作物抗病性鑒定

1、實(shí)驗(yàn)六 作物抗病性鑒定作物抗病性鑒定 (evaluation of disease resistance ) 是作物抗病育種的重要根底，從抗原篩 選、后代選擇、直到品種推廣的全過(guò)程都離不開(kāi)抗病性鑒定。狹義的抗病性鑒定是評(píng)價(jià)寄主 品種、 品系或種質(zhì)對(duì)特定病害抵抗或感染程度， 廣義的抗病性鑒定還應(yīng)包括病原物的致病性 評(píng)價(jià)。鑒定方法包括自然鑒定、接種鑒定、田間成株鑒定、室內(nèi)苗期鑒定、離體鑒定及間接 鑒定等， 在實(shí)際工作中那么需根據(jù)作物、 病害種類， 目的要求和設(shè)備條件而定。 常用方法如下：1、田間自然鑒定自然發(fā)病條件下的田間鑒定是鑒定抗病性的最根本方法，尤其是在各種病害的常發(fā)區(qū)，進(jìn)行多年、多點(diǎn)的聯(lián)合

2、鑒定是一種有效方法。它能對(duì)育種材料或品種的 抗性進(jìn)行最全面、嚴(yán)格的考驗(yàn)。田間鑒定的方法因作物種類而異，大田作物的田間鑒定一般 要進(jìn)行人工接種，接種方法又因病菌而異。對(duì)于稻瘟病等氣傳病害，可分別用涂抹、噴霧及 注射等方法進(jìn)行接種，以使具有抗接觸、抗侵入等抗病機(jī)制的品種也得以發(fā)病。2、溫室或田間接種鑒定這種方法是將病原菌孢子或病毒直接接種到溫室或田間植株的葉片、果實(shí)或根上，它適合對(duì)所有作物進(jìn)行抗病性鑒定。由于抗病現(xiàn)象是寄主、病原物及 環(huán)境條件三者共同作用的結(jié)果，因此，這種鑒定結(jié)果也能真實(shí)地反映被鑒定材料的抗病性， 可靠性強(qiáng)。接種鑒定的技術(shù)規(guī)程包括育苗、接種體的制備 (病菌的別離、保存與抱子誘發(fā) )

3、及 接種 3 個(gè)環(huán)節(jié)，接種的方法有點(diǎn)滴法、噴霧法、摩擦法及注射法等。3、離體接種鑒定為鑒定以組織、細(xì)胞或分子水平的抗病機(jī)制為主的病害，可選用離體接種鑒定。具有操作簡(jiǎn)便，鑒定結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)。可同時(shí)分別鑒定同一材料對(duì)不同病原菌 的抗性。因直接從植株上取下子葉、葉片或果實(shí)進(jìn)行鑒定，不影響幼苗正常生長(zhǎng)發(fā)育和開(kāi)花 結(jié)實(shí)。鑒定方法不僅因作物、病菌種類而異，而且抗病性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)也因作物、病原菌的種類 不同而存在很大的差異。以下那么針對(duì)水稻稻瘟病、 小麥條銹病、 玉米大斑病等局部主要作物的最重要病害分別學(xué) 習(xí)各種鑒定方法和技術(shù)。I 水稻苗瘟抗性的鑒定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、熟悉水稻苗期稻瘟病的病癥特征。2、學(xué)習(xí)和初步掌

4、握水稻苗瘟抗性鑒定技術(shù)。、內(nèi)容說(shuō)明圖6-1 稻瘟病原菌水稻稻瘟病是一種世界性的真菌病害，被列為水稻三大病害之首。水稻稻瘟病具有傳播 快、發(fā)生范圍廣、流行頻率高、災(zāi)變嚴(yán) 重等特點(diǎn)。在我國(guó)水稻各稻區(qū)常年均有 不同程度的發(fā)病，給水稻生產(chǎn)帶來(lái)極大 的損失。稻瘟病原菌(圖6-1 )為稻梨孢菌(Pyricularic oryzae)， 無(wú)性世代：Pyrcularia grisea Sacc.，半知菌亞門梨孢 屬。有性世代：Magnaporthe grisea BarrYaegash，子囊菌亞門。分生孢子梗不分 枝，從寄主表皮或氣孔伸出，具28個(gè)洋梨形或棍棒形， 常有13個(gè)隔膜，基部有腳胞。ZA群、ZB群、

5、ZC群、ZD群、ZE群、ZF群和隔膜，基部稍膨大，淡褐色，向上色淡， 頂端曲狀，上生分生孢子。 分生孢子無(wú)色， 我國(guó)稻瘟病菌有7群43個(gè)生理小種，為ZG群，其中ZG小種為優(yōu)勢(shì)小種，分布最廣。稻瘟病在水稻整個(gè)生育階段皆可發(fā)生，具有為害時(shí)間長(zhǎng)、侵染部位多和病癥多樣性等特點(diǎn)。按其為害時(shí)期和部位的不同，可分為苗瘟、葉瘟、節(jié)瘟、穗頸瘟和谷粒瘟，其中以穗頸 瘟對(duì)產(chǎn)量的影響最大。稻株容易感病的生育期是4葉期、分蘗期和抽穗期。品種是稻瘟病發(fā)生和流行的根底。稻瘟病菌群體大、繁殖快，其高度的變異性使新的生 理小種不斷更替出現(xiàn)，導(dǎo)致選育的高抗品種很容易喪失抗性。因此，必須堅(jiān)持長(zhǎng)期研究病原 菌的變化，并不斷地選育新的

6、抗病品種。溫度和濕度是影響稻瘟病發(fā)生流行的主要環(huán)境條件，以氣溫為2528 C對(duì)菌絲發(fā)育、分生孢子形成最為適宜，相對(duì)濕度96%最適合病菌孢子的形成和侵入。陰雨連綿，日照缺乏或時(shí)晴時(shí)雨，或早晚有云霧或結(jié)露條件，病情擴(kuò)展迅速。光照對(duì)孢子形成、萌發(fā)及侵入都有抑 制作用，缺氧時(shí)孢子不能萌發(fā)。在飽和濕度和適溫條件下，病菌侵入稻葉后經(jīng)4d的潛育期就可出現(xiàn)病斑。偏施過(guò)施氮肥有利發(fā)病。放水早或長(zhǎng)期深灌根系發(fā)育差，抗病力弱發(fā)病重。稻瘟病的抗性鑒定方法可分自然誘發(fā)鑒定和人工接種鑒定兩種。其中人工接種鑒定根據(jù)菌株的接種方式不同，又可分為： 抗譜測(cè)定，即多個(gè)菌株單個(gè)接種； 多個(gè)菌株混合接種。自然誘發(fā)鑒定適于苗瘟、葉瘟穗

7、、頸瘟和枝梗瘟鑒定，人工接種鑒一般適于對(duì)苗瘟和葉 瘟的鑒定。一般來(lái)說(shuō)，苗瘟與穗瘟有極顯著正相關(guān)，因而抗瘟性鑒定常采用苗期人工接種鑒 定。但人工接種鑒定時(shí)，一般應(yīng)用多個(gè)種群代表小種的混合菌種，以增加鑒定準(zhǔn)確性和普遍性。三、材料儀器藥品1供試材料 供試水稻育種材料假設(shè)干以及抗病對(duì)照品種和感病對(duì)照品種各一個(gè)。 供試稻瘟病菌菌種 從當(dāng)?shù)厮鸭植紡V、致病力強(qiáng)的主要稻瘟病菌的代表性生理小 種假設(shè)干個(gè)。分別進(jìn)行小種培養(yǎng)繁殖。2儀器用品 病菌培養(yǎng)器具 高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、酒精燈、恒溫培養(yǎng)箱、三角瓶或茄子瓶 、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、搪瓷盆、紗布等。 菌液接種和制備器具 顯微鏡、載玻片、蓋玻片、搪瓷盤、普通專用噴霧

8、器或醫(yī)用 喉頭噴霧器、醫(yī)用皮下注射器、橡膠管和保溫、保濕的遮蔭設(shè)備。3病菌培養(yǎng)基 酵母淀粉瓊脂培養(yǎng)基酵母2g、可溶性淀粉 10g、瓊脂1520g，加水1000ml 。 大麥或高粱種子。四、方法步驟一人工接種鑒定1 菌種制備將供試稻瘟病菌菌種各生理小種分別培養(yǎng)，混合接種。2病原菌培養(yǎng)繁殖培養(yǎng)方法包括一級(jí)培養(yǎng)繁殖和二級(jí)培養(yǎng)繁殖兩個(gè)步驟： 一級(jí)培養(yǎng)繁殖 采用酵母淀粉瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)。 方法為：將瓊脂 1015g 放入 1000ml 水中加熱溶化，再加可溶性淀粉或煎糖10g ,酵母2g，裝入試管，經(jīng)消毒滅菌后，取出制成斜面，接種病原菌，放在2628 C恒溫箱中培養(yǎng) 10d左右即可取用。 二級(jí)培養(yǎng)繁殖 將

9、病原菌轉(zhuǎn)移到大麥或高粱粒培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)大繁殖，用于接種鑒定。其方法是將大麥粒加水后煮到半熟狀態(tài)或用水浸泡24h,然后倒去多余的水分，裝入三角瓶?jī)?nèi)或茄子瓶 ，高壓滅菌，滅菌后立即將麥粒搖散防止結(jié)塊。然后在無(wú)菌操作 條件下接種病菌，放在2628 C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)45d時(shí)應(yīng)搖動(dòng)三角瓶?jī)?nèi)的大麥粒，使菌絲生長(zhǎng)均勻。待灰色菌絲長(zhǎng)滿大麥粒并開(kāi)始變黑時(shí)，用自來(lái)水沖洗大麥粒上的菌絲，隨后攤放薄層于搪瓷盤中，盤上覆蓋12層紗布以保濕，置于2528 C變溫條件下培養(yǎng) 2d左右，即可見(jiàn)到麥粒上產(chǎn)生大量灰色的分生孢子，就可供接種使用。擴(kuò)大繁殖時(shí)，應(yīng)注意搪瓷盤內(nèi) 的濕度不宜過(guò)高，否那么只長(zhǎng)菌絲，較少產(chǎn)生分生孢子。

10、3育秧前期準(zhǔn)備每個(gè)盤中同時(shí)安排感病和抗病品種作對(duì)照。將各供試水稻材料的種子進(jìn)行粒選，各取 3040粒種子，經(jīng)消毒、沖洗、催芽后準(zhǔn)備播種。培育方法在盛有肥沃泥土的搪瓷盤中育秧。幼苗2葉期定株，每個(gè)材料選留10株生長(zhǎng)一致的秧苗。定株后酌施23次氮肥，最后一次施氮肥應(yīng)在接種前34d施用，使幼苗生長(zhǎng)嫩綠。如采用注射接種鑒定法，可在秧田中育秧，移植于大田后進(jìn)行接種鑒定。4 接種噴霧接種一般在34葉期。日平均氣溫2528 C和陰雨高濕，葉面長(zhǎng)時(shí)間12h以上常有水珠的時(shí)期接種，最有利于發(fā)病。具體步驟是：將產(chǎn)生不同病菌小種孢子的大麥粒放入盛有自來(lái)水的燒杯中攪拌，分別配制成孢子懸浮液，用100倍顯微鏡檢孢子密度

11、，平均每個(gè)視野應(yīng)有孢子2025個(gè)孢密度那么為2025萬(wàn)個(gè)/ml 。然后將不同生理小種的孢子懸浮液混合，用于接種。采用專用噴霧器噴 霧接種。噴霧時(shí)要將葉片充分均勻濕潤(rùn)。接種后，在2628 C下，用薄膜覆蓋保濕24小時(shí)。然后移至室外，在2030 C下保持高濕，培養(yǎng)7天，進(jìn)行病情鑒定。注射接種：一般在水稻67葉期分蘗進(jìn)行，接種的分蘗必須有一張未展開(kāi)的嫩心葉。 將按上述方法配制好孢子懸浮液，使用醫(yī)用皮下注射器從葉鞘外側(cè)注入孢子懸浮液，直到多余菌液從心葉中冒出為止。接種后7d調(diào)查植株的發(fā)病情況。二自然誘發(fā)鑒定該方法適于多霧天氣和陰雨的條件下的稻瘟病重病區(qū)，可種植鑒定材料，采用自然誘發(fā)抗病鑒定。具體操作：

12、將鑒定材料種植在重病區(qū)肥沃土壤上，施氮水平略高于當(dāng)?shù)刎S產(chǎn)田。如有必要可進(jìn)行人工田間接種，以誘導(dǎo)發(fā)病。每個(gè)鑒定材料一般栽植1020叢，可移栽或直播，重復(fù)三次。以當(dāng)?shù)乜?、感品種作對(duì)照。在鑒定區(qū)周圍應(yīng)種植假設(shè)干行咸感病的品種作誘發(fā)行，以 增加感染強(qiáng)度。保持高濕條件。三病情鑒定一般是接種后 7d即進(jìn)行病情鑒定，或當(dāng)感病對(duì)照品種到達(dá)高度發(fā)病時(shí)調(diào)查。并按全國(guó)水稻稻瘟病抗病性鑒定分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表6-1逐株鑒定和記載,表6-1 苗瘟和葉瘟抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)級(jí)另U抗性類型癥狀R抗病葉片上未見(jiàn)病斑或產(chǎn)生針頭狀或稍大褐點(diǎn)M中抗葉片上產(chǎn)生圓形或橢圓形病斑，中間灰白色，邊緣黃褐色，病斑大小在兩葉脈之間，病斑直徑在3mm以內(nèi)S感病

13、葉片上產(chǎn)生典型梭型病斑，中心灰白色，邊緣黃褐色，病斑超過(guò)兩條葉脈間的寬度然后用加權(quán)法求其平均病級(jí)。各級(jí)病株數(shù)各相應(yīng)病級(jí)數(shù) 病情指數(shù)=-鑒定總株數(shù)最高病級(jí)數(shù)國(guó)際水稻研究所采用10級(jí)制稻瘟病抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表 6-2 。表6-2 苗葉瘟抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)IRRI病級(jí)受害情況抗性水平0葉上無(wú)病斑高抗HR1病斑為針頭大小的褐點(diǎn)抗R2褐點(diǎn)稍大3圓形至橢圓形的灰色病斑，邊緣褐色，病斑直徑12mm中抗MR 4梭形病斑，長(zhǎng)12cm，通常局限于兩條葉脈間，受害面積不超過(guò)葉面積的52%6梭形病斑，受害面積不超過(guò)葉面積的10%感( MS)7梭形病斑，受害面積為葉面積的1125%感S8梭形病斑，受害面積為葉面積的2650%9

14、梭形病斑，受害面積為葉面積的5175%全葉枯死高感HS五、實(shí)驗(yàn)作業(yè)1 分組進(jìn)行稻瘟病的苗期人工噴霧接種鑒定。先配制病菌孢子懸浮液，在100倍顯微鏡下檢查孢子液濃度，即檢查3個(gè)視野內(nèi)的孢子數(shù)，明確是否符合所要求的孢子懸浮液。2.進(jìn)行噴霧接種和噴霧接種后的保溫、保濕和遮光等管理工作。3 接種7d后，進(jìn)行發(fā)病情況檢查，確定供試水稻品種的抗性。4. 水稻抗瘟性鑒定應(yīng)注意哪些問(wèn)題？II 小麥條銹病抗性鑒定、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、熟悉小麥條銹病的病癥特征。2、學(xué)習(xí)和初步掌握小麥條銹病抗性鑒定技術(shù)。、內(nèi)容說(shuō)明小麥銹病俗稱黃疸、麥疸等，分條銹病、葉銹病和稈銹病三種，其中條銹病是我國(guó)發(fā)生范圍最廣、危害最重的麥類病害，一般

15、減產(chǎn)25%75%，也是東北地區(qū)限制小麥增產(chǎn)的主要因素。小麥條銹病主要發(fā)生在葉片上，其次為葉鞘和莖上，穗部穎殼和莖上也可發(fā)生。病癥如圖6-2。病原菌為條形柄銹菌 Puccinia striiformis West .,擔(dān)子菌亞門柄銹菌屬。夏孢子球形或卵圓形，淡黃色，尺度為1828微米X 1824微米，壁厚l2微米，外表有微刺，發(fā)芽孔排列不規(guī)那么如圖6-3。冬孢子梭形或捧形，雙細(xì)胞，橫隔處有纜縮， 頂端平截或略圓，褐色,下端色淺，尺度為3053微米X 1220微米，頂端壁厚 35微米，具短柄如圖 6-4。圖6-2條銹病病癥圖6-3條銹病夏抱子堆圖6-4條銹病冬抱子堆條銹病的發(fā)生流行，取決于小麥品種

16、的抗病性、菌源和菌量及氣候條件。選育和栽培抗 銹品種是防治小麥銹病危害的一項(xiàng)最根本、最有效的措施，近幾年來(lái)，隨著小麥群體多樣化 的實(shí)施，具有累加毒性、毒性譜更寬的條銹病菌新的毒性小種的不斷產(chǎn)生和開(kāi)展，許多小麥 高抗品種逐漸喪失其抗病性，使我國(guó)大面積小麥生產(chǎn)品種而臨嚴(yán)重的抗性危機(jī)。從事小麥育種工作必須掌握對(duì)銹病抗性的鑒定方法。小麥品種抗條銹病的表現(xiàn)形式， 按其對(duì)條銹菌的?；杂袩o(wú)， 可以劃分為?；钥剐院?非專化性抗性兩大類。 ?；钥剐灾饕憩F(xiàn)為過(guò)敏性的壞死反響，非?；钥剐砸话惚憩F(xiàn)為抗接觸、抗侵入、抗擴(kuò)展以及除過(guò)敏性反響以外的其它生理生化抗病特性。銹病的發(fā)生受到小麥材料的抗病能力、病原物的致

17、病力和發(fā)病環(huán)境的影響，銹病在自然條件下，并非每年每地均嚴(yán)重發(fā)生。因此，在進(jìn)行抗銹病育種時(shí)，除在發(fā)病的麥田中進(jìn)行直 接鑒定外，還必須人工接種鑒定，如米用苗期鑒定和成株期鑒定。一般來(lái)說(shuō)苗期抗病的品種 大多數(shù)成株期仍然表現(xiàn)抗病，變?yōu)楦胁〉闹徽己苄”壤?，因此苗期鑒定有重要意義。幼苗鑒 定在溫室中進(jìn)行，于充分發(fā)病后進(jìn)行鑒定。成株期鑒定一般在田間進(jìn)行。因小麥條銹病的危 害主要在成株期， 故鑒定結(jié)果最能反響出生產(chǎn)需要。 成株期抗性鑒定在一些條銹病常年發(fā)生 較重的地區(qū)可以依靠自然發(fā)病， 但為了保證充分發(fā)病得到可靠的結(jié)果， 也有必要進(jìn)行人工接 種。本實(shí)驗(yàn)將選用苗期鑒定和成株期鑒定兩種人工接種鑒定。三、材料儀器1

18、供試材料 小麥育種材料、感病對(duì)照品種、抗病對(duì)照品種；供試條銹病菌種選用 致病力強(qiáng)、分布廣的不同生理小種。2儀器用具 小花盆、試管、培養(yǎng)皿或燒杯、蒸餾水、接種針、玻棒、保濕桶、注射器、噴霧器、塑料薄膜等。四、方法步驟一幼苗接種 該方法可在較短的時(shí)間內(nèi)測(cè)定大量材料對(duì)銹病的抗病性， 便于鑒定不 同小麥品種對(duì)不同銹病生理小種的抗病性， 能防止當(dāng)?shù)匚窗l(fā)現(xiàn)而外地己存在的新的生理小種 的傳播。1育苗 在接種鑒定前 10d 左右，將待鑒定的小麥品種的種子，播種于直徑為 810cm 左右的小花盆內(nèi)。每盆播種 23 個(gè)品種，其中一個(gè)品種為易感病的誘發(fā)品種，以用作對(duì)照。 各品種要相互隔開(kāi)，插上木簽，注明品種名稱及播

19、種日期等。2接種時(shí)間 接種適宜時(shí)間是在麥苗第一片葉子長(zhǎng)達(dá) 45cm 時(shí)。3 采集孢子 在溫室培養(yǎng)的發(fā)病植株上，按不同生理小種分別采集新鮮孢子粉，將試管傾斜套進(jìn)麥株病葉，再輕輕震動(dòng)，使已成熟的孢子落于管內(nèi)，到達(dá)要求量即可。4孢子懸浮液的配制采集不同生理小種的新鮮孢子粉，分別在玻璃杯內(nèi)用蒸餾水稀釋至孢子懸浮液透光呈桔黃色即可。 如果采取混合接種， 那么各小種的孢子粉事先應(yīng)等量混合， 而后配成孢子懸浮液，現(xiàn)配現(xiàn)用。5接種方法 一般可用的接種方法有涂抹、噴霧、噴粉等方法，第一種方法主要在繁殖少量菌種或接種少量鑒定材料時(shí)應(yīng)用， 后兩種方法適于對(duì)大量材料的接種鑒定。 但一般常 用的是涂抹接種法。具體操作是

20、： 用潔凈的手指蘸清水將麥苗的葉片摩擦數(shù)次，去掉葉片外表的蠟質(zhì)和茸毛，以利于 菌液吸附于葉面上。 用消毒過(guò)的接種針蘸上配制好的孢子懸浮液， 涂抹于麥葉正面進(jìn)行接種。 然后記錄并在木簽上注明接種日期及所用菌種。接種后把麥苗隨即放入保濕桶中即用一鐵皮桶，其內(nèi)盛水，保持99%100%濕度，再用噴霧器噴降水霧，令麥苗和保濕桶的內(nèi)壁沾滿霧滴。噴霧不能過(guò)量，以防沖掉已接種的銹病孢子。噴霧后，馬上蓋嚴(yán)塑料薄膜， 把保濕桶放置在適宜的溫度條件最適溫度為913 C下，保濕階段經(jīng) 24h左右。將麥苗取出，移至陽(yáng)光充分的溫室內(nèi)，平均溫度最好分別控制在1618 C,光照時(shí)間每天應(yīng)不少于 12h，冬季光照缺乏，需每天增

21、加一定時(shí)間的人工輔助光照。溫度和光照掌 握的好壞是發(fā)病充分與否的關(guān)鍵。經(jīng)兩周后麥苗即可發(fā)病，此時(shí)即可鑒定品種的抗病力。注意：在分別接種不同生理小種進(jìn)行鑒定時(shí)，接種用的一切用具都要先行消毒，防止可能發(fā)生的污染影響鑒定結(jié)果。二成株接種1 材料種植把每個(gè)被鑒定材料采用凹穴播種法種成一個(gè)小區(qū)，在鑒定材料圃的四周和在鑒定區(qū)內(nèi)每當(dāng)隔1020個(gè)小區(qū)播種高感品種做為誘發(fā)行。誘發(fā)行最好用 24個(gè)高感品種等量混合播種。2 接種時(shí)間接種條銹病的適宜時(shí)間，通常是在小麥拔節(jié)前后。3 孢子采集條銹菌配制孢子懸浮液方法同幼苗接種。4 .接種方法一般可用的接種方法有涂抹、注射、噴霧、噴粉等方法，但最常用的是注射接種法：選擇夜

22、間有露黃昏進(jìn)行。為了提高田間濕度，接種后和開(kāi)始發(fā)病后，在誘發(fā)行上用清水噴霧，或澆水，保證良好的誘發(fā)條件。將配制好的孢子懸浮液吸入注射器在感病誘發(fā)行植株的第二可見(jiàn)從上數(shù)葉片與葉鞘相接處將針頭傾斜刺入，切勿刺穿，再稍稍回抽，即行注射孢子液，以見(jiàn)到心葉上端冒出水珠為度。在誘發(fā)行接種，一般每隔1m左右選取單莖 35個(gè)予以注射35針。隨即用塑料薄膜覆蓋保濕，次日早晨揭開(kāi)。三抗銹性鑒定觀察與記載衡量小麥品種對(duì)銹病的抗性和發(fā)病程度，常用反響型、普遍率及嚴(yán)重度三個(gè)指標(biāo)。 反響型 是指小麥植株受病菌侵染后的保衛(wèi)性反響。是一種定性的記載標(biāo)準(zhǔn)，用常規(guī)分級(jí)法表示，能較好地反映出品種免疫性的本質(zhì)。目測(cè)評(píng)定，其反響型新標(biāo)

23、準(zhǔn)采用9級(jí)制，其分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)如表6-3。表6-3小麥品種對(duì)條銹菌反響型的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)級(jí)另U抗性程度品種反響的病癥0免疫型葉片健康，沒(méi)有病害病癥1近免疫型葉片上有點(diǎn)滴枯死斑和失綠反響，但無(wú)夏抱于堆3高抗型葉片夏抱子堆很小且很少，抱子周圍有褪綠和枯死斑5中抗型夏抱子堆小到中等，較分散，周圍有枯死和失綠反響7中感型夏抱子堆中等大小，數(shù)量較多，周圍組織無(wú)枯死反響，但有失綠現(xiàn)象9高感型夏抱子堆大而多，連成條紋，串連成片，早期葉片既無(wú)枯死也無(wú)褪綠現(xiàn)象 嚴(yán)重度 即病葉上孢子堆占葉面積的百分率，用以表示病害發(fā)生的嚴(yán)重程度。用分級(jí)法表示。一般可分 8級(jí)，即1%、5%、10%、25%、40%、65%、80%、100%。一

24、般在田 間銹病開(kāi)展到頂峰期時(shí)進(jìn)行鑒定，記載時(shí)在1m行中隨機(jī)取3點(diǎn)，每點(diǎn)記載1030片頂三葉的實(shí)際嚴(yán)重度，求平均嚴(yán)重度。普遍率 指病害發(fā)生的普遍程度，即發(fā)病葉片數(shù)占調(diào)查總?cè)~片數(shù)的百分率。一般用目測(cè)估計(jì)法觀測(cè)記載。要求精確鑒定時(shí)，可根據(jù)被鑒定材料小區(qū)面積的大小，可設(shè)點(diǎn)隨機(jī)選 取3050片葉觀察記載。此外，還應(yīng)觀察銹菌的潛育期。即銹菌從侵入和建立寄生關(guān)系到表現(xiàn)明顯的病癥為止的時(shí)期。潛育期的長(zhǎng)短與品種的抗病性有密切的關(guān)系，即使同一品種對(duì)不同生理小種以及在不同溫度下其潛育期也不同，因而可用來(lái)作為鑒定的一種指標(biāo)。接種后一般從11d后開(kāi)始，每天在接菌圃中逐品種檢查一次以某一品種有50%頂三葉上孢子堆破裂為標(biāo)

25、準(zhǔn)，記載日期，推算潛育期。在正常情況下，接種后約經(jīng)兩星期即可發(fā)病，抗銹性的病情鑒定時(shí)間是小麥乳熟期以后，田間銹病開(kāi)展到頂峰時(shí)進(jìn)行。每個(gè)品種逐個(gè)進(jìn)行鑒定記載。鑒定小麥品種的抗銹性應(yīng)以鑒定反響型為主，并目測(cè)鑒定普遍率和嚴(yán)重率。鑒定雜種后代只鑒定反響型。均按上述分級(jí)標(biāo)準(zhǔn) 進(jìn)行評(píng)定。五、實(shí)驗(yàn)作業(yè)1 采集條銹病菌新鮮孢子和配制其孢子懸浮液，并按分配任務(wù)進(jìn)行注射接種和做好接種后的田間管理工作。2 小麥條銹病發(fā)病條件是哪些？在人工接種時(shí)怎樣保證這些條件？接種鑒定抗性過(guò)程中，容易出現(xiàn)哪些問(wèn)題干擾鑒定結(jié)果？3 發(fā)病盛期對(duì)供鑒材料的抗病性進(jìn)行鑒定，并對(duì)抗性進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)分析。將觀察結(jié)果填與表6-4 o表6-4小麥條

26、銹病抗病性鑒定結(jié)果記錄品種反響型嚴(yán)重度普遍率潛育期Ill玉米大斑病抗性鑒定、實(shí)驗(yàn)?zāi)康谋緦?shí)驗(yàn)將學(xué)習(xí)和初步掌握玉米大斑病抗性鑒定技術(shù):1 玉米大斑病的主要病癥特征觀察2 玉米大斑病的接種方法3 玉米大斑病的病情與抗性級(jí)別鑒定、內(nèi)容說(shuō)明玉米大斑病( Helmin thosporium turcicum )在中 國(guó)分布廣泛，主要發(fā)生在氣候較涼爽的玉米種植區(qū)， 是東北玉米主要病害之一，發(fā)生嚴(yán)重。大斑病菌主 要侵染玉米葉片、苞葉和葉鞘。病害主要發(fā)生在玉 米抽雄以后，下部葉片首先發(fā)病并迅速向上部葉片 擴(kuò)展。發(fā)病初期，葉片上出現(xiàn)水漬狀青灰色斑，向 兩端擴(kuò)展，形成黃褐色梭形或長(zhǎng)紡錘形大斑(如圖 6-5 ),影響

27、植株光合作用，造成籽粒灌漿缺乏，導(dǎo) 致產(chǎn)量降低，嚴(yán)重時(shí)全株枯死，造成嚴(yán)重?fù)p失。圖6-5玉米大斑病典型病斑圖6-6玉米大斑病原菌病原菌為大斑突臍孢菌Exserohilum turcicum (Pass.)Leonard et Suggs。有性態(tài)：大斑剛毛球腔菌 Setosphaeria turcica (Luttrell) Leonardet Suggs。世界病原菌有5個(gè)生理小種，我國(guó)已發(fā)現(xiàn)其中3個(gè)，分別為0號(hào)小種，1號(hào)小種，23號(hào)小種。0號(hào)和1小種是我國(guó)主要玉米產(chǎn)區(qū) 的優(yōu)勢(shì)小種。同程度的病斑數(shù);是由單基因控制,產(chǎn)生抗性病斑，表現(xiàn)褪綠病斑或褪綠斑點(diǎn)甚至無(wú)病斑。玉米對(duì)斑病抗性水平鑒定和評(píng)價(jià)是一項(xiàng)專

28、業(yè)性強(qiáng)、技術(shù)性高的工作，包括一系列的內(nèi)容?？共∮N是防治大斑病最經(jīng)濟(jì)有效的措施。玉米對(duì) 大斑病抗性表現(xiàn)亦分兩種：一是由多基因控制，表現(xiàn)不 只有在具備適宜的病原菌、 適宜的病害發(fā)生環(huán)境以及能夠較準(zhǔn)確反映寄主抗性本質(zhì)的評(píng)價(jià)指 標(biāo)的條件下， 玉米品種的抗性水平才能得以真實(shí)反映。 抗病性鑒定的各個(gè)步驟都影響著植株 抗性的表達(dá)程度和表達(dá)真實(shí)性?？茖W(xué)、準(zhǔn)確地開(kāi)展玉米的抗病特性鑒定和抗性評(píng)價(jià)，是正確 評(píng)價(jià)種質(zhì)的抗性、在育種過(guò)程中合理選擇和聚合抗性、在生產(chǎn)中充分利用抗性的重要根底。玉米抗病性鑒定程序主要包括主要生理小種病原菌的準(zhǔn)備， 接種時(shí)期的選擇， 最正確的接 種方法、抗病性鑒定圃的設(shè)立、田間調(diào)查觀察與記載

29、等步驟和內(nèi)容。鑒定玉米育種材料抗大斑病的方法有自然誘發(fā)鑒定， 大田誘發(fā)鑒定和人工接種鑒定。 但 以人工接種鑒定較為可靠。三、材料儀器藥品1供試材料玉米抗病和感病對(duì)照材料，玉米大斑病菌種 1 號(hào)生理小種 。2儀器用具高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、酒精燈、接種環(huán)、恒溫箱、燒杯、漏斗、試管、紗布、玻璃棒、培養(yǎng)皿、顯微鏡、小噴霧器、保濕罩等。3藥品試劑75% 酒精、 0.1% 升汞溶液、葡萄糖、瓊脂、馬鈴薯等。四、方法步驟一人工接種1菌種的培養(yǎng) 病原菌的別離 選取新鮮病葉作為別離材料，在滅菌室內(nèi)進(jìn)行操作。先將病斑剪成45mm 2大小，約 3040 塊，然后分別將病組織小塊置于0.1%升汞溶液中消毒 1min

30、 ，立即取出，按無(wú)菌操作方法投入無(wú)菌水中清洗三次，每次 23 min 。最后以無(wú)菌操作方法，將病 斑組織按正方形四點(diǎn)排列，栽種在 PDA平板培養(yǎng)基去皮馬鈴薯20g，葡萄糖1020g，瓊脂1720g，水100ml上，置 2530 C溫箱中培養(yǎng)約 7d。 菌種的純化 選取培養(yǎng)性狀典型的菌落，按無(wú)菌操作方法移植到斜面培養(yǎng)基上每個(gè)典型菌落移 3管，然后再放在 25C恒溫下培養(yǎng)。待產(chǎn)生孢子后，選取菌落較一致的斜面12 管，挑取一點(diǎn)，觀察孢子的形狀、分隔數(shù)、臍點(diǎn)特點(diǎn)。然后計(jì)測(cè)孢子大小。確認(rèn)純種后， 再用斜面培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)，讓其產(chǎn)生大量孢子后，置冰箱中保存待用。2孢子懸浮液的制備將培養(yǎng)物用少量蒸餾水洗下孢子，用紗布濾去菌絲及培養(yǎng)基，濾液用蒸餾水稀釋，調(diào)至在 100倍顯微鏡下每個(gè)視野 1 0個(gè)孢子左右為宜。3接種時(shí)期苗期接種一般在玉米苗齡 58 葉時(shí)進(jìn)行；成株期接種在抽雄前進(jìn)行。4接種方法苗期接種接種前在孢子液中參加2%蔗糖，以促進(jìn)孢子萌發(fā)。接種菌液量是每株12cm。用微型噴霧器均勻噴霧，噴后立即覆蓋保濕罩，在22C左右保濕 24h。成株期接種將粉碎的頭一年病葉撒入心葉喇叭口，接種應(yīng)在下午或黃昏濕度較大時(shí)進(jìn)行。天氣枯燥時(shí)，接種后可在每株心葉噴水。二病情鑒定和分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)1 苗期鑒定及標(biāo)準(zhǔn) 接種后12d左右進(jìn)行病情鑒