染色地基本原理

1、WORD格式染色的根本原理是利用染料在組織切片上給與顏色，使其與組織或細(xì)胞內(nèi)的某種成分發(fā)生作用，經(jīng)過透明后通過光譜吸收和折射，使其各種微細(xì)構(gòu)造能顯現(xiàn)不同顏色，這樣在顯微鏡下就可顯示出組織細(xì)胞的各種成分。染色劑與組織細(xì)胞相結(jié)合而使組織細(xì)胞著色的過程與物理和化學(xué)作用兩者都有關(guān)系。一、染色的物理現(xiàn)象1.溶解性：這種染色最典型的例子就是脂肪染色，蘇丹類染色劑為脂溶性染料，它可以被脂質(zhì)溶解，使脂質(zhì)著色，就是利用染色劑在脂質(zhì)中的溶解度大于在酒精等溶劑中的溶解度這一特性。因此，當(dāng)蘇丹類的酒精溶液與組織細(xì)胞中的脂質(zhì)接觸時(shí)，染色劑就從溶液中 “轉(zhuǎn)移 到脂質(zhì)中去，而使脂質(zhì)著色。2.吸附作用：較大物體有從周圍介質(zhì)吸

2、附小顆粒到自身的特性。有些染色那么是染色劑分子通過滲透和毛細(xì)管作用而被吸收或沉淀到組織，細(xì)胞的小孔中去而著色的。例如活性炭吸附各種分子，甚至膠質(zhì)和微生物等較大的顆粒一樣。二、染色的化學(xué)反響酸性染料和堿性染料的染色作用常是對(duì)立的，而不是一致的。任何染料均可電離，離解出陽離子或陰離子。酸性染料中的酸性局部有染色作用的是陰離子；堿性染料中的堿性局部有染色作用的是陽離子，細(xì)胞內(nèi)同時(shí)含有酸性和堿性物質(zhì)，酸性物質(zhì)與堿性染料中的陽離子相結(jié)合，如細(xì)胞核含有核酸黏液和軟骨基質(zhì)呈酸性局部被鹽基性染料蘇木素所染、反之堿性物質(zhì)與酸性染料的陰離子相結(jié)合，如細(xì)胞漿及其內(nèi)部的某些顆粒物質(zhì)被酸性染料伊紅所染。染料的顏色基不是

3、在陽離子，就是在陰離子上，這些離子將因組織反響不同而發(fā)生化學(xué)結(jié)合，如顯示含鐵血黃素的普魯士蘭反響是最典型的例子。但是，大量染色的化學(xué)反響并不像鐵反響那樣明確，實(shí)際情況遠(yuǎn)為復(fù)雜。這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)分子是個(gè)分子量自幾萬至幾百萬的大分子，每個(gè)分子中含有很多陽離子和陰離子基因，在等電點(diǎn)時(shí)能形成游離的兩性離子，如： P 為蛋白質(zhì)，是具有兩性的膠體物質(zhì)。它呈酸性或堿性與環(huán)境的 PH 值有關(guān)，如溶液的 PH 值小于該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)那么此溶液對(duì)該種蛋白質(zhì)即為酸性， 蛋白質(zhì)就帶正電，將被酸性染色劑所著色。反之，溶液的 PH 值大于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，那么此溶液對(duì)該蛋白質(zhì)來說即為堿性 ,蛋白質(zhì)帶負(fù)電，將被帶有陽離子的染色

4、劑所浸染。在日常工作中， 長久固定于甲醛的組織切片， 往往染色不良， 尤其是核的著色欠佳。這是因?yàn)楣潭ㄒ杭兹┭趸杉姿?，組織亦隨之變?yōu)樗嵝?，所以不易被蘇木素所著色，補(bǔ)救的方法是，先用流水沖洗組織塊，然后用堿性溶液如稀氨酒精等處理使之中和，恢復(fù)正常 PH 值后再進(jìn)展染色。專業(yè)資料整理WORD格式大多數(shù)染色的原理至今仍未搞清楚。有些可能是物理的，有些可能是化學(xué)的，有些那么可能兩種機(jī)制都起作用，正因?yàn)槿藗儗?duì)染色的原理還沒有完全掌握，所以目前還不能很好地運(yùn)用原理來控制它。在相當(dāng)程度上要憑借工作經(jīng)歷。因此 “染色 成為技術(shù)性很強(qiáng)的一項(xiàng)工作。在進(jìn)展每一種染色方法時(shí)，必須注意不斷地有意識(shí)地去積累經(jīng)歷，從成

5、功與失敗中去真正掌握該染色技術(shù)。三、進(jìn)展性染色和退行性染色組織成分著色由淺至深，當(dāng)?shù)竭_(dá)所需要的強(qiáng)度時(shí)，終止染色。這種方法稱為進(jìn)展性染色。一般所采用的染液濃度較低，染色過程中應(yīng)該不時(shí)在鏡下觀察以進(jìn)展控制，這樣才能得到染色強(qiáng)度適中的效果。此種方法無需 “分化 ，例如，卡紅染色。退行性染色，那么是先把組織濃度過度，超過所需的程度，然后再用某些溶液脫去多余的染色劑，以到達(dá)適當(dāng)?shù)纳疃?，并使不?yīng)著色的組織細(xì)胞脫色，這個(gè)步驟稱為 “分化。在分化中進(jìn)展鏡下觀察，當(dāng)然也是必不可少的。 H.E 染色中用蘇木素染核就是退行性染色。四、直接染色，間接染色和媒染劑有些染色無需第三種物質(zhì)參加，染色劑和組織即可直接結(jié)合著色

6、，是為直接染色。直接染色最后到達(dá)的深度與染液的濃度和組織細(xì)胞對(duì)染色劑的親和力相關(guān)。還有一些染色，單獨(dú)燃料本身的水溶液或酒精溶液，幾乎不能與組織細(xì)胞結(jié)合或結(jié)合的能力很弱，必須有第三種成分 媒染劑參與，才能使染色劑與組織細(xì)胞有效地結(jié)合起來，這種染色方法稱為間接染色。媒染劑通常是雙價(jià)或三價(jià)金屬如鋁， 鐵的硫酸鹽或氧化物。 媒染劑有的加在染液中，媒染作用在染色的同時(shí)進(jìn)展如 Ehrlich 氏蘇木素染色；有的那么用于染色前，媒染劑單獨(dú)配成溶液，固定液本身就起著媒染的作用如Wallory 氏磷鎢酸蘇木素染色用 Zenker 或 Helly 氏固定；有時(shí)那么用于染色后。媒染劑在染色中起著架橋作用，既能與染料

7、結(jié)合又能與組織相結(jié)合，到達(dá)了促進(jìn)染色的效果。例如蘇木素就需要明礬作媒染劑，才能使組織著色。媒染劑往往在一些間接染色反響中幾乎是必不可少的。五、促染劑用以加強(qiáng)染料和組織細(xì)胞結(jié)合能力的物質(zhì)稱為促染劑。如染胞漿時(shí)伊紅液中滴加的冰醋酸，有加強(qiáng)其染色作用，增加了有色酸對(duì)蛋白質(zhì)堿基的結(jié)合力。促染劑與媒染劑不同，有時(shí)為了加快染色過程， 可在染液中參加接觸劑促進(jìn)染料與組織細(xì)胞著色，但其本身并不參與染色反響。促染劑有如化學(xué)反響中的催化劑，少量存在就有明顯的促染作用。它們的作用機(jī)制也許是降低外表X力或是改變了染液的 PH 值.專業(yè)資料整理WORD格式六、分化劑專業(yè)資料整理WORD格式在退行性染色中，附在組織細(xì)胞上

8、多余的染色劑需用某些特定的溶液把目的物以外的局部脫去，從而使目的物與周圍組織形成鮮明的比照，同時(shí)使目的物本身的色澤也深淺適當(dāng)。這種選擇性地除去多余染色劑的過程稱為 “分化 ，所使用的溶液即是“分化劑 。分化劑大致可歸納為三大類：一酸性分化劑：如冰醋酸和鹽酸。它們能與媒染劑金屬相結(jié)合形成可溶性鹽類，從而翻開了媒染劑和組織細(xì)胞的結(jié)合，使組織細(xì)胞脫色，另外，它能分解和防止形成染料的沉淀色素。如Ehrlich 氏蘇木素液當(dāng)酸性時(shí)，溶液為褐紅色，正是由于色素根來與鋁化合成蘭色的“沉淀色素 ，之故，一旦將切片投入堿性溶液，那么組織立刻呈現(xiàn)藍(lán)色， 說明沉淀色素已經(jīng)形成， 但假設(shè)以 1%鹽酸酒精分化， 那么又

9、恢復(fù)了紅色，此即表示沉淀色素又被溶解。二氧化分化劑：其作用實(shí)際上是種簡單的漂白，如苦味酸，鉻酸，重鉻酸鉀，高鐵氰化鉀和過錳酸鉀等，這些都是一些氧化劑，可將組織上所有的染色劑無選擇地氧化而呈無色，猶如漂白作用。但由于這種氧化作用的速度較慢，首先脫去的必是染色較淺的，染色較深的組織細(xì)胞還可保存局部染色劑，這樣就到達(dá)了分化的效果。三媒染分化劑：媒染劑能促使組織細(xì)胞和染色劑相結(jié)合。如果將已染色的切片再放到媒染劑的溶液中，那么可使已經(jīng)和組織相結(jié)合的染色劑脫去，這是媒染劑的另一種功能。從這個(gè)角度看，又可稱之為 “媒染分化劑 。它對(duì)組織既能使染料附著，又能脫去染料，二者初看似乎矛盾，其實(shí)不然，這是因?yàn)槿旧珓?/p>

10、和媒染劑的比例關(guān)系不同，當(dāng)溶液中媒染劑的量超過了染色劑的量時(shí)，占有壓倒優(yōu)勢的媒染劑就把已經(jīng)和組織細(xì)胞相結(jié)合的染色劑奪取過來，使組織細(xì)胞脫色，即為分化現(xiàn)象。當(dāng)然，含染料較少的組織必然先被脫色，而著色較濃的組織隨著分化時(shí)間的控制，即可保存必要的顏色，從而到達(dá)分化的目的。既然分化劑有脫色的作用，因此分化劑本身也是脫色劑。一X褪色的切片，需要再染時(shí)，第一步就是用脫色劑加以處理。在常規(guī)染色中，分化劑必須嚴(yán)格掌握，再根據(jù)經(jīng)歷進(jìn)展鏡下觀察，控制染色效果。七、變色反響和正色反響大多數(shù)染料可將組織染成同一顏色的不同深度；例如：酸性品紅總是將組織染成不同色調(diào)的紅色。淡綠染成不同色調(diào)的綠色。這些染色反響最后目的所呈現(xiàn)的顏色和染色劑的顏色一樣，稱為正色反響。然而有些組織成份可被煤焦類，某些堿性染