食品中對位紅的檢測——高效液相色譜法初步方案

1、如有幫助，歡迎下載支持附件 1: 食品中對位紅的檢測一一高效液相色譜法（初步方案）（北京出入境檢驗(yàn)檢疫局食品安全檢測中心提供）1 應(yīng)用范圍本方法涉及以辣椒為主要或配料成分的食品和以番茄原料為基質(zhì)的食品中違禁著色劑對位紅的檢測。2 定義對位紅又稱對硝基苯胺紅， 是一種工業(yè)用偶氮染料， 不溶于水易溶于有機(jī)溶劑， 不允許在食 品中使用。3 方法要點(diǎn)對位紅染料經(jīng)乙腈超聲提取后，過濾，濾液用反相高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分析。以波長可變的紫外一可見檢測器定性和定量。4 試劑與標(biāo)準(zhǔn)品除有特殊指明外，本方法中涉及試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水均為超純水。試劑與標(biāo)準(zhǔn)品名稱規(guī)格級別乙腈4L/瓶HPLC 級二氯甲烷4L/瓶

2、HPLC 級冰醋酸500ml/瓶分析純對位紅5 標(biāo)準(zhǔn)溶液5. 1標(biāo)準(zhǔn)貯備液稱取20 Omg對位紅（按產(chǎn)品標(biāo)明的純度折算成純著成劑），用乙腈溶解并定容至100ml容量瓶。5.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液分別取上述標(biāo)準(zhǔn)貯備液 50 卩 l 、100 卩乙腈定容，此時(shí)溶液中對位紅的濃度分別為l 、 200卩l(xiāng)、500 卩 l 和0 1,0 2,0 4,1 01000 卩和l 溶液移入2 0 卩 g/ml100ml 。容量瓶中以6 儀器與設(shè)備前處理儀器與設(shè)備萬分之一天平電子天平打漿機(jī)超聲波震蕩提取儀25ml 具塞比色管250ml 燒杯100ml 容量瓶0. 45 m 濾膜分析儀器與設(shè)備配有紫外一可見檢測器及自動(dòng)進(jìn)樣

3、器的反向HPLCCLOVERSIL C18 色譜柱4. 6x250mm5卩m5ml一次性注射器漩渦振蕩器7 樣品處理方法7. 1 甜椒或紅辣椒粉稱取 10g（準(zhǔn)確至 0 01g ）樣品于25ml具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并搖勻。7. 2 粉狀調(diào)味品稱取 5g（準(zhǔn)確至 001g）樣品于 25ml 具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并搖勻。7.3 調(diào)味辣椒醬、原味辣椒醬、辣椒油等稱取 5g（準(zhǔn)確至 001g）樣品于 25ml 具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并搖勻。7. 4 以番茄原料為基質(zhì)的番茄醬和番茄沙司稱取 10g （準(zhǔn)確至 0 01g ）樣品于 25ml 具塞比色管中，用乙腈定容

4、至25ml 并搖勻。7. 5 提取將稱量好的樣品在超聲波提取儀中充分超聲提取60 分鐘，并不時(shí)搖勻。如有幫助，歡迎下載支持7.6上樣用 5ml 一次性注射器抽取一定體積的提取液，將提取液過0 45擰緊瓶蓋，在漩渦振蕩器上振蕩30 秒，使溶液充分混勻，待測。卩 m有機(jī)系濾膜至進(jìn)樣瓶中,8 色譜分析8. 1 高效液相色譜測定8. 1.1流動(dòng)相流動(dòng)相 A : 10% 乙酸溶液流動(dòng)相 B: 乙腈8. 1.2 梯度洗脫程序時(shí)間（ Min）流動(dòng)相 A%流動(dòng)相 B%梯度曲線02080線性52080線性70100線性250100線性262080線性8.1.3流速： 1 0ml/min8. 1.4進(jìn)樣量： 20

5、 卩 l8. 1. 5 檢測波長紫外一可見檢測器或二極管陣列檢測器，485nm檢測。8. 1.6 色譜柱CLOVERSIL C18 色譜柱 46 X 250mm5 m8. 1. 7 柱溫：室溫注：待基線穩(wěn)定后開始進(jìn)樣，兩次進(jìn)樣間隙時(shí)間為10 分鐘9 結(jié)果計(jì)算9. 1 標(biāo)準(zhǔn)曲線用 5 點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的測定值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度在0 12 0 卩 g/ml 范圍內(nèi)呈良好線性。（R 0 995）9.2 樣品結(jié)果計(jì)算對位紅含量按以下公式計(jì)算：R=CXV XD/M單位：mg/kgC樣品中待測組分的濃度，單位：卩g/mlM 檢測樣品取樣量（g）V 樣品溶液體積（ml）D樣品溶液的稀釋倍數(shù)10 注意事項(xiàng)10. 1 對位紅與蘇丹