正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選地黃中梓醇的提取工藝

1、正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選地黃中梓醇的提取工藝 作者：劉影 楊菁 黃雷 許燕 岳春麗 韋忠民【摘要】 目的優(yōu)選出地黃中梓醇的最佳提取工藝。方法以梓醇含量為指標(biāo)，利用 L9（34）正交實(shí)驗(yàn)法，以乙醇濃度、提取次數(shù)、加醇倍數(shù)、提取時(shí)間為因素，每個(gè)因素取3個(gè)水平，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，來確定最佳制備工藝。結(jié)果最佳工藝為12倍量95%乙醇提取2次，1 h/次。結(jié)論經(jīng)優(yōu)化后工藝條件可靠，適合地黃中梓醇的提取工藝的。 【關(guān)鍵詞】 地黃； 梓醇； 正交實(shí)驗(yàn)Abstract：ObjectiveTo explore an optimum extraction technology of Catalpol from Rehmannia

2、glutinosa Libosch. MethodsUsing catalpol as the index, the effects of alcohol concentration, extraction time, solvent amount and extraction degree on extraction technology were evaluated by orthogonal design.ResultsThe superior technology of catalpol was as follows: 95% alcohol, 1 hour, 12 fold solv

3、ent and extracted 2 times.ConclusionThe optimum extraction process is stable and accurate, and it is suitable for extraction of catalpol from Rehmannia glutinosa Libosch.Key words：Rehmannia glutinosa Libosch； Catalpol； Orthogonal Design 生地黃為玄參科植物地黃Rehmannia glutinosa Libosch的干燥塊根，系常用的補(bǔ)藥，臨床應(yīng)用十分廣泛。傳統(tǒng)醫(yī)

4、學(xué)認(rèn)為地黃具有滋陰補(bǔ)血、生津的功效。生地黃的主要活性部分是環(huán)烯醚萜苷類，而環(huán)烯醚萜苷類中含量最高的是梓醇。研究證明梓醇具有降血糖1，預(yù)防哮喘病，治療乙型肝炎病毒感染，對(duì)缺血再灌注受損神經(jīng)元有保護(hù)作用2，抗癌3等藥理作用。目前梓醇的開發(fā)是一個(gè)熱點(diǎn)，但由于梓醇化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，易受酸堿4等條件影響，這為梓醇的提取增加了難度，本實(shí)驗(yàn)對(duì)回流提取、超聲提取、40溫浸3種提取方式及甲醇、乙醇和水的提取溶媒進(jìn)行了篩選，在此基礎(chǔ)上，利用正交實(shí)驗(yàn)，以梓醇含量和干浸膏的重量為指標(biāo)優(yōu)選出最佳工藝。1 儀器與試藥 LC-10vp高效液相色譜儀，日本島津公司生產(chǎn)；KQ-250B型超聲波清洗器，昆山市超聲波儀器公司生產(chǎn)；A

5、240型天平，美國梅特勒公司生產(chǎn)；恒溫水浴箱 ，北京市永光醫(yī)療儀器廠。生地黃，產(chǎn)自河南省武涉縣西陶鎮(zhèn)，由錦州奧鴻藥業(yè)有限責(zé)任公司質(zhì)量部照2005年版藥典部地黃質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，符合規(guī)定。梓醇對(duì)照品，批號(hào)110808-200407，購于中國藥品生物制品檢定所；乙腈，美國Fish公司生產(chǎn)；其余試劑為國產(chǎn)分析純。2 方法2.1 梓醇的含量測定2.2 提取工藝的優(yōu)化1 表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）實(shí)驗(yàn)方法：取生地黃樣品粉碎，過2號(hào)篩，稱取9份樣品，每份10g，將9份樣品分成3組，每組分別加入100 ml水、100 ml95%乙醇、100 ml甲醇，將第1組分別超聲提取70 Hz，20 min，第2組回流提取

6、2 h，第3組40溫浸6 h，分別過濾取濾液減壓濃縮至干，分別加入10 ml水溶解，濾過，取濾液液相檢測梓醇含量，并干浸膏的重量。結(jié)果見表2。表2 不同提取方法不同溶劑提取后測得干浸膏重量和梓醇含量（略）由表2可見回流提取方法優(yōu)于其他兩種方法，在溶劑方面雖然甲醇的提取率高，但是干浸膏重量大，即雜質(zhì)含量高，對(duì)下一步的純化帶來一定的難度，并且甲醇毒性大，所以最佳的提取方法為乙醇回流提取。表3 因素水平（略）表4 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）表5 方差分析（略）3 討論 通過對(duì)超聲提取、室溫浸出提取、回流提取3個(gè)提取方法的考察得出了回流提取梓醇含量高。在溶劑選擇方面分別對(duì)水、甲醇、95%乙醇3種溶劑

7、進(jìn)行了考察，在干浸膏重量上95%乙醇低于其他兩個(gè)溶劑，分析可能由于大量的糖類、氨基酸等水溶性雜質(zhì)不能被乙醇提出來的緣故5。這樣對(duì)后期梓醇的純化帶來很大的方便。在此基礎(chǔ)上我們采用了正交實(shí)驗(yàn)對(duì)不同的乙醇濃度、提取時(shí)間、提取次數(shù)、提取溶劑倍數(shù)。分別選擇了3個(gè)水平分別進(jìn)行考察。得出了乙醇濃度對(duì)干浸膏和梓醇含量影響較顯著。有對(duì)地黃中梓醇變化的條件進(jìn)行研究，結(jié)果表明，梓醇溶于水中加熱10010 h后，其含量未見明顯變化；但在酸、堿條件下極不穩(wěn)定。因此實(shí)驗(yàn)所確定回流提取工藝對(duì)梓醇含量不會(huì)有影響，而且較適合生產(chǎn)，對(duì)梓醇提取的工業(yè)化提供了一定的技術(shù)參數(shù)?！疚墨I(xiàn)】 1 萬昌武,張雅麗,桂華珍,等.地黃不同方法提取物制劑降糖作用的實(shí)驗(yàn)研究J.貴州醫(yī)藥,2003,27(12):1112.2 李 楊,李丹清,包永明,等.梓醇對(duì)缺血再灌注受損傷神經(jīng)元保護(hù)作用的研究J .醫(yī)學(xué)雜志，2005, 15（10）:1454.3 Pungitore C R, AyubM J, Borkowski E J, et al.Inhibition of Taq DNA polymerase by catalpolJ. Cell Mol B