雞傳染性喉氣管炎抗原抗體復合物疫苗的研究.docx

1、雞傳染性喉氣管炎抗原抗體復合物疫苗的研究王雅華】，錢景富I,楊澤彬2,梁軍3（1.遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術學院，遼寧營口115009;2.吉林正業(yè)生物制品股份有限公司，吉林吉林132101；3.吉林省四平市鐵東區(qū)畜牧業(yè)管理局，吉林四平136000）摘要：用傳染性喉氣管炎病毒K317株作為復合物疫苗抗原，與傳染性喉氣管炎抗體配制不同比例的5種抗原抗體復合物疫苗，用1周齡SPF推雞進行免疫效果試驗。結(jié)果表明，傳染性喉氣管炎病毒K3】7株與特異性抗體制備的復合物疫苗，可以明顯降低疫苗免疫接種引起的毒副作用.復合物疫苗安全性高，免疫效果總體上較ITLK317株常規(guī)活苗更好。關鍵詞：雞傳染性喉氣管炎病毒；抗原抗

2、體復合物疫苗；免疫效果中圖分類號：S831文獻標識碼：A文章編號:1671-0517（2014）02-0001-02雞傳染性喉氣管炎（A1LT）自1925年在美國首次報道后，現(xiàn)已遍及世界各地。本病傳播快，死亡率較高，在我國較多地區(qū)發(fā)生和流行，已成為養(yǎng)雞業(yè)的重大疫病之一AILT是由皰疹病毒引起的一種急性呼吸道傳染病，導致病雞呼吸困難、咳嗽、咳出含有血樣的滲出物。喉部及氣管粘膜出現(xiàn)腫脹、出血和糜爛。目前，對本病的防制關鍵是做好雞群的免疫工作，但是雞群接種傳喉疫苗容易引起呼吸道癥狀的不良反應，致使一些養(yǎng)殖戶不愿意接種疫苗，非免疫雞群常因感染野毒而發(fā)病，藥物治療很難奏效，給養(yǎng)雞業(yè)造成了一定的經(jīng)濟損失。

3、面對常規(guī)疫苗的缺陷，疫苗的研制仍將朝著安全有效、不受母源抗體干擾、免疫期長的方向發(fā)展。20世紀90年代初，用特異抗血清（或抗體）與病毒按一定比例混合作為新的疫苗，已成功地在家禽中獲得應用71?？乖贵w復合物疫苗優(yōu)點在于安全性高和免疫效果比常規(guī)疫苗更好將刁。本試驗以傳染性喉氣管炎K317株病毒作為抗原，與傳染性喉氣管炎抗體配置了不同比例的復合物疫苗，分別免疫7日齡SPF雛雞，將其與AILT常規(guī)活疫苗在安全性和免疫效果等方面進行比較。1材料與方法1.1材料收稿日期：2013-12-05作者簡介：王雅華（1966-）,女，碩士，教授，主要從事動物疫病防治方面的研究?；痦椖浚哼|寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術學院院級

4、課（2011-2013年）。ILT毒種K317株、1LT強毒匈牙利株、11日齡SPF雞胚（購于梅里亞動物保健有限公司）、I周齡、3周齡SPF雞（在實驗室自行孵化出SPF小雞飼養(yǎng)于隔離器中）。毒種、強毒均來自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。1.2方法ILT抗原制備以傳染性喉氣管炎K317株為種毒，用滅菌生理鹽水適當稀釋、接種于11日齡SPF雞胚絨毛尿囊膜上，每胚0.2mL,接種后收集96h的活胚，無菌收取有病斑的雞胚絨毛尿囊膜，即雞胚絨毛尿囊膜水腫并形成邊緣隆起、中心低陷的灰白色痘樣壞死灶，并能在周圍細胞中檢出核內(nèi)包涵體。收取的絨毛尿囊膜經(jīng)無菌檢驗合格后，充分研磨或搗碎，制成勻漿，濾過即為病毒液。經(jīng)測定制備

5、的病毒液毒價為lOEIDJOImLo1LT抗體制備免疫3周齡SPF雞，用自備ILT抗原制成油乳劑滅活疫苗，胸部肌肉分點注射，免疫3次，每次間隔1周，第4次使用自備ILT活毒疫苗加強免疫1次，2周后心臟采血，5000r/min離心10min,取淡黃上清液，于56T水浴滅活30min,即為ILT抗體，于-30T凍存?？寡褰?jīng)無菌檢驗及效價測定合格后，用于制備復合物疫苗的抗體。1.2.1 ILT復合物疫苗制備固定ILT抗原含量,分別加入不同體積的ILT抗體，配制成5組抗原抗體復合物疫苗，抗原抗體比例分別為1：0.5、1：0.75、1:1.0、1:1.25、1:1.5,室溫充分混合。常規(guī)ILT活疫苗用

6、制備的抗原配制。復合疫苗與常規(guī)ILT活疫苗所含的抗原量相同。1.2.4ILT復合物疫苗效力檢臉按中國獸藥典叫中傳染性喉氣管炎K317株活疫苗要求進行效力檢驗。按常規(guī)方法測定ILT復合物疫苗的Elik（雞胚半數(shù)感染雖）。1.2.5免疫試驗7日齡SPF雞，隨機分7蛆，每組15只，分別飼養(yǎng)于隔離器內(nèi)。15組分別滴眼接種復合物疫苗；第6組滴眼接種常規(guī)活疫苗；第7組為空白對照。觀察雞群的精神狀態(tài)。1.2.6攻毒試驗免疫3周后連同對照進行攻毒試驗，雞各氣管內(nèi)注射匈牙利株ITL強毒，劑度為lOEIDJOImL只，每組10只，攻毒后觀察10d,記錄各組雞發(fā)病情況，并剖檢觀察病死雞的病理變化。2結(jié)果2.1復合物

7、疫苗效力檢驗結(jié)果經(jīng)試驗測定，復合物疫苗毒價從（Tn/0.2ml下降至10如/0.2ml,K317株蚩規(guī)活疫苗毒價為10，旺叫0.2mL2.2免疫試驗結(jié)果疫苗接種后1、2組部分雞出現(xiàn)眼紅流淚現(xiàn)象，于第7d恢復正常.3、4、5組雞接種后無任何反應。常規(guī)活疫苗組.接種后第4d有8只開始出現(xiàn)輕度眼炎，第6d有1只雞出現(xiàn)明顯的呼吸道癥狀.表現(xiàn)為張嘴喘，伸頸甩頭.于第9d死亡。死亡的雞只剖檢后均見喉頭及氣管出血，經(jīng)雞胚病毒分離培養(yǎng)及病毒中和試驗，證明該病毒為傳染性喉氣管炎病毒。對照組的雞群一直保持健康狀態(tài)（表1）。表1疫苗免疫后各組贈群反應情況組別免疫博數(shù)發(fā)病數(shù)死亡數(shù)疫苗反應率（%）1158053.321

8、55033.333150004150005150006151066.72.3攻毒試驗結(jié)果免疫接種后21d連同空白對照雞經(jīng)氣管攻毒,每組10只。15組免疫雞攻毒后發(fā)病率為20%80%不等；常規(guī)疫苗組攻毒后發(fā)病率為40%;空白組對照雞100%出現(xiàn)眼炎和呼吸道癥狀，精神食欲受影響，死亡率為20%,剖檢死雞則呈現(xiàn)典型的傳染性喉氣管炎病變（表2）。衰2試驗迫免疫3周后經(jīng)管攻毒后各組沌群發(fā)病情況納別攻毒雞數(shù)發(fā)病數(shù)死亡數(shù)疫苗保護率（）11081202106040310505041020805103070610406071010203討論抗原抗體夏合物疫苗獨特性在于抗原抗體復合后，抗體起著延緩病毒釋放的作用抗

9、原與抗體的最佳配比是制備復合物疫苗的關鍵。Pokric等E認為復合物中抗體過量會抑制復合物對免疫淋巴細胞的刺激作用，復合物中抗原稍過量或抗原抗體等價，抗原抗體復合物疫苗才能產(chǎn)生有效的免疫刺激。傳染性喉氣管炎K317株活疫苗一般在疫區(qū)使用，由于毒力較強.毒副作用大，只限于5周齡以上的雞使用。本試驗用ITLK317株病毒來研制抗原抗體復合物疫苗，試驗結(jié)果表明.接種7日齡SPF雞，復合物疫苗3、4、5試驗雞無異常反應，K317株常規(guī)活疫苗接種后80%試驗雞出現(xiàn)疫苗反應。攻毒后，復合物疫苗4組僅有1只雞出現(xiàn)發(fā)病情況.常規(guī)活苗有4只雞發(fā)病。這一結(jié)果提示，傳染性喉氣管炎K317株病毒和AITL抗體的最佳配

10、比，可以降低復合物疫苗免疫接種引起的毒副作用，安全性高.免疫效果總體上較ITLK317株常規(guī)活苗更好。本試驗首次應用ITLK317株病毒配制抗原抗體復合物疫苗，對復合物疫苗中抗原抗體的比例只是進行了初步的探索，復合物疫苗的安全性、免疫效果與抗原抗體的比例關系，還有待更深入的研究。參考文獻：1殷震,劉景華.動物病毒學MJJ匕京:科學出版社,1997.2（美）Y.M.Saif主編/蘇敬良等主.禽病學M第12版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版ft.2011.3章振華，姜北宇,李林等.低毒力新城疫抗原抗體復合物疫苗研究J.動物醫(yī)學進展,2008.29（11）:43-46.4馬保華，畢英佐.抗原-抗體復合物疫苗UJ

11、.豬與肉，1999,4:48-50.（卜轉(zhuǎn)第12頁）產(chǎn)生振蕩。雪景中雪不應該是純白，應該在高亮度中填加細節(jié)。還要注意圖像應用在什么地方，如果要應用于視頻或幻燈片上則使用RGB模式，如果要用于印刷則使用CMYK模式。調(diào)色時，可以對每個通道單獨調(diào)整，很多圖像不是所有顏色都偏色，大多數(shù)是只偏一兩種，對單個通道進行調(diào)整，可以根據(jù)具體情況調(diào)整色彩和細節(jié)。不要對某一固定的區(qū)域做顏色調(diào)整，如果發(fā)現(xiàn)圖像在某一區(qū)域偏色，那么通常整幅圖像都偏色.而不是人眼看到的那樣只有一處偏色，對圖像做整體的調(diào)整不但能消除色偏，還能把不被注意的細節(jié)進行調(diào)節(jié)。另外，還要注意圖像整體的色調(diào)，色調(diào)是指一幅圖像中色彩的總體傾向，是總的色

12、彩效果。如在秋景中，金色的麥浪被籠罩在太陽光中，呈現(xiàn)金紅色色調(diào)；或者是溫馨的家居中，呈現(xiàn)淡黃色色調(diào)；或者是夜景中景物被朦朧在一片淡淡的月光之中，呈現(xiàn)淡藍色色調(diào)；色調(diào)在冷暖方面分為曖色調(diào)和冷色調(diào)，紅色、黃色、橙色為暖色調(diào)，象征著太陽、烈火、熱情、奔放，藍色、青色為冷色調(diào)，象征大海、雪山、冷漠、蕭條，黑色、白色、綠色、紫色為中性色調(diào)，暖色調(diào)與冷色調(diào)也不是絕對的，比如，粉紅和正紅在一起，粉紅被看作是冷色，而粉紅和紫色在一起就被看作是暖色。除了以上提到的色階、曲線、通道外，常用的調(diào)色工具還有色彩平衡、色相/飽和度、可選顏色等等，都是基于以上原理。另外，在實際應用中，盡量不要在圖像的原有圖層中做調(diào)整，這

13、樣調(diào)整會損失圖像原來的像素，而是應該運用新建調(diào)整圖層方式在原有圖層上方調(diào)整，這樣既能達到效果，又不毀壞原圖像，而且容易對效果做整體或部分的靈活修改和刪除。PHOTOSHOP是一款功能非常強大的圖像處理軟件.要想把圖像處理的更好，除了有扎實的理論做基礎，還需要勤動手，多分析，積累豐富的經(jīng)驗，這樣在實際應用中才能運用自如。參考文獻：11張0林章瓊，戴風光，付朝.PhotoshopCS2圖像設計教程M.北京:中國鐵道出版社,2007.2 耿洪杰.Photoshop數(shù)碼人像攝影修色圣典MJ.北京；中國電力出版社,2013.3 胡靖.Photoshop色彩調(diào)整技巧探析J.華章,2010,(25).(上接

14、第2頁)5CRAIGEW病毒-抗體復合物疫苗應用研究進展幾趙有編譯.國外備科技,1998,25(2):41-42.6J畢英佐，忡永長，呂英姿，等.傳染性囊病抗原-抗體復合苗免疫維雞的效果J.華南農(nóng)業(yè)大學學報,2000,21(1):75-77,|7李永紅，畢英佐,曹永長.雞新城疫抗原抗體復合物疫苗的研究J.華南農(nóng)業(yè)大學學報,2004,25(1):88-91.8HaddadEE,WhitflICE,AvakianAP,etal.EfficacyofanovelinfectionsbursaldiseasevirusimmunecomplexvaccineinbroilerchickensJJ.Av

15、ianDisease,1997,41:882-889.9宋立芹，蔣桃珍,陳光華，等.雞傳染性法氏囊病免疫復合物疫苗的安全性和免疫效力試臆J|.中國料藥雜志,2004,38(7):9-11.110中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典S.中國農(nóng)業(yè)出版社,2010.11POKRICB.SLADICDJUROSS.eiaLAppliaiionoftheimmunecomlcxforimmuneprotectionagainstviraldiseaseJ.Vaccine,1993,11(6)：655-659.StudyonAntigen-AntibodyComplexVaccineagainstAvi

16、anInfectiousLaryngotracheitisWANGYahual,QIANJingful,YANGZebin2,LIANGJun3(1.UaoningAgriculluralCollege,Yingkou115009,China;2.JilinZhengyeBiologicalproductsco.LTD,Jilin132101.China;3.JilinprovinceSiPingAnimalHusbandryAdministrationofTieDongDistrictJilinProvince.Siping136000.China)Abstract：Wecompounded

17、5kindsofdiferenlproportions'antigen-anlibodycomplexesvaccine,whatweusedcomplexofinfectiouslaryngotracheitisvirusvaccineantigens,K317strainswithinlectiouslaryngotracheitisantibody.Thenwetestimmuneeffecton1weeksofSPFchickens.Theresultsshowedthat:thepreparationofcomplexvaccinewhatweusedK317infectiouslaryngotracheitiftvimsstrainsandspecificantibodiestocom