杜仲提取物的致突變實驗研究

1、杜仲提取物的致突變實驗研究        摘要】  目的研究杜仲提取物的致突變性，為其應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法對實驗小鼠灌服不同劑量的杜仲提取物水溶液，檢測小鼠骨髓微核率、精子畸形率及采用鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變實驗(Ames實驗)進行觀察。結(jié)果杜仲提取物水溶液對小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率無影響；對小鼠精子無畸形誘變作用；對供試菌株無致突變作用。結(jié)論杜仲提取物對受試物未見有明顯的致突變作用。 【關(guān)鍵詞】  杜仲 微核 致突變實驗杜仲Eucommia ulmoides Oliv在我國的應(yīng)用悠久，近幾年

2、我國學(xué)者在杜仲的生物學(xué)、化學(xué)成分、生理生化等方面做了許多研究，董娟娥等1報道了杜仲籽油具有降壓、降血脂及抗腫瘤等作用。唐建軍等2報道：杜仲含有豐富的維生素E和-胡蘿卜素，有延緩衰老、增強機體免疫力作用。為更好地開發(fā)利用杜仲，我們在探索張家界產(chǎn)杜仲提取物（簡稱杜仲提取物）的亞慢性毒作用3的基礎(chǔ)上，對其致突變作用進行了研究，旨在為其應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。1  材 料1.1  藥品與動物杜仲提取物主要成分綠原酸，張家界恒興生物科技公司提供。昆明種小鼠購于湖南中醫(yī)學(xué)院實驗動物中心，批號：990218 。注射用環(huán)磷酰胺：上海華聯(lián)制藥有限公司，批號：030504。疊氮鈉（NaN3）：

3、上海試劑一廠，批號：990706。鼠傷寒沙門氏菌株（TA97，TA98，TA100，TA102）購于農(nóng)科院獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。1.2  主要儀器ES-C300A天平：湘儀天平儀器廠。組織勻漿器：北京玻璃儀器廠。2  方法與結(jié)果2.1  小鼠骨髓嗜多染紅細胞（PCE）微核試驗小鼠60只，體重（28±2）g，雌雄各半，隨機分為6組。杜仲提取物稀釋液設(shè)為1.28，0.64，0.32，0.16 g/kg 4個劑量組，陰性對照為蒸餾水，兩次灌胃給予受試物。陽性對照為環(huán)磷酰胺（CP）40 mg/kg體重，兩次腹腔注射間隔24 h，第2次給受試物后6 h，頸椎脫臼處死動物

4、。按國家標準4取骨髓制片，每只動物計數(shù)1 000個嗜多染紅細胞，微核率以百分率表示。結(jié)果見表1。表1  杜仲提取物對小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率實驗（略）與陰性對照組比較，*P0.01，P0.05；n=10    由表1可知，實驗組雌、雄小鼠微核發(fā)生率為0.39%0.43%，陰性對照組為0.43%，陽性對照組為4.38%，實驗組與陰性對照組比較，微核發(fā)生率均無差異顯著性（P>0.05），陽性對照組與陰性對照組比較，差異性顯著（P<0.01）。2.2  杜仲提取物對小鼠精子畸形的試驗 雄性小鼠60只，體重（3035）g，隨機分為6組，實

5、驗組劑量為1.28，0.64，0.32，0.16 g/kg體重與陰性對照組（生理鹽水），經(jīng)口腔給予。陽性對照組用環(huán)磷酰胺40 mg/kg體重腹腔注射。各組1次/d，連續(xù)5 d給予受試物。于首次給藥后第35天，頸椎脫臼處死小鼠，按紀云晶5方法制片。每組計數(shù)2 000個精子，其畸形率。結(jié)果見表2。表2  杜仲提取物對小鼠精子畸形的影響（略）與陰性對照組比較，*P0.01，P0.05；n=10    由表2可知，實驗組小鼠的精子畸形率為7.6%8.3%，陰性對照組為7.8% ，陽性對照組為71.8%，實驗組與陰性對照組比較差異無顯著性（P>0.05），陽

6、性對照組與陰性對照組比較差異極顯著（P<0.01）。1         2.3  Ames試驗按Ames標準方法6對鼠傷寒沙門氏突變型菌株TA97，TA98，TA100，TA102進行增菌培養(yǎng)后進行鑒定，所采用的4個菌株特性均與Ames試驗標準相符。在加與不加活化物的條件下進行平板摻入法試驗。杜仲提取物用雙蒸餾水稀釋為 500，400，300，200 g/皿4個劑量組，陽性對照為疊氮鈉（NaN3）10 g/皿，陰性對照為雙蒸餾水100g/皿，每個劑量組重復(fù)做2個平皿，結(jié)果見表3。表3  杜

7、仲提取物對TA平均回變菌落數(shù)的影響（略）+S9:加S9活化物，-S9:不加S9活化物    表3可知，不同劑量的杜仲提取物，無論加或不加S9活化系統(tǒng)，其回變菌落數(shù)與陰性對照組（雙蒸餾水）比較，均無高于自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍，而陽性對照組菌落數(shù)均高于陰性對照組的2倍以上。3  討論    不同劑量杜仲提取物對小鼠PCE的試驗表明，杜仲提取物稀釋液對小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率未見明顯影響（P<0.01）。說明本品對細胞染色體無誘變作用。對小鼠精子畸形的影響試驗，結(jié)果表明，杜仲提取物稀釋液對小鼠精子畸形發(fā)生率未見明顯影響（P<0.01），說明本品對小鼠精子無畸形誘變作用，戚向陽等7用杜仲粉對小鼠精子進行的藥理作用研究結(jié)果表明，杜仲粉對小鼠精子不產(chǎn)生畸變作用，其結(jié)果與本研究結(jié)果一致。    采用鼠傷寒沙門氏突變型菌株TA97，TA98，TA100，TA102進行回復(fù)突變試驗，結(jié)果表明，不同劑量的杜仲提取物，無論加或不加S9活化系統(tǒng)，其回變菌落數(shù)與陰性對照組（雙蒸餾水）比