傳染病學(xué)-綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、華南農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱： 細(xì)菌性疾病的微生物學(xué)診斷及防治 所屬課程名稱： 獸醫(yī)傳染病學(xué)實(shí)驗(yàn)A 學(xué)生姓名： 學(xué)號(hào)： 2011 專業(yè)年級(jí)： 歷史文化旅游（獸醫(yī)第二專業(yè)）成績： 1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?觀察細(xì)菌性疾病的臨床癥狀和病理解剖變化掌握細(xì)菌性疾病的微生物學(xué)診斷方法及防治措施2 實(shí)驗(yàn)材料和方法2.1 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 、血清瓊脂平板、營養(yǎng)肉湯 ，酒精燈、生化發(fā)酵管。藥敏試紙、剪刀、鑷子等2.2 實(shí)驗(yàn)方法2.2.1 臨床癥狀觀察 觀察動(dòng)物的精神狀態(tài)、皮膚、被毛、糞便、體溫等情況 2.2.2 病理剖檢變化 觀察動(dòng)物各臟器的病理變化，包括心、肺、肝、脾、腎、腸、淋巴結(jié)等?？从袥]有出血、壞死等病變2.

2、2.3實(shí)驗(yàn)室診斷細(xì)菌分離培養(yǎng) 無菌取病兔病變組織，如肺、肝、脾或體液、分泌物及局部病灶的滲出液，接種血清營養(yǎng)瓊脂或麥康凱瓊脂，將培養(yǎng)皿標(biāo)記后置于37溫箱，培養(yǎng)24小時(shí)后觀察結(jié)果。 涂片、染色、鏡檢 對(duì)于液體病料，可用無菌接種環(huán)取一環(huán)液體病料在載玻片上涂抹成適當(dāng)大小的薄層即可；對(duì)于實(shí)質(zhì)臟器，可用鑷子夾持病變組織，然后用滅菌剪刀剪取一小塊，夾出后將其新鮮切面在載玻片上壓印即成觸片。革蘭氏染色法染色：1.涂片經(jīng)火焰固定，加1液（結(jié)晶紫溶液）染1-2分鐘，用清水沖去染液；2.加第2液（碘液）染1-2分鐘，水洗；3.加第3液（脫色液），不時(shí)搖動(dòng)玻片約10-30秒，至無紫色脫落為止，水洗；4.加第4液（復(fù)

3、染液），染1分鐘，水洗；5.干后油鏡鏡檢。結(jié)果判斷：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。（注意：1.嚴(yán)格掌握脫色時(shí)間，革蘭氏陽性菌脫色時(shí)間過長易誤認(rèn)為革蘭氏陰性菌，脫色時(shí)間過短，革蘭氏陰性菌易誤認(rèn)為革蘭氏陽性菌；2.選用18至24小時(shí)菌齡的細(xì)菌為宜，如細(xì)菌太老，由于菌體死亡或自溶，常使革蘭陽性反應(yīng)轉(zhuǎn)顯為革蘭陰性反應(yīng)。生化試驗(yàn)將細(xì)菌的24h純培養(yǎng)物分別接種到各種生化培養(yǎng)基內(nèi)，37培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果并記錄。 巴氏桿菌生化特性 葡萄糖   乳糖 蔗糖 甘露醇 果糖 鼠李糖 棉子糖 衛(wèi)柔醇 運(yùn)動(dòng)力 麥康凱瓊脂 硝酸鹽還原 靛基質(zhì) 氧化酶 脲酶 大腸桿菌生化特性 葡萄糖   乳

4、糖 蔗糖 甘露醇 麥芽糖 運(yùn)動(dòng)力 脲酶 枸櫞酸鹽利用 硫化氫 MR VP 硝酸鹽還原 靛基質(zhì) 動(dòng)物試驗(yàn) 將病料磨碎，用生理鹽水稀釋成1:10的懸液（或用分離細(xì)菌的肉湯培養(yǎng)物），接種小白鼠0.1-0.2ml，18-72小時(shí)死亡后取心、肝、肺等涂片鏡檢,并接種培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)菌形態(tài)、染色、培養(yǎng)等特性加以鑒定,必要時(shí)進(jìn)行生化鑒定。2.2.4 藥敏試驗(yàn)（1）用接種環(huán)挑取菌落45個(gè)，接種于肉湯培養(yǎng)基中，37培養(yǎng)過夜。（2）用無菌棉拭子蘸取上述肉湯培養(yǎng)液，在管壁上擠壓，除去多余的液體，用棉拭子涂滿瓊脂表面，蓋好平皿，在室溫下干燥5min，待平板表面稍干即可放置含藥紙片。（3） 用滅菌鑷子以無菌操

5、作取出含有不同抗生素紙片貼在涂有細(xì)菌的培養(yǎng)基表面。將平皿置于37恒溫箱培養(yǎng)1618h，觀察結(jié)果。（4） 結(jié)果判定：觀察含藥紙片周圍有無抑菌環(huán)，量取其直徑（包括紙片直徑）大小，按抑菌環(huán)直徑的大小報(bào)告敏感、中度敏感和耐藥3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及診斷結(jié)果、本次實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為兔子。在攻毒一個(gè)周過后死亡，攻毒前生命體征各項(xiàng)均正常。病理解剖結(jié)果可看到心、肝、脾以及淋巴結(jié)充血、出血；喉頭、氣管、腸道黏膜有出血點(diǎn)。3.1涂片鏡檢無菌取病兔心肺實(shí)質(zhì)器官抹片檢查時(shí)沒看到明顯的細(xì)菌，經(jīng)瑞氏染色后鏡檢，可看到細(xì)菌呈兩極著色，周邊有淡紅色的莢膜的短小桿菌。3.2細(xì)菌分離培養(yǎng) 無菌取病免的肺接種于鮮血瓊脂平板和麥康凱平板上，37度培養(yǎng)

6、，結(jié)果麥康凱平板上無任何菌落，而鮮血瓊脂平板上有許多淡灰色、圓形濕潤、露珠樣的小菌落，且周圍不溶血。還有一些取菌落作瑞氏染色，鏡檢?？煽吹皆摼鸀閮蓸O濃染，兩端鈍圓、有莢膜的短桿菌，還有一些紫色的葡萄樣的菌。紫色的菌可判斷為葡萄球菌。經(jīng)肉湯培養(yǎng)以及瓊脂培養(yǎng)基多次分離純培養(yǎng)后，可分離菌株。3.3生化試驗(yàn) 葡萄糖   乳糖 蔗糖 甘露醇 果糖 鼠李糖 棉子糖 衛(wèi)柔醇 運(yùn)動(dòng)力 麥康凱瓊脂 硝酸鹽還原 靛基質(zhì) 氧化酶 脲酶 3.4藥敏試驗(yàn)藥物抑菌圈直徑（cm）敏感度頭孢唑啉2.2耐藥環(huán)丙沙星3.3耐藥阿米卡星1.9耐藥氧氟沙星3.2耐藥氯霉素3.3耐藥鏈霉素2.0耐藥諾氟沙星3.0耐藥3.5小

7、鼠感染試驗(yàn)取親分離的菌株鈍培養(yǎng)，制成細(xì)菌鈍培養(yǎng)液，接種小鼠，腹腔注射9ml，24h后死亡。解剖的病理變化與免子相同。4 綜合防治措施對(duì)于在大規(guī)模養(yǎng)殖的養(yǎng)殖場，主要有以下幾點(diǎn)防治措施 建立無多殺性巴氏桿菌種兔群 堅(jiān)持自繁自養(yǎng)原則，不從疫區(qū)引種或購買商品兔，引種兔進(jìn)要嚴(yán)格檢疫并隔離觀察30天，經(jīng)檢查無異常癥狀時(shí)方可入群。 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，增強(qiáng)機(jī)體的搞病能力 消除一切應(yīng)激因素。 搞好清潔衛(wèi)生和定期涉消毒，減少疫病感染機(jī)會(huì) 藥物預(yù)防可在每50kg飼料中加8-10g乙醇，混合飼喂 嚴(yán)禁其他動(dòng)物出入兔場，定期滅蚊蟲，減少傳染源 ，切斷傳播途徑 治療可用阿莫西林鈉，10-15mg/kg 肌注；或鏈霉素0.5-1IU/KG,2次/d 肌注5 實(shí)驗(yàn)體會(huì)或小結(jié)1. 本次實(shí)驗(yàn)持續(xù)做了幾個(gè)周的細(xì)菌性培養(yǎng)，從最開始的練習(xí)兔子的耳緣靜脈采血、皮下、皮內(nèi)、腹腔注射、肌肉注射，到真正的實(shí)驗(yàn)細(xì)菌攻毒，細(xì)菌的分離培養(yǎng)、小鼠回歸試驗(yàn)等多個(gè)繁雜的步驟過后，了解了特定病原在動(dòng)物體內(nèi)的整個(gè)發(fā)病過程，以及發(fā)病原因進(jìn)行了詳細(xì)的探究的探究。2. 在實(shí)驗(yàn)中，我們不僅進(jìn)一步加強(qiáng)了動(dòng)手操作的能力，也意識(shí)到團(tuán)隊(duì)的重要性。作為一名第二專業(yè)的學(xué)生，我更加能體會(huì)到在交流過程中同學(xué)們給予的幫助和指導(dǎo)；也更能體會(huì)在實(shí)驗(yàn)過程中的教育意義。3. 在本次整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作過程