風濕性疾病的實驗室診斷.總結(jié)

1、風濕性疾病的實驗室診斷(diagnoses of rheumatic diseases)小 結(jié)1. 風濕病的概念2. 自身抗體的概念3. 自身免疫性疾病與風濕病的關(guān)系4. 部分自身免疫性疾病的抗體譜5. 自身抗體的實驗室檢測及臨床意義1）抗核抗體4)RF7) ANCA2） Ds-DNA5)CCP3) ENA6)ACA一概念1. 風濕（ Rheuma） : 是指關(guān)節(jié)、關(guān)節(jié)周圍軟組織、肌肉、骨骼出現(xiàn)的慢性疼痛。2.風濕性疾病 ( rheumatic diseases): 是指一大類病因各不相同,但累及機體多個器官、關(guān)節(jié)及其周圍組織的疾病.3. 自身免疫性疾?。好庖邠p傷在風濕性疾病的發(fā)病中占有重要位

2、置，許多風濕性疾病，是因為免疫異常所致組織損傷。4.自身抗體（autoantibidies ）：是指抗自身組織器官、細胞內(nèi)、細胞表面和細胞外成分的免疫球蛋白一些自身免疫性風濕病伴有特征性的自身抗體( 譜 )二自身抗體實驗室診斷1. 抗核抗體 ( ANA)(1) 定義傳統(tǒng)定義：針對細胞核成分自身抗體的總稱.廣義定義：抗核抗體的靶抗原已不再局限于細胞核內(nèi)，而是擴展到整個細胞，是針對細胞內(nèi)所有抗原成分的總稱。(2) 抗核抗體的分類(3) 抗核抗體的特性ANA 主要是 IgG 抗體 ;ANA 無器官特異性和種屬特異性；ANA 主要存在于血清中；(4) ANA 檢測的臨床意義i. ANA 可見于多種疾病

3、，特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締組織病的診斷、病情判斷和療效觀察的指標。ii. 高滴度 ANA 提示有自身免疫性疾病可能。iii. ANA 檢測已成為臨床上診斷自身免疫病的一種重要的指標2.ANA 檢測方法（ 1）初篩實驗：1）間接免疫優(yōu)點：可同時檢測大量抗體，獲得較高的檢測效率；可檢測到一些至今未知的抗體。缺點：操作煩雜（現(xiàn)有全自動設(shè)備，可解決問題）；需要有經(jīng)驗的人員讀片。2) ELISA法測 ANA優(yōu)點：操作簡單，有標準品，可定量；可觀察濃度變化，有助于臨床進行病情及療效的觀察；缺點：包被靶抗原量有限，易漏檢。3) ELISA法與 IIF 法 ANA 檢測結(jié)果有時不一致 IIF 法陽性，

4、ELISA 法陰性原因：太多數(shù)IIF法采用HEp-2 細胞作為包被玻片的基質(zhì)，大約100 至 150 種自身抗原 IIF 法陰性， ELISA 法陽性原因：1. IIF法抗原含量豐富，抗原存在分布不均、含量過低；2. 不同處理方法對特定抗原有破壞，可能導致部分特異抗體的漏檢；3. ELISA 法方法靈敏度高；4. 干擾因素：溶血、嗜異性抗體等引起假陽性。4） 美國風濕學會(ACR) 建議篩查實驗：IIF-ANA 仍然為 ANA 檢測的金標準實驗室在 ANA 報告當中必須注明ANA 檢測方法（ 2）確認實驗1) 缺點一種確認實驗不能同時檢測所有特異性抗體自身免疫性疾病患者體內(nèi)存在的自身抗體種類多

5、不是所有相關(guān)純化抗原都能得到（確認實驗對抗原的要求很高，必須使用高質(zhì)量的純化抗原。由于一種抗原只能檢測一種抗體，多種抗體的檢測則需要多種單獨的抗原，而目前為止并不是所有相關(guān)純化抗原都能得到，因此應(yīng)用受到限制。）2)特異性抗核抗體檢測的臨床意義抗 Sm 抗體以患者姓名命名是SLE的標志性抗體，陽性率為30.2%。在全部抗Sm 陽性的病例中，92.2%為 SLE。SLE病人由活動期轉(zhuǎn)為緩解期后，ANA、抗 DNA 抗體效價可降低，但Sm 抗體依然存在。因此對早期、不典型的SLE或經(jīng)治療緩解后的回顧性診斷有一定意義。 SSA抗體SSA抗體主要見于原發(fā)性干燥綜合征（ SS），陽性率高達 60 75，合

6、并 SLE者為 30-50%，單純 SLE者為 8-10%，其他結(jié)締組織病極少陽性。 SSB抗體SSB抗體是 SS血清特異性抗體。在原發(fā)性SS陽性率達40。SSB抗體陽性幾乎總伴有抗SSA抗體陽性，其他自身免疫性疾病中如有抗SSB抗體，常伴有繼發(fā)性干燥綜合征。在其它結(jié)締組織病中，該兩種抗體同時出現(xiàn)，常提示繼發(fā)性干燥綜合征的存在?？?SSB和抗 SSA抗體相伴出現(xiàn)，有單獨的SSA出現(xiàn)，但單獨的SSB出現(xiàn)的少。抗 nRNP（ nuclear RNP）：無疾病特異性混合性結(jié)締組織病(MCTD)：幾乎均為陽性，且滴度很高，對確立MCTD 的診斷很有幫助。MCTD 的抗RNP 陽性率 >95%。高

7、滴度的抗RNP，尤其在沒有其他自身抗體存在的情況下，一般認為是混合性結(jié)締組織病（MCTD）的診斷標志。其他結(jié)締組織?。嚎筊NP抗體在其他結(jié)締組織病陽性率較低且滴度低。系統(tǒng)性紅斑狼瘡 （ SLE）：抗 RNP抗體在SLE中的陽性率為40%左右，抗 RNP 抗體若與抗dsDNA 抗體、抗Sm 抗體同時存在，則發(fā)生狼瘡腎炎的可能性較大。Sm 與 RNP 是同一分子復合物中的不同抗原位點，兩種抗原具有相關(guān)性，因此血液中兩種抗體基本同時存在，單一陽性的情況很少。抗 Scl-70靶抗原： DNA-拓撲異構(gòu)酶1 的 C 端末區(qū)。 系統(tǒng)性硬皮病的標志性抗體抗 Jo-1 抗體靶抗原：組氨酰tRNA 合成酶，一種

8、細胞漿磷酸蛋白。多發(fā)性肌炎 / 皮肌炎（ PM/DM) 的標記性抗體陽性患者多數(shù)伴有間質(zhì)性肺部疾病和多關(guān)節(jié)炎及關(guān)節(jié)痛。與陰性患者相比，陽性患者發(fā)病年齡輕，病情進展快，療效差，預(yù)后較差。Sm 、 RNP 、SSA 、SSB 、 Jo-1中不含 DNA ，稱可提取核抗原.、 Scl-70：是由許多小分子RNA與各自對應(yīng)的特定蛋白質(zhì)組成的核糖核蛋白顆粒，分子3)IIF-ANA 初篩會漏檢哪些ANAsIIF-ANA 篩查會導致各種 ANAs 漏檢以抗 Jo-1、 PM-Scl、 Scl-70漏檢最多， ACA的漏檢最少 ANA 陰性，病人有癥狀，進一步檢測特異性的自身抗體4) 自身抗體的檢測流程ANA

9、 篩查實驗與特異實驗同時進行，提高檢出率！ DsDNA抗 dsDNA 抗體是 SLE患者的特征性標志抗體，是SLE重要診斷標準之一，診斷的特異性可達95% 100%。檢測方法主要有間接免疫熒光法：特異性高ELISA法：可定量，結(jié)果可溯源至WHO（TRINITY）；濃度與病情的活動性呈正相關(guān)；由于方法學原因有時有假陽性?？?dsDNA 抗體定量檢測不僅能準確反應(yīng)患者檢測結(jié)果偏離正常值的程度，而且抗體水平變化與病情活動相關(guān)。病情活動、加劇時，抗體陽性且水平升高，反之，降低甚至消失。在 ELISA方法中，采用生物提取的 dsDNA 作為實驗基質(zhì)，在制備過程中， DNA 的內(nèi)部結(jié)構(gòu)位點可能少部分人為暴

10、露，從而會因抗 ssDNA抗體的存在產(chǎn)生偶然性非特異性反應(yīng)，從而造成假陽性反應(yīng)。綠蠅短膜蟲為抗原基質(zhì)檢測抗 dsDNA 抗體類風濕因子(RF)抗人IgG 分子Fc 片段上抗原決定簇的特異性抗體, 分為IgM、 G、 A、E 型 .RF 在 RA 中的陽性率為70%80，是診斷RA的重要標準之一RF 并非 RA獨有的特異性抗體，對 RA 的診斷不具特異性.RF（）不等于一定就是RF 含量與病情的活動性和嚴重性成正比，持續(xù)高滴度的RF 常提示 RA病情活動 .RA， RF（）也不能排除不是RA CCP抗體1.瓜氨酸是類風濕關(guān)節(jié)炎（RA）血清抗聚角蛋白微絲蛋白相關(guān)抗體的主要抗原決定簇2.對 RA 診

11、斷具有高度特異性（98%）3.可在 RA 早期出現(xiàn) ,靈敏度約60%，與 RF聯(lián)合檢測靈敏度可提高至70%-80%4.預(yù)測早期關(guān)節(jié)炎的發(fā)生（提前35）5.RA關(guān)節(jié)侵蝕破壞的早期識別及預(yù)測6.新 RA 診斷指標中 ,CCP抗體已列為RA診斷指標之一 .抗心磷脂抗體(ACA)1.是針對一組含磷脂結(jié)構(gòu)抗原物質(zhì)的自身抗體.2.見于 10%15%的 SLE,33%49%的 RA,是了解疾病進展及是否伴發(fā)APS的實驗室指標 .2.ACA 陽性的患者發(fā)生血栓性疾病的危險性增高3.ACA 陽性婦女易發(fā)復發(fā)生自然流產(chǎn).抗中心粒細胞胞漿抗體(ANCA)ANCA 是一組以人中性粒細胞胞質(zhì)成分為靶抗原,與臨床多種小血

12、管炎性疾病密切相關(guān)的自身抗體。靶抗原： 中性蛋白酶 3（PR3），髓過氧化物酶（ MPO），殺菌 / 通透性增高蛋白（ BPI），絲氨酸蛋白酶，人白細胞彈性蛋白酶（ HLE），乳鐵蛋白（ LF），組織蛋白酶 G， 葡萄糖醛酸酶，溶菌酶。是系統(tǒng)性血管炎的標志性抗體5) 自身抗體檢測原則臨床需求決定檢測模式：診斷需求，報告時間，經(jīng)濟水平?jīng)Q定初篩確認是否同時做無 AID 臨床表現(xiàn)的患者：篩查實驗有 AID 臨床表現(xiàn)的患者：篩查實驗和確認實驗缺一不可同一醫(yī)院采用相同方法及相同品牌的試劑盒檢測同一種抗體（建議）建立檢驗與臨床溝通平臺書是我們時代的生命 別林斯基書籍是巨大的力量 列寧書是人類進步的階梯 高爾基書籍是人類知識的總統(tǒng) 莎士比亞書籍是人類思想的寶庫 烏申斯基書籍 舉世之寶 梭羅好的書籍是最貴重的珍寶 別林斯基書是唯一不死的