實(shí)驗(yàn)二、DNA的原位顯示—Feulgen染色法目的要求1、

1、FeulgenFeulgen反應(yīng)的一般步驟：反應(yīng)的一般步驟： 1 1、材料準(zhǔn)備：取一洋蔥鱗莖，置于盛滿(mǎn)水的小燒、材料準(zhǔn)備：取一洋蔥鱗莖，置于盛滿(mǎn)水的小燒杯上使其長(zhǎng)出新根。待根尖長(zhǎng)杯上使其長(zhǎng)出新根。待根尖長(zhǎng)2cm2cm左右時(shí)，于上左右時(shí)，于上午午9 9時(shí)剪下根尖用時(shí)剪下根尖用CarnoyCarnoy固定液固定、保存。固定液固定、保存。（固定的目的是防止細(xì)胞死后變化，保持胞內(nèi)固固定的目的是防止細(xì)胞死后變化，保持胞內(nèi)固有結(jié)構(gòu)與狀態(tài)有結(jié)構(gòu)與狀態(tài)）2 2、水解：從冰箱取出預(yù)先準(zhǔn)備好的洋蔥根尖，用、水解：從冰箱取出預(yù)先準(zhǔn)備好的洋蔥根尖，用清水洗清水洗3 3次，每次次，每次2min2min，換，換1M 1M

2、 HClHCl洗一次，傾去，洗一次，傾去，換入預(yù)熱換入預(yù)熱6060的的1M 1M HClHCl，放入，放入恒溫水浴鍋中在恒溫水浴鍋中在60600.50.5下水解下水解8-15min8-15min（視材料而定）。（視材料而定）。3 3、吸去熱、吸去熱1M 1M HClHCl，換入冷，換入冷1M 1M HClHCl洗一次，用蒸餾洗一次，用蒸餾水漂洗水漂洗3 3次，每次次，每次2min2min。4 4、SchiffSchiff液黑暗條件下染色液黑暗條件下染色30-50min30-50min（避光避光: :因?yàn)橐驗(yàn)樯刹环€(wěn)定的物質(zhì)，見(jiàn)光很容易分生成不穩(wěn)定的物質(zhì)，見(jiàn)光很容易分解解）。）。5 5、用、用新

3、配制新配制的亞硫酸氫鈉溶液洗的亞硫酸氫鈉溶液洗3 3次，每次次，每次約約5min5min。（。（洗去無(wú)色品紅，在自然條件下洗去無(wú)色品紅，在自然條件下易還原為堿性品紅易還原為堿性品紅）6 6、用清水洗、用清水洗2 2次，每次次，每次2min2min。7 7、取一根尖置于載玻片上，切下、取一根尖置于載玻片上，切下生長(zhǎng)區(qū)部位生長(zhǎng)區(qū)部位（染成紫紅色），加一滴清水或（染成紫紅色），加一滴清水或4.5%4.5%醋酸醋酸水溶液，加蓋玻片，輕壓。水溶液，加蓋玻片，輕壓。8 8、鏡檢：、鏡檢：細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞內(nèi)DNADNA的部位呈紫紅色的部位呈紫紅色。9 9、繪圖、繪圖水解是本實(shí)驗(yàn)成敗關(guān)鍵之一。水解時(shí)間和溫度水解是本實(shí)驗(yàn)成敗關(guān)鍵之一。水解時(shí)間和溫度一定要合適，如果溫度過(guò)高或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，造成一定要合適，如果溫度過(guò)高或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，造成水解過(guò)度，醣與醛基之間的鍵被破壞，醛基流水解過(guò)度，醣與醛基之間的鍵被破壞，醛基流失到水解液中，反之，不能出現(xiàn)潛在的醛基，失到水解液中，反之，不能出現(xiàn)潛在的醛基，都不能呈現(xiàn)顏色反應(yīng)。都不能呈現(xiàn)顏色反應(yīng)。 用用SchiffSchiff試劑染色前，蒸餾水的殘留不宜過(guò)多，試劑染色前，蒸餾水的殘留不宜過(guò)多，否則會(huì)使染色劑濃度降低。否則會(huì)使染色劑濃度降低。漂洗時(shí)，所用的亞硫酸水，最好在每次實(shí)驗(yàn)前漂洗時(shí)，所用的亞硫酸水，最好在每