降血壓肽ACE抑制活性及降壓功能研究

1、降血壓肽ACE抑制活性及降壓功能研究【摘要】 探討了ACE（血管緊張素轉(zhuǎn)換酶）抑制活性的檢測方法, 并以貽貝為原料制取降血壓肽，研究了不同酶解條件對其ACE抑制活性的影響，然后利用SHR飼喂試驗檢測其降血壓活性。結(jié)果表明，降血壓肽有較好的ACE抑制活性：其ACE抑制率可達88.08%。同時動物試驗表明其降壓效果明顯, 在SHR飼喂后26h之內(nèi)均有顯著降壓效果，平均降低為1628mmHg。 【關(guān)鍵詞】 降血壓肽 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制活性 降血壓 【Abstract】 The testing method of ACE inhibitory activities was studied, and

2、the antihypertensive peptides were derived from mytilus coruscus, then the ACE inhibitory activities were studied on different conditions; the antihypertensive effects were tested by SHR-feeding method. The results were as follows: the antihypertensive peptide had strong ACE inhibitory activities, t

3、he ACE inhibitory ratio was 88.08%, and the antihypertensive effect was obvious in 2 to 6 hours, the average reduced breadth is 1628mmHg. 【Key words】 antihypertensive peptide；angiotensin-converting enzyme（ACE）inhibitory activities； antihypertensive effects 降血壓肽實質(zhì)是一種血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制肽，它通過抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE），阻礙有

4、升高血壓作用的血管緊張素的生成，同時抑制具有降血壓作用的血管舒緩激肽的分解，從而使血壓下降，此即降血壓肽的作用機理1。 近年來國際學(xué)術(shù)界對降血壓肽的研究較多，已報道有以牛奶、乳酪、大豆、魚肉、蔬菜、小麥蛋白等食物為原料，經(jīng)蛋白酶酶解產(chǎn)生了具有較好ACE抑制活性的降血壓肽27。Eiji等8水解了12種食物蛋白進一步研究發(fā)現(xiàn)，從魚肉、蝦、蟹等水產(chǎn)動物蛋白中制得的降血壓肽其降壓活性優(yōu)于其他食物性蛋白。我國在降血壓肽領(lǐng)域的研究起步相對較晚，現(xiàn)有報道以大豆、蛇毒、老酒、茶葉為原料，對降血壓肽的制備工藝和活性基團等方面進行了一定研究913；對于最適合用于降血壓肽制備的水產(chǎn)動物蛋白的開發(fā)研究，則鮮有報道。

5、貽貝，又名海紅、淡菜，近年來人工養(yǎng)殖取得重大成功，在我國東南沿海產(chǎn)量豐富。但由于加工手段和技術(shù)的落后，在收獲季節(jié)產(chǎn)出的大量貽貝因得不到及時處理而造成極大浪費14。本研究以貽貝為原料，經(jīng)酶解、活性修飾等方法制取降血壓肽，然后利用SHR飼喂試驗檢測其降血壓活性，并分析了其相對分子質(zhì)量分布和氨基酸組成，以期為貽貝酶解降血壓肽的開發(fā)提供理論探索。 1 材料與方法 1.1 材料與設(shè)備 貽貝：市售。ACE標準樣品：Sigma試劑。復(fù)合生物酶P1 （本項目組自行配制），其組分均購自上海生物化學(xué)試劑公司。降血壓肽制備所需其他試劑，均為生化純，上海生物化學(xué)試劑公司提供。降壓功能試驗用動物：SHR（自發(fā)性高血壓大

6、鼠），上海高血壓研究所提供。儀器設(shè)備：HPLC（Waters 600高效液相色譜儀），大鼠血壓儀（RBP-1B）及常用試驗儀器若干。 1.2 實驗步驟 按上面實驗所確定的酶解條件，取新鮮貽貝去殼，搗碎，酶解，純化，然后加入活性修飾劑MA1, 提取，冷凍干燥，制備降血壓肽，以備分析檢測之用。 將制備的降血壓肽樣品利用SHR飼喂試驗來分析其降壓活性。 1.3 實驗方法 將各酶解液反應(yīng)值與空白樣品對照，分析所得酶解降壓肽的ACE抑制率P。計算公式為： P=AA （control） A% 測量方法：尾動脈法測量收縮壓SBP。 2 結(jié)果 2.1 ACE抑制活性檢測方法的研究 不同濃度Hippuric A

7、cid吸光值結(jié)果見表1、表2及圖1、圖2。表1 不同濃度Hippuric Acid吸光值 （0.010.05mM）表2 不同濃度Hippuric Acid吸光值 （0.100.50mM） 2.2 酶解條件對降血壓肽ACE抑制率的影響 將在不同的酶解條件下處理所得降血壓肽樣品按前述方法進行ACE抑制活性的檢測,分析其ACE活性抑制率,研究不同酶解條件對降血壓肽ACE抑制率的影響,結(jié)果見表3。 2.3 降血壓肽的降壓效果 降血壓肽樣品動物試驗，將樣品以3.0g/kg體重的樣品劑量進行灌喂。灌喂前和灌喂之后第2、4、6、8、10h分別檢測收縮壓一次，記錄各血壓值。結(jié)果見表4。 2.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用各組別服用降血壓肽前后收縮壓的變化情況來反映降壓效果，數(shù)據(jù)以xs表示，采用SPSS11