腫瘤患者紅細(xì)胞免疫功能與SAPO

1、腫瘤患者紅細(xì)胞免疫功能與SAPO                 作者：王廣蘭,曹陽(yáng),張長(zhǎng)遠(yuǎn),郭同生,徐萬(wàn)青 【關(guān)鍵詞】 腫瘤【摘要】 目的 探討腫瘤患者紅細(xì)胞免疫功能與SAPO-1/Fas、TNF-、NO表達(dá)水平的相關(guān)性及相互作用。方法 采用酵母菌-紅細(xì)胞免疫黏附試驗(yàn)，對(duì)45例化療前和17例化療后病情緩解者進(jìn)行了紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)試驗(yàn)（RBC-C3bRR）和紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)試驗(yàn)（RBC-ICR）及ELISA法對(duì)107例腫瘤患者及

2、22例健康人進(jìn)行了SAPO-1/Fas的檢測(cè)，其中部分進(jìn)行了TNF-、NO檢測(cè)。結(jié)果 腫瘤患者血清SAPO-1/Fas表達(dá)水平明顯高于健康對(duì)照組（P<0.001），且與腫瘤種類無(wú)關(guān)；17例化療后病情緩解者SAPO-1/Fas表達(dá)水平比化療前顯著降低(P<0.05)。45例和17例腫瘤患者血清同時(shí)檢測(cè)SAPO-1/Fas、TNF-表達(dá)水平及SAPO-1/Fas、NO含量并進(jìn)行單因素直線相關(guān)分析，分別為r=0.76，P<0.05，r=0.72，P<0.05，呈顯著正相關(guān)。RBC-C3bRR明顯降低，45例腫瘤患者化療前又明顯低于17例病情緩解者(P<0.01)，RBC

3、-ICR明顯高于健康人，45例化療前腫瘤患者RBC-ICR明顯高于17例化療后病情緩解者(P<0.01)。結(jié)論 腫瘤患者RBC-ICR和SAPO-1/Fas、TNF-、NO表達(dá)水平明顯增高，呈顯著正相關(guān)，RBC-C3bRR明顯降低。為研究紅細(xì)胞免疫與淋巴細(xì)胞免疫的相互關(guān)系及腫瘤治療提供了新的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。【關(guān)鍵詞】 腫瘤；SAPO-1/Fas；紅細(xì)胞免疫；1型補(bǔ)體受體細(xì)胞凋亡（apoptosis，APO）和紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)是機(jī)體清除感染、變異、衰老的細(xì)胞，維持自身正常生理平衡的一種調(diào)節(jié)方式；同時(shí)腫瘤細(xì)胞及其相關(guān)抗原可能直接旁路激活補(bǔ)體，吸引紅細(xì)胞（RBC） 1 型補(bǔ)體受體（CR1）免

4、疫黏附腫瘤細(xì)胞和相關(guān)抗原，并將它們運(yùn)輸至肝脾網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，由巨噬細(xì)胞銷毀1。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)APO-1與其配體（FasL）通常被認(rèn)為是致死基因，因?yàn)樗麄兊南嗷プ饔猛鶎?dǎo)致表達(dá)APO-1的細(xì)胞發(fā)生APO而受到人們的廣泛關(guān)注。有研究報(bào)道2，人類許多惡性腫瘤表現(xiàn)為APO功能下降。在腫瘤患者免疫活性細(xì)胞如致敏T淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞（NK）等通過(guò)Fas系統(tǒng)活化介導(dǎo)細(xì)胞毒作用，以凋亡方式清除腫瘤細(xì)胞。免疫活性細(xì)胞通過(guò)其表面的FasL結(jié)合表達(dá)Fas的靶細(xì)胞，從而使其凋亡，而APO-1可與FasL結(jié)合，阻礙了靶細(xì)胞凋亡。同時(shí)一氧化氮（NO）含量超量也可引起基因突變和誘發(fā)腫瘤。本研究采用酵母菌-紅細(xì)胞免疫黏附

5、試驗(yàn)進(jìn)行了紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)試驗(yàn)（RBC-C3bRR）和紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)試驗(yàn)（RBC-ICR）3及ELISA法測(cè)定SAPO-1/Fas分子，并對(duì)NO含量和腫瘤壞死因子（TNF-）的相關(guān)性進(jìn)行了分析研究 ,腫瘤患者紅細(xì)胞免疫功能與SAPO-1/Fas、TNF-、NO表達(dá)水平的實(shí)驗(yàn)研究 ?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。1 材料與方法1.1 研究對(duì)象 107例腫瘤患者，男80例，女27例，平均年齡55.48歲，患者均為我院19992004年經(jīng)臨床和實(shí)驗(yàn)檢查確診的住院患者。22例健康對(duì)照組血清來(lái)自健康體檢人群，男18例，女4例，平均年齡22.27歲。1.2 材料保存（同時(shí)取肝素抗凝血1ml用于紅細(xì)胞免疫黏附

6、試驗(yàn)）。檢測(cè) 以雙抗夾心ELISA法，購(gòu)自邦定公司，按說(shuō)明書操作（自行包被）。1.3 方法×107/ml應(yīng)用液備用。×108/ml應(yīng)用液備用。水浴30min。取出用手輕輕搖均，每管各加0.1ml生理鹽水，混勻后再各加0.25戊二醛0.025ml，輕輕混勻，取1/3量，水平涂片，吹干，甲醇固定，瑞氏染色，濕片在高倍鏡下計(jì)數(shù)。1個(gè)紅細(xì)胞結(jié)上2個(gè)或2個(gè)以上酵母菌為1個(gè)花環(huán)。計(jì)數(shù)200個(gè)紅細(xì)胞計(jì)算出百分率。第一管為RBC-C3bRR，第二管為RBC-ICR。2 結(jié)果2.1 腫瘤患者與健康對(duì)照組血清SAPO-1/Fas表達(dá)水平及NO含量比較 見(jiàn)表1。結(jié)果顯示，腫瘤患者血清SAPO-1

7、/Fas表達(dá)水平及NO含量明顯高于健康對(duì)照組，并提腫瘤患者紅細(xì)胞免疫功能與SAPO-1/Fas、TNF-、NO表達(dá)水平的實(shí)驗(yàn)研究(2) 且與腫瘤的種類無(wú)關(guān)。表1 腫瘤患者與健康對(duì)照組人血清SAPO-1/Fas表達(dá)水平及NO含量比 （略）注：各種腫瘤之間比較P0.05；與對(duì)照組比較，P均0.0012.2 腫瘤患者化療前后SAPO-1/Fas水平變化 在接受化療前后分別測(cè)SAPO-1/Fas水平的患者中，化療后病情緩解17例，化療前的表達(dá)水平為(8.15±0.11)ng/ml，化療后的表達(dá)水平為(7.05±0.59)ng/ml，進(jìn)行配對(duì)資料t檢驗(yàn)，P0.05。提示SAPO-1/

8、Fas水平隨病情緩解顯著降低。因化療后部分病情進(jìn)展者例數(shù)少，未予統(tǒng)計(jì)。2.3 腫瘤患者與健康對(duì)照組TNF-水平比較 45例腫瘤患者血清TNF-水平(6.26±1.74)ng/ml，較健康對(duì)照組（22例）的(2.04±0.51)ng/ml顯著升高（P0.05）。腫瘤化療后患者血清TNF-水平呈下降趨勢(shì)，與腫瘤組比較差別無(wú)顯著性（P0.05）。2.4 腫瘤患者血清SAPO-1/Fas與TNF-、NO含量的相關(guān)性 將45例腫瘤患者同時(shí)測(cè)定的SAPO-1/Fas與TNF-血清水平及17例腫瘤患者同時(shí)測(cè)定SAPO-1/Fas與NO含量進(jìn)行單因素直線相關(guān)分析，分別為r=0.76,P0.

9、05,r=0.72,P0.05。結(jié)果顯示：腫瘤患者血清SAPO-1/Fas與TNF-、NO呈顯著正相關(guān)。2.5 腫瘤患者化療前后與健康人紅細(xì)胞CR1活性與攜帶IC含量變化比較 45例腫瘤患者化療前較健康對(duì)照組RBC-C3bRR明顯降低，而又明顯低于17例病情緩解患者，差異有非常顯著性（P0.01），而17例化療后病情緩解者和45例化療前腫瘤患者的RBC-ICR明顯高于健康對(duì)照組，45例化療前腫瘤患者RBC-ICR亦明顯高于17例化療后病情緩解者，其比較差異均有非常顯著性（P0.01），見(jiàn)表2。表2 健康對(duì)照組與化療前腫瘤患者及化療后病情緩解者結(jié)果比較 （略）注：與健康對(duì)照組比較，*P0.013

10、 討論Fas抗原又名APO-1，CD95，是細(xì)胞膜表面的一種凋亡相關(guān)分子，是一種由319個(gè)氨基酸組成的 型跨膜糖蛋白，屬于TNF和神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）受體家庭成員。主要以膜受體的（mFas）形成存在，也可出現(xiàn)可溶性APO-1（SAPO-1/Fas）分子。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)SAPO-1/Fas及紅細(xì)胞CR1在調(diào)節(jié)免疫功能維持體內(nèi)環(huán)境的平衡方面起著重要作用。資料顯示：SAPO-1/Fas和紅細(xì)胞免疫物質(zhì)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系4，5。Fas基因位于人第10號(hào)及小鼠第19號(hào)染色體，F(xiàn)as抗原為FasL的受體效應(yīng)細(xì)胞，F(xiàn)asL與靶細(xì)胞Fas結(jié)合時(shí)，可誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡；而FasL與Fas結(jié)合，又可以

11、控制這些靶細(xì)胞的凋亡。Cheng等研究發(fā)現(xiàn)一種突變的人Fas基因，可編碼產(chǎn)生一種SAPO-1。由于突變基因mRNA缺乏編碼Fas分子跨膜結(jié)構(gòu)區(qū)時(shí)，以SAPO-1/Fas的第6外顯子，阻斷了凋亡信號(hào)的傳導(dǎo)，導(dǎo)致體內(nèi)自身反應(yīng)T、B細(xì)胞的異常積聚。以同樣水平的該SAPO-1/Fas分子注射小鼠體內(nèi)時(shí)，可觀察到明顯的T細(xì)胞凋亡受抑68。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：腫瘤患者的SAPO-1/Fas水平上升，可競(jìng)爭(zhēng)性抑制FasL與Fas的相互作用，造成Fas介導(dǎo)的A      PO減少；適量的TNF-、NO對(duì)機(jī)體的保護(hù)反應(yīng)是必須的，但是，過(guò)量的TNF-、NO對(duì)機(jī)體產(chǎn)生損傷反應(yīng)。近

12、年來(lái)，許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)TNFa不但可以引起實(shí)體瘤發(fā)生出血性和缺血性壞死，還具有促進(jìn)某些細(xì)胞生長(zhǎng)的作用9。體外研究發(fā)現(xiàn)，TNF能夠使白血病細(xì)胞增殖，其作用機(jī)制是TNF作為APO的促發(fā)因子誘導(dǎo)APO。因此，SAPO-1/Fas與TNF-、NO、RBC-C3bRR、RBC-ICR的改變與免疫系統(tǒng)紊亂和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系；對(duì)腫瘤患者的病情進(jìn)展和轉(zhuǎn)歸具有重要的參考價(jià)值；也為解釋腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視及白血病的發(fā)生提供一個(gè)可能的機(jī)制。本研究尚發(fā)現(xiàn)腫瘤患者NO含量顯著增高，并與SAPO-1/Fas呈正相關(guān)。紅細(xì)胞免疫是機(jī)體免疫的一個(gè)重要的組成部分，與免疫系統(tǒng)內(nèi)其他細(xì)胞的功能存在一定相關(guān)性，RBC CR

13、1具有免疫黏附C3b等的能力，其活性的測(cè)定可作為評(píng)價(jià)RBC免疫黏附功能強(qiáng)弱的主要指標(biāo)。自1981年Siegel提出了紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)至今，研究發(fā)展迅速，大量研究表明紅細(xì)胞免疫參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。腫瘤患者的RBC CR1分子明顯減少時(shí)，可能與腫瘤細(xì)胞釋放抑制物，影響RBC CR1數(shù)量與活性，以及RBC CR1基因缺陷有關(guān)；如果RBC CR1清除循環(huán)免疫復(fù)合物（CIC）能力下降，必然使CIC含量增加，封閉淋巴細(xì)胞功能，使機(jī)體抗腫瘤特異免疫功能受損；RBC CR1天然免疫黏附活性下降，RBC不能及時(shí)將進(jìn)入血循環(huán)中的癌細(xì)胞和致病原運(yùn)至肝脾網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)銷毀，使癌細(xì)胞容易血行轉(zhuǎn)移，而且可使致癌因子各種抗

14、原存留血循環(huán)和病灶局部時(shí)間延長(zhǎng)，更易激活B淋巴細(xì)胞，產(chǎn)生更多封閉抗體和自身抗體，腫瘤患者往往在血循環(huán)中含有自身抗體，血清出現(xiàn)封閉抗體、CIC抑制腫瘤的適應(yīng)性免疫反應(yīng)和天然免疫炎癥的發(fā)生，可能與此有關(guān)1。本研究結(jié)果顯示：腫瘤患者RBC-C3b受體活性明顯降低，RBC-ICR明顯增高，與正常人比較差異有非常顯著性（P<0.01）；化療前腫瘤患者RBC-C3bRR明顯低于化療后病情緩解者，其RBC-ICR化療前腫瘤患者明顯高于化療后病情緩解者，差異均有非常顯著性P0.01）。證實(shí)了腫瘤患者化療前后的病情發(fā)展過(guò)程中，RBC-C3bRR和RBC-ICR有顯著變化。由于腫瘤患者產(chǎn)生大量的IC，占據(jù)R

15、BC膜上的C3b受體空位或破壞其受體，使RBC-C3b受體下降及活性降低，IC明顯增高。這種現(xiàn)象對(duì)腫瘤患者化療前后及病程觀察有重要參考價(jià)值。本研究對(duì)腫瘤患者的SAPO-1/Fas表達(dá)及TNF-、NO含量和紅細(xì)胞免疫相關(guān)性及相互作用進(jìn)行探討，結(jié)果反映了紅細(xì)胞免疫與SAPO-1/Fas表達(dá)及TNF-、NO血漿中的水平和RBC-ICR明顯增高，可抑制SAPO-1/Fas介導(dǎo)的APO使腫瘤細(xì)胞凋亡減少，說(shuō)明在腫瘤細(xì)胞發(fā)展過(guò)程中可能起著非常重要的作用，因此用于腫瘤患者的研究，通過(guò)合適而有效的途徑使用外源性的FasL與腫瘤細(xì)胞上的SAPO-1/Fas結(jié)合能起到殺傷腫瘤細(xì)胞的作用，增加腫瘤細(xì)胞APO。這將有

16、可能成為惡性腫瘤治療新的行之有效的方法，也為研究RBC免疫與淋巴細(xì)胞免疫的相互關(guān)系及腫瘤治療提供了新的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。【參考文獻(xiàn)】2 Wyllie AH. Apoptosis and regulation of cell numbers in normal and neoplastic tissues. Cancer Metastasis Rev，1992，11(2):95-103.4 Murakami M, Sasaki T, Miyata H, et al. Fas and fas ligand: expression and soluble circulating lerels in bile duct carcinoma. Oncol Rep,2004,11(6):1183-1186.5 郭峰，路永珍.紅細(xì)胞免疫學(xué)新探（上卷）.南京：南京大學(xué)出版社，1993，1-171.6 Cheng JH. Characterization of human fas gene:exon/intron organization and promoter region. Immunol,1995,154:1239-1245.8 王廣蘭,曹陽(yáng),郭