玉米淀粉檢測作業(yè)指導(dǎo)書DOC

1、天 津 市 鴻 祿 食 品 有 限 公 司玉米淀粉檢測作業(yè)指導(dǎo)書目 錄第一章 玉米淀粉水分的測定第二章 玉米淀粉酸度的測定第三章 玉米淀粉灰分的測定第四章 玉米淀粉斑點的測定第五章 玉米淀粉細度的測定第六章 玉米淀粉脂肪的測定第七章 玉米淀粉蛋白質(zhì)的測定第八章 玉米淀粉白度的測定第九章 玉米淀粉大腸菌群的檢測第十章 玉米淀粉菌落總數(shù)的測定第一章 玉米淀粉水分的測定執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB/T 12087一2008代替GB/T 12087-1989 淀粉水分的測定 烘箱法1.范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了在常壓條件下，采用烘箱在130烘干淀粉測定水分的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于干燥的天然淀粉和變性淀粉的水分測定。本標(biāo)準(zhǔn)不適用于

2、某些特殊淀粉的水分測定，如含有在130時不穩(wěn)定物質(zhì)的淀粉。2.原理將試樣放在溫度為130-133的恒溫烘箱內(nèi),于常壓下烘干90min，測定試樣損失的質(zhì)量。3.儀器 實驗室常用儀器和下列儀器。3.1分析天平:感量0.001g。3.2烘盒:用在測試條件下不受淀粉影響的金屬(例如鋁)制作，并有大小合適的盒蓋。其有效表面能使試樣均勻分布時質(zhì)量不超過0.3g/cm2。適宜尺寸為直徑55mm-65mm，高度15mm-30mm，壁厚約0.5mm。3.3恒溫烘箱:配有適當(dāng)?shù)目諝庋h(huán)裝置的電加熱器，能夠使得測試樣品周圍的空氣溫度均勻保持在130-133范圍內(nèi)。烘箱的熱功率應(yīng)能保證在烘箱溫度調(diào)到131時，放入最大

3、數(shù)量的試樣后，在30min內(nèi)烘箱溫度回升到131，從而保證所有的樣品同時干燥。3.4干燥器:內(nèi)置有效的干燥劑和一個使烘盒快速冷卻的多孔厚隔板。4.試驗樣品 測試樣品應(yīng)沒有任何結(jié)塊、硬塊，并應(yīng)充分混勻后使用。樣品應(yīng)放在防潮、密閉的容器內(nèi)，測試樣品取出后，應(yīng)將剩余樣品儲存在相同的容器中，以備下次測試時再用。5分析步驟5.1烘盒恒質(zhì) 取干凈的空烘盒，放在130烘箱內(nèi)烘30min-60min，取出烘盒置于干燥器內(nèi)冷卻至室溫，取出稱量;再烘30min，重復(fù)進行冷卻、稱量至前后兩次質(zhì)量差不超過0.005g，即為恒質(zhì)(m0)。5.2樣品及烘盒稱量 精確稱取5g士0.25 g充分混勻的試樣，倒入恒質(zhì)后的烘盒內(nèi)

4、，使試樣均勻分布在盒底表面上，蓋上盒蓋，立即稱量烘盒和試樣的總質(zhì)量（m1）。在整個過程中，應(yīng)盡可能減少烘盒在空氣中的暴露時間。5.3測定 稱量結(jié)束后，將盒蓋打開斜靠在烘盒旁，迅速將盛有試樣的烘盒和盒蓋放入已預(yù)熱到130的恒溫烘箱內(nèi)，當(dāng)烘箱溫度恢復(fù)到130時開始計時，樣品在130-133的條件下烘90 min，然后取出，并迅速蓋上盒蓋，放入干燥器中，在干燥器中，烘盒不可疊放。烘盒在干燥器中冷卻30min-45min至室溫，然后將烘盒從干燥器內(nèi)取出，在2min內(nèi)精確稱量出樣品和帶蓋烘盒的總質(zhì)量(m2)。對同一樣品應(yīng)進行兩次平行測定。6.結(jié)果計算按式計算: X=(m1-m2)100/(m1-m0）式

5、中:X試樣水分含量，%;mO恒質(zhì)后的空烘盒和蓋的總質(zhì)量，單位為克(g)；ml干燥前帶有樣品的烘盒和蓋的總質(zhì)量，單位為克(g)；m2干燥后帶有樣品的烘盒和蓋的總質(zhì)量，單位為克(g)；如果兩次平行測定結(jié)果的絕對差值沒有超過8. 1中給定的重復(fù)性的限度，則取兩次測定結(jié)果的算術(shù)平均值為最終測定結(jié)果。第二章 玉米淀粉酸度的測定執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB/T5009.53-2003 淀粉類制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法1淀粉酸度定義：淀粉酸度以10.0g試樣消耗氧氧化鈉溶液(0.1000mol/L)的體積(mL)表示。2試劑2.1  氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c(NaOH) =0.1000mol/L。2.2 

6、酚酞指示液：稱取0.50g酚酞溶解在乙醇(95%)中并定容至50.Oml。3分析步驟稱取5.0g經(jīng)研磨均勻的試樣，置于250 mL錐形瓶中。加30.0 mL40.0mL水，搖勻，使成糊狀，加5滴酚酞指示液，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至初現(xiàn)粉紅色，0.5 min不褪色即為終點。4結(jié)果計算 X=V×2×c/0.1000  式中：         X一試祥酸度0T；    y試樣消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，單位為毫升(mL)；    c氫

7、氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液濃度，單位為摩爾每升(mol/L)；    0.1000-氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c(NaOH)=O.1000mol/L的濃度，單位為摩爾每升(mol/L)。    計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。5精密度   在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。第三章 玉米淀粉灰分的測定執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GBT22427.1-2008淀粉灰分測定1.玉米淀粉灰分的測定根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法，將樣品進行灰化后得到的殘留物。2.原理將樣品在900高溫下灰化，直到灰化樣品的碳完全消失，得到樣品的殘留

8、物。3.儀器3.1坩堝:由鉑或在該測定條件下不受影響的材料制成，平底，容量為40mL，最小可用表面積為15cm2。3.2干燥器:內(nèi)有有效充足的干燥劑和一個厚的多孔板。3.3灰化爐:有控制和調(diào)節(jié)溫度的裝置，可提供900±25的灰化溫度。3.4分析天平:感量0.0001g。3.5電熱板或本生燈。4.操作過程4.1坩堝預(yù)處理 不管是新的或是使用過的坩堝，必須先用沸騰的稀鹽酸洗滌，再用大量自來水洗滌，最后用蒸餾水沖洗。 將洗凈的坩堝置于灰化爐內(nèi)，在900±25下灼燒30min，并在干燥器內(nèi)冷卻至室溫，稱重，精確至0.0001g。4.2稱樣根據(jù)對樣品灰分含量的估計，迅速稱取樣品2g1

9、0g，精確至0.0001g，將樣品均勻分布在坩堝內(nèi)，不要壓緊。注:馬鈴薯淀粉、小麥淀粉以及大米淀粉至少稱5g，而玉米淀粉和木薯淀粉需要稱10 g。4.3炭化將鉗禍置于灰化爐口、電熱板或者本生燈上，半蓋坩堝蓋，小心加熱使樣品在通氣情況下完全炭化，直至無煙產(chǎn)生。燃燒會產(chǎn)生揮發(fā)性物質(zhì)，耍避免自燃，自燃會使樣品從坩堝中濺出而導(dǎo)致?lián)p失。4.4灰化炭化結(jié)束后，即刻將柑禍放人灰化爐內(nèi)，將溫度升高至900±25，保持此溫度直至剩余的碳全部消失為止，一般1h可灰化完畢。打開爐門，將坩堝移至爐口冷卻至200左右，然后將坩堝放入干燥器中使之冷卻至室溫，準(zhǔn)確稱重，精確至0.0001g。 每次放入干燥器的坩堝

10、不得超過四個。4.5測定次數(shù) 應(yīng)進行平行實驗。5.結(jié)果計算5.1計算方法 若灰分含量以樣品殘留物的質(zhì)量占樣品質(zhì)量的百分比表示，計算公式見式(1)。X=m1/m0×100（1）若灰分含量以樣品殘留物的質(zhì)量占樣品干基質(zhì)量的百分比表示，計算公式見式(2)。X=m1×100×100/m0/（100-H）（2）式中: X一一樣品的灰分含量，%；m1一一灰化后殘留物的質(zhì)量，單位為克(g)；m0樣品質(zhì)量，單位為克(g)；H一一樣品按GB/T 22427. 2的規(guī)定方法測定的水分含量，%。取平行實驗的算術(shù)平均值為結(jié)果。得到的結(jié)果之差應(yīng)符合7. 2對重復(fù)性的要求。實驗結(jié)果保留兩位小

11、數(shù)。5.2重復(fù)性 在灰分含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))不大于1%時，平行實驗結(jié)果的絕對差值不應(yīng)超過0.02%;在灰分含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))大于1%時，絕對差值則不應(yīng)超過算術(shù)平均值的2%。若重復(fù)性超出上述兩種限值，應(yīng)再重新做兩次測定。6.實驗報告實驗報告應(yīng)列出:實驗方法;實驗得到的結(jié)果;進行重復(fù)性實驗得到的兩種實驗結(jié)果。還應(yīng)列出所有未列出的操作環(huán)節(jié)以及任何偶然可能影響實驗結(jié)果的環(huán)節(jié)。實驗報告應(yīng)包括完全測試試樣必需的所有信息。第四章 玉米淀粉斑點的測定執(zhí)行GB/T 22427.4-2008淀粉斑點檢驗方法1.范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了肉眼觀察測定淀粉斑點的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于干燥的粉末狀淀粉和變性淀粉。2.術(shù)語和定義下列術(shù)語和定

12、義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。斑點spot在規(guī)定條件下，用肉眼觀察到的雜色點。3.原理通過肉眼觀察樣品，讀出斑點的數(shù)量。4儀器4.1透明板:刻有10個方形格(1cm×1cm)的無色透明板口清潔，無污染。4.2平板:白色，清潔，無污染，可均勻分布樣品。5操作過程5. 1樣品預(yù)處理 樣品應(yīng)充分混勻。5.2稱樣 稱取樣品10g，均勻分布在平板上。5.3計數(shù) 將透明板蓋到已均勻分布的樣品上，并輕輕壓平。在較好的光線下，眼與透明板的距離保持30cm，用肉眼觀察樣品中的斑點，并進行計數(shù)，記下10個空格內(nèi)樣品的斑點總數(shù)量。 注:分析人員的裸眼視力或矯正視力應(yīng)在1.0以上。5. 4測定次數(shù) 應(yīng)進行平行實驗。6.結(jié)

13、果計算6.1計算方法 結(jié)果以每平方厘米的斑點的數(shù)量表示，見式(1)。X=C/10（1）式中:X樣品的斑點，單位為個每平方厘米(個/cm2 )；Cl0個空格內(nèi)斑點的總數(shù)，單位為個。取平行實驗的算術(shù)平均值為結(jié)果，結(jié)果保留一位有效數(shù)字。6.2重復(fù)性 平行實驗結(jié)果的絕對差值，不應(yīng)超過1.0。若超出上述限值，應(yīng)重新測定。7.實驗報告實驗報告應(yīng)列出:實驗方法;一實驗得到的結(jié)果;進行重復(fù)性實驗而得到的兩種實驗結(jié)果。還應(yīng)列出所有未列出的操作環(huán)節(jié)以及任何偶然可能影響實驗結(jié)果的環(huán)節(jié)。實驗報告應(yīng)包括完全測試試樣必需的所有信息。第五章 玉米淀粉細度的測定執(zhí)行GB/T 22427.5-2008淀粉細度測定1.范圍本標(biāo)準(zhǔn)

14、規(guī)定了篩分法測定淀粉細度的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于干燥的粉末狀淀粉和變性淀粉。2.術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。2.1細度fineness用分樣篩篩分樣品，通過分樣篩得到的篩下物質(zhì)量與樣品總質(zhì)量的比值。3.原理用分樣篩進行篩分，通過分樣篩得到樣品質(zhì)量的過程。4.儀器4.1天平:感量0.1g。4.2分樣篩:金屬絲編織篩網(wǎng)，根據(jù)產(chǎn)品要求選用規(guī)定的孔徑。4.3檢驗篩:金屬絲編織篩網(wǎng)，根據(jù)產(chǎn)品要求選用規(guī)定的孔徑。振動頻率:1420次/min;振幅:2mm5mm。4.4橡皮球:直徑5mm。5.操作過程5.1人工篩分法5.1.1樣品預(yù)處理 樣品應(yīng)充分混勻。5.1.2稱樣稱取樣品50g，精確至0.1g。5

15、.1.3篩分 均勻搖動分樣篩，直至篩分不下為止。稱量篩下物，精確至0.1g。5.2標(biāo)準(zhǔn)檢驗篩篩分法(仲裁法)5.2.1樣品預(yù)處理 樣品應(yīng)充分混勻。5.2.2稱樣 稱取樣品50g，精確至0.1g。5.2.3篩分 將樣品均勻地倒入檢驗篩中，放入橡皮球5個，固定篩體，振搖10min后，稱量篩下物，精確至0.1g。5.3測定次數(shù)應(yīng)進行平行實驗。6結(jié)果計算6. 1計算方法細度以篩下物占樣品總質(zhì)量的百分比表示，計算公式見式(1)X=m1/m0×100 （1） 式中: X樣品細度，%； M樣品過篩的篩下物質(zhì)量，單位為克(g)； m0樣品總質(zhì)量，單位為克(g)。 取平行實驗的算術(shù)平均值為結(jié)果，結(jié)果保

16、留一位小數(shù)。6.2重復(fù)性 平行實驗結(jié)果的絕對差值，不應(yīng)超過質(zhì)量分?jǐn)?shù)的0.5%。若超出上述限值，應(yīng)再重新測定。7實驗報告實驗報告應(yīng)列出:實驗方法;實驗得到的結(jié)果;進行重復(fù)性實驗而得到的兩種實驗結(jié)果。還應(yīng)列出所有未列出的操作環(huán)節(jié)以及任何偶然可能影響實驗結(jié)果的環(huán)節(jié)。實驗報告應(yīng)包括完全測試試樣必需的所有信息。第六章 玉米淀粉脂肪的測定執(zhí)行：GB/T 123091990工業(yè)玉米淀粉1.原理 用乙醚將樣品中的脂肪抽提出來，干燥后，得到徉品的總脂肪剩余物質(zhì)量占原樣品質(zhì)量的百分率。2.儀器 a.索氏提取器(Soxhlet) ; b.電水浴鍋; c.烘箱。3.試劑與材料 a.無水乙醚; b.濾紙筒及脫脂濾紙。4

17、.試驗程序 精確稱取絕十樣品5g(精確至0.0001g)，用經(jīng)過干燥的脫脂濾紙將樣品包好，置于濾紙筒中，放入索氏提取器抽提筒內(nèi)，將抽提筒與經(jīng)過干燥的已知質(zhì)量的抽提瓶連好，將乙醚倒入抽提筒內(nèi)至虹吸管高度上邊，使乙醚虹吸下去。兩次后，再倒入乙醚至虹吸管高度2/3處，裝上冷凝管，在65蒸餾水的水浴上回流抽提4h。取出濾紙筒，回收乙醚，至抽提瓶中殘留液為12 mL時，取下抽提瓶，在水浴上驅(qū)除殘余的乙醚，洗凈瓶外部，置于105烘箱中，烘至恒重(前后兩次稱量之差不得超過0.2mg，取較小稱量結(jié)果)。5.計算X7=（m1-m2）×100/m0式中:X7樣品的脂肪，%； m1抽提瓶和殘留物的質(zhì)量g；

18、 m2一抽提瓶的質(zhì)量，g； m0一一絕干樣品的質(zhì)量，g。6.允許差同一樣品兩次測定值之差應(yīng)小于0.5%，最終結(jié)果保留二位小數(shù)。第七章 玉米淀粉蛋白質(zhì)的測定執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB/T 123091990工業(yè)玉米淀粉微量定氮法1. 儀器設(shè)備微量定氮裝置如圖B1所示。2.蒸餾 將消化好并冷卻至室溫的樣品溶液全部轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。向100mL接收瓶內(nèi)加入20mL2%硼酸溶液和一滴混合指示液。將接收瓶置于冷凝管下口，使下口浸入硼酸溶液中。再取10mL定容后的樣品液，沿小玻璃杯移入反應(yīng)室，并用少量水沖洗小玻璃杯。塞緊棒狀玻璃塞，向小玻璃杯(5)中加入40mL400。氫氧化鈉溶液。提起

19、玻璃塞，使氫氧化鈉溶液緩慢流入反應(yīng)室(6)，立即塞緊玻璃塞，并在小玻璃杯中加水，使之密封。通入蒸氣蒸餾5min，降低接收瓶的位置，使冷凝管管口離開液面，繼續(xù)蒸餾1min，用少量水沖洗冷凝管管口，洗液并入接收瓶中，取下接收瓶。3.滴定用0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定收集液至剛剛出現(xiàn)紫紅色為終點。同時做空白試驗。4.計算X=(V1-V0) ×0.014×C×6.25×100/(m×0.1)式中:X 食品中蛋白質(zhì)含量，%； V1一一樣品試驗消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL； V0空白試驗消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL； C一一鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/

20、L； 0.0141mLlmol/L鹽酸溶液相當(dāng)于氮的質(zhì)量，g; m樣品質(zhì)量，g; 6.25氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)。5.允許差 同一樣品兩次滴定，消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積之差應(yīng)小于0.1mL，計算結(jié)果保留二位小數(shù)。第八章 玉米淀粉白度的測定執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB/T 22427.6-2008淀粉白度測定1.范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用光反射式白度儀測定淀粉白度的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于干燥的粉末狀淀粉和變性淀粉。2.術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。2.1白度whiteness在規(guī)定條件下，樣品表面藍光反射率與標(biāo)準(zhǔn)白板表面光反射率的比值。3.原理通過樣品對藍光的反射率與標(biāo)準(zhǔn)白板對藍光的反射率進行對比，得到樣品的白度。4.

21、儀器4.1白度儀:波長可調(diào)至457nm，有合適的樣品盒及標(biāo)準(zhǔn)白板，讀數(shù)須精確至0.1。4.2壓樣器。5操作過程5.1樣品預(yù)處理 樣品應(yīng)充分混勻。5.2樣品白板的制作 按白度儀所提供的樣品盒裝樣，并根據(jù)白度儀所規(guī)定的方法制作樣品白板。5.3白度儀操作 按所規(guī)定的操作方法進行，用標(biāo)有白度的優(yōu)級純氧化鎂制成的標(biāo)準(zhǔn)白板進行校正。5.4測定 用白度儀對樣品白板進行測定，讀取白度值。5.5測定次數(shù)應(yīng)進行平行實驗。6結(jié)果表示6.1表示方法 白度以白度儀測得的樣品白度值表示。 取平行實驗的算術(shù)平均值為結(jié)果，保留一位小數(shù)。6.2重復(fù)性 平行實驗結(jié)果的絕對差值，不應(yīng)超過0.2。 若超出上述限值，應(yīng)重新測定。7.實

22、驗報告實驗報告應(yīng)列出：實驗方法；實驗得到的結(jié)果；進行重復(fù)性實驗而得到的兩種實驗結(jié)果。還應(yīng)列出所有未列出的操作環(huán)節(jié)以及任何偶然可能影響實驗結(jié)果的環(huán)節(jié)。實驗報告應(yīng)包括完全測試試樣必需的所有信息。第九章 玉米淀粉大腸菌群的檢測執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB4789.32010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗大腸菌群計數(shù)1 設(shè)備和材料 除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下： 恒溫培養(yǎng)箱（36 ±1 ）、 冰箱（2 5 ）、 恒溫水浴箱（46 ±1 ）、天平（感量 0.1 g）、均質(zhì)器、振蕩器、無菌吸管1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微

23、量移液器及吸頭、無菌錐形瓶（容量 500 mL）、無菌培養(yǎng)皿（直徑 90 mm）、pH計或 pH比色管或精密 pH試紙、菌落計數(shù)器2 培養(yǎng)基和試劑 2.1 月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉湯：見附錄 A中 A.1。2.2 煌綠乳糖膽鹽（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉湯：見附錄 A中 A.2。 2.3 結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（Violet Red Bile Agar，VRBA）：見附錄 A中 A.3。 2.4 磷酸鹽緩沖液：見附錄 A中 A.4。 2.5 無菌生理鹽水：見附錄 A中 A.5。 2.6 無菌 1

24、mol/L NaOH：見附錄 A中 A.6。 2.7 無菌 1 mol/L HCl：見附錄 A中 A.7。第一法 大腸菌群MPN計數(shù)法3 檢驗程序 大腸菌群MPN計數(shù)的檢驗程序見圖1。圖1 大腸菌群 MPN計數(shù)法檢驗程序6 操作步驟 6.1 樣品的稀釋 固體和半固體樣品：稱取 25 g 樣品,放入盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi),8000 r/min10000 r/min 均質(zhì) 1 min2 min,或放入盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打 1 min2 min，制成 1:10 的樣品勻液。 液體樣品：以無菌吸管吸取 25 mL

25、樣品置盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成 1:10 的樣品勻液。 樣品勻液的 pH值應(yīng)在 6.57.5 之間，必要時分別用 1 mol/L NaOH或 1 mol/L HCl 調(diào)節(jié)。 用 1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取 1:10 樣品勻液1 mL，沿管壁緩緩注入 9 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用 1 支1 mL 無菌吸管反復(fù)吹打，使其混合均勻，制成 1:100 的樣品勻液。 根據(jù)對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋

26、1 次，換用1支 1 mL 無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過 15 min。 6.2 初發(fā)酵試驗 每個樣品，選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個稀釋度接種3管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯，每管接種1mL（如接種量超過1 mL，則用雙料LST肉湯），36 ±1 培養(yǎng)24 h±2 h，觀察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，24 h±2 h產(chǎn)氣者進行復(fù)發(fā)酵試驗，如未產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48 h±2 h，產(chǎn)氣者進行復(fù)發(fā)酵試驗。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。 6.3 復(fù)發(fā)酵試驗 用接種環(huán)從產(chǎn)氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)

27、，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）管中，36 ±1培養(yǎng)48 h±2 h，觀察產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者，計為大腸菌群陽性管。 6.4 大腸菌群最可能數(shù)（MPN）的報告 按6.3確證的大腸菌群LST陽性管數(shù)，檢索MPN表（見附錄B），報告每g（mL）樣品中大腸菌群的MPN值。第二法 大腸菌群平板計數(shù)法7 檢驗程序 大腸菌群平板計數(shù)法的檢驗程序見圖2。8 操作步驟8.1 樣品的稀釋 按6.1進行。 8.2 平板計數(shù) 圖2 大腸菌群平板計數(shù)法檢驗程序 選取2個3個適宜的連續(xù)稀釋度, 每個稀釋度接種2個無菌平皿，每皿1 mL。同時取1 mL生理鹽水加入無菌平皿作空白對照。 及時將15 mL

28、20 mL冷至46 的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）約傾注于每個平皿中。小心旋轉(zhuǎn)平皿，將培養(yǎng)基與樣液充分混勻，待瓊脂凝固后，再加3 mL4 mLVRBA覆蓋平板表層。翻轉(zhuǎn)平板，置于36 ±1 培養(yǎng)18 h24 h。 8.3 平板菌落數(shù)的選擇 選取菌落數(shù)在 15 CFU150 CFU之間的平板，分別計數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落。典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為 0.5 mm或更大。 8.4 證實試驗 從 VRBA平板上挑取 10個不同類型的典型和可疑菌落，分別移種于 BGLB 肉湯管內(nèi)，36 ±1 培養(yǎng) 24 h48 h，觀察產(chǎn)氣情況。凡

29、BGLB 肉湯管產(chǎn)氣，即可報告為大腸菌群陽性。8.5 大腸菌群平板計數(shù)的報告 經(jīng)最后證實為大腸菌群陽性的試管比例乘以8.3中計數(shù)的平板菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為每g（mL）樣品中大腸菌群數(shù)。例：10-4 樣品稀釋液1 mL，在VRBA平板上有100個典型和可疑菌落，挑取其中10個接種BGLB肉湯管，證實有6個陽性管，則該樣品的大腸菌群數(shù)為：100×6/10×104 /g（mL）=6.0×105CFU/g（mL）。附錄A（規(guī)范性附錄）培養(yǎng)基和試劑A.1 月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯 成分 胰蛋白胨或胰酪胨 20.0 g 氯化鈉 5.0 g 乳糖 5.0 g

30、磷酸氫二鉀（K2HPO4） 2.75 g 磷酸二氫鉀（KH2PO4） 2.75 g 月桂基硫酸鈉 0.1 g 蒸餾水 1 000 mL pH 6.8±0.2 制法 將上述成分溶解于蒸餾水中，調(diào)節(jié) pH。分裝到有玻璃小倒管的試管中，每管 10 mL。121 高壓滅菌 15 min。 A.2 煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯 成分 蛋白胨 10.0 g 乳糖 10.0 g 牛膽粉（oxgall或oxbile）溶液 200 mL 0.1%煌綠水溶液 13.3 mL 蒸餾水 800 mL pH 7.2±0.1 制法將蛋白胨、乳糖溶于約500 mL蒸餾水中，加入牛膽粉溶液200 mL（將

31、20.0 g脫水牛膽粉溶于200 mL蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH至7.07.5），用蒸餾水稀釋到975 mL，調(diào)節(jié)pH，再加入0.1%煌綠水溶液13.3 mL，用蒸餾水補足到1 000 mL，用棉花過濾后，分裝到有玻璃小倒管的試管中，每管10 mL。121 高壓滅菌15 min。 A.3 結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA） 成分 蛋白胨 7.0 g 酵母膏 3.0 g 乳糖 10.0 g 氯化鈉 5.0 g 膽鹽或3號膽鹽 1.5 g 中性紅 0.03 g 結(jié)晶紫 0.002 g 瓊脂 15 g18 g 蒸餾水 1 000 mL pH 7.4±0.1 制法 將上述成分溶于蒸餾水中，靜置幾分鐘，

32、充分?jǐn)嚢?，調(diào)節(jié)pH。煮沸2 min，將培養(yǎng)基冷卻至45 50 傾注平板。使用前臨時制備，不得超過3 h。 A.4 磷酸鹽緩沖液 成分 磷酸二氫鉀（KH2PO4） 34.0 g 蒸餾水 500 mL pH 7.2 制法 貯存液：稱取34.0 g的磷酸二氫鉀溶于500 mL蒸餾水中，用大約175 mL的1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH，用蒸餾水稀釋至1 000 mL后貯存于冰箱。稀釋液：取貯存液1.25 mL，用蒸餾水稀釋至1 000 mL，分裝于適宜容器中，121 高壓滅菌15 min。 A.5 無菌生理鹽水 成分 氯化鈉 8.5 g 蒸餾水 1 000 mL 制法 稱取8.5氯化鈉溶于1 0

33、00 mL蒸餾水中，121 高壓滅菌15 min。 A.6 1mol/L NaOH 成分 NaOH 40.0 g蒸餾水 1000 mL 制法 稱取40 g氫氧化鈉溶于1 000 mL蒸餾水中，121 高壓滅菌15 min。 A.7 1 mol/L HCl 成分 HCl 90 mL 蒸餾水 1 000 mL 制法 移取濃鹽酸90 mL，用蒸餾水稀釋至1 000 mL，121 高壓滅菌15 min。附錄B（規(guī)范性附錄）大腸菌群最可能數(shù)（MPN）檢索表B.1 大腸菌群最可能數(shù)（MPN）檢索表 每g（mL）檢樣中大腸菌群最可能數(shù)（MPN）的檢索見表B.1。表B.1 大腸菌群最可能數(shù)（MPN）檢索表第十

34、章 玉米淀粉菌落總數(shù)的測定執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB4789.22010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定1 設(shè)備和材料 除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下： 恒溫培養(yǎng)箱（36 ±1 ，30 ±1 ）、冰箱（2 5 ）、恒溫水浴箱（46 ±1 ）、天平（感量為 0.1 g）、均質(zhì)器、振蕩器、無菌吸管1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸頭、無菌錐形瓶（容量 250 mL、500 mL）、無菌培養(yǎng)皿（直徑 90 mm）、pH計或pH比色管或精密 pH試紙、放大鏡或/和菌落計數(shù)器2 培養(yǎng)基和試劑

35、2.1 平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基：見附錄 A 中 A.1。 2.2 磷酸鹽緩沖液：見附錄 A中 A.2。2.3 無菌生理鹽水：見附錄 A中 A.3。 3 檢驗程序 菌落總數(shù)的檢驗程序見圖1。圖 1 菌落總數(shù)的檢驗程序4 操作步驟 4.1 樣品的稀釋 固體和半固體樣品：稱取 25 g 樣品置盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/min10000 r/min 均質(zhì) 1 min2 min，或放入盛有 225 mL 稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打 1 min2 min，制成 1:10 的樣品勻液。 液體樣品：以無菌吸管吸取 25 mL 樣品置盛有 225 mL 磷

36、酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成 1:10 的樣品勻液。 用 1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取 1:10 樣品勻液1 mL，沿管壁緩慢注于盛有 9 mL 稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用 1 支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成 1:100 的樣品勻液。 按 6.1.3 操作程序，制備 10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用 1 次1 mL 無菌吸管或吸頭。 根據(jù)對樣品污染狀況的估計，選擇 2 個3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進行 10 倍遞增稀釋時，吸取 1 mL 樣品勻

37、液于無菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取 1 mL 空白稀釋液加入兩個無菌平皿內(nèi)作空白對照。 及時將 15 mL20 mL 冷卻至 46 的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于 46 ±1 恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。 4.2 培養(yǎng) 待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36 ±1 培養(yǎng)48 h±2 h。水產(chǎn)品 30 ±1 培養(yǎng) 72 h±3 h。 如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約 4 mL），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按 條件進行培養(yǎng)。 4.3 菌落計數(shù) 可用肉眼觀察，必要

38、時用放大鏡或菌落計數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計數(shù)以菌落形成單位（colony-forming units，CFU）表示。 選取菌落數(shù)在 30 CFU300 CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于 30 CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于 300 CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。 其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數(shù)。 當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。 5 結(jié)果與報告5.1 菌落總數(shù)的計算方法 若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每