 2%的瓊脂培育基作底層，凝固后，加入34mL 冷至45的1%瓊脂上層培育基（其中含0.2mL發(fā)酵菌種懸液和0.1mL待檢發(fā)酵液），讓其平整凝固；（2） 在發(fā)酵菌的適宜溫度下培育，若是細(xì)菌，一般培育1620小時(shí)。（3） 檢查有無(wú)透亮的噬菌斑。 2液體培育檢查法 將培育基、發(fā)酵菌種及待檢發(fā)酵液三者混合，培育后觀(guān)看培育液是否變清。 3斑點(diǎn)試驗(yàn)法 先制備好涂布有發(fā)酵菌種的平板，再用接種環(huán)或無(wú)菌吸管取少許發(fā)酵液在平板上點(diǎn)種，培育后，觀(guān)看是否有噬菌斑。 4玻片快速法 

3、;將發(fā)酵菌種、發(fā)酵液和少量瓊脂培育基（含0.50.8%的瓊脂）混勻后涂布于無(wú)菌載玻片上，經(jīng)短期培育后，在低倍鏡下觀(guān)看是否有噬菌斑。 三 噬菌體的防治 發(fā)酵液中污染噬菌體，不外乎有兩種緣由。1 菌種本身帶噬菌體，特殊是溶源性噬菌體，對(duì)這種菌種，一經(jīng)發(fā)覺(jué)，應(yīng)馬上棄去。2 生產(chǎn)的環(huán)境中有噬菌體。因此，可實(shí)行相應(yīng)的預(yù)防措施：1 決不使用可疑菌種；2 清除四周環(huán)境中存在的噬菌體。能滅菌的滅菌，能消毒的消毒，搞好清潔衛(wèi)生工作；3 選育抗噬菌體菌株4 輪換使用菌株。由于一個(gè)菌株用的時(shí)間一長(zhǎng)，就有可能消滅該菌種的噬菌體。

4、5 留意通氣質(zhì)量。取風(fēng)口應(yīng)設(shè)在3040米的高空，空氣過(guò)濾器要保證質(zhì)量； 四 發(fā)酵液污染噬菌體后的搶救措施 假如一旦發(fā)覺(jué)噬菌體污染，應(yīng)準(zhǔn)時(shí)實(shí)行補(bǔ)救措施 1若在發(fā)酵前期污染了噬菌體，由于此時(shí)耗糖還不多，常用以下措施 （1） 補(bǔ)加抗性種子，并依據(jù)發(fā)酵液中的養(yǎng)分多少，適當(dāng)補(bǔ)加養(yǎng)分物質(zhì)；（2） 補(bǔ)加約50%的已培育至對(duì)數(shù)期的正常的發(fā)酵液，再進(jìn)行發(fā)酵；（3） 若噬菌體輕度污染，菌體仍能較正常地生長(zhǎng)，并積累代謝產(chǎn)物，則可照常進(jìn)行發(fā)酵，若污染嚴(yán)峻，則用加熱法（7080）滅活噬菌體，放罐后重消毒。  2若在發(fā)酵中

5、后期污染了噬菌體，且比較嚴(yán)峻，則應(yīng)提前放罐，盡快提取產(chǎn)物。發(fā)酵罐、管道、洗滌水及用具均應(yīng)徹底滅菌，防止噬菌體集中而造成新的污染。并準(zhǔn)時(shí)改用抗該噬菌體的生產(chǎn)菌株。 3對(duì)某些產(chǎn)品可用藥物防治。選擇能特異性地抑制噬菌體而對(duì)生產(chǎn)菌株及其發(fā)酵產(chǎn)物的積累和提取均無(wú)影響，又符合衛(wèi)生要求、對(duì)人無(wú)毒的藥物。盡可能選活性高（用藥量少）、價(jià)格低的藥物。如在谷氨酸發(fā)酵中常選用的藥物有：（1） 螯合劑。如植酸鹽（0.051%），檸檬酸鹽（0.20.5%），草酸鹽（0.20.5%），三聚磷酸鹽（0.51%）等可抑制噬菌體的吸附或阻擋DNA的注入；（2） 表面活性劑。0.010.2%的聚乙二醇

6、單酯、聚氧乙烯烷基醚、土溫20、土溫60等。主要作用于寄主細(xì)胞表面，抑制噬菌體在細(xì)菌上的吸附。（3） 抗菌素。如1ug/mL的金霉素、四環(huán)素、氯霉素等抑制噬菌體蛋白質(zhì)的合成；（4） N-脂酰氨基酸。是一類(lèi)具有1618個(gè)碳原子的衍生物。如20ug/mL的N-棕櫚酰-L-谷氨酸，其作用機(jī)制是抑制噬菌體核酸的復(fù)制或子代噬菌體的成熟把污染的種子劃線(xiàn)接種分別，然后挑幾個(gè)典型的菌落分別編號(hào)后做兩種不同的處理，一種是擴(kuò)大培育后涂平板觀(guān)看，另一種是按你原先的方法用液氮保藏后再涂平板觀(guān)看，比較同一個(gè)菌落的不同處理的子代有無(wú)區(qū)分 關(guān)鍵是環(huán)境的把握，尤其是發(fā)酵液的處理，要求取樣、洗罐等任何含有細(xì)胞的物質(zhì)都要處理，比如取樣后，多余的液體放入漂白