馬齒莧粗多糖的提取及清除羥自由基活性作用

1、馬齒莧粗多糖的提取及清除羥自由基活性作用首席醫(yī)學網      2007年09月07日 10:34:18 Friday   205· 中華臨床醫(yī)師雜志征稿 · 顱腦解剖技術研修班 · 肝病學科新進展研修班 · 心律失?，F代診療會議 · 醫(yī)學類核心期刊征稿 · 老年疾病循證應用會議 · 小兒心血管疾病會議 · 第13屆國際急診學大會 · 臨床檢驗及設備展覽會 · 白內障人工晶狀體會議 · 全國疑難重癥肝病大會 · 四屆長

2、城國際男科論壇 · 2010世界心臟病學大會 · 泌尿外科學臨床研修班 · 股骨頭壞死修復論壇 作者：朱曉宦吳向陽仰榴青范群艷茆廣華    作者單位：江蘇大學食品與生物工程學院； 化學化工學院； 藥學院，江蘇 鎮(zhèn)江 212013   加入收藏夾 航空航天醫(yī)藥由中華人民共和國科學技術部、.中華現代臨床護理學雜志征稿白內障患者術前術后護理銀翹散方小議·參松養(yǎng)心膠囊胺碘酮治心律失常療效比較·外固定器結合植骨治尺橈骨骨折后骨不連·中西醫(yī)結合治療消化性潰瘍53例療效分析·子宮瘢痕部位穿

3、透性植入胎盤致引產出血·潰瘍性結腸炎外科治療體會 真菌性鼻竇炎護理雜志：誠信征稿、發(fā)表快腰椎術后并發(fā)癥預防護理中醫(yī)心理療法·寫作技巧 | 醫(yī)學論文結果部分的寫作技巧 ·快訊 | 中國醫(yī)藥導刊雜志征稿函 【摘要】  目的： 研究馬齒莧粗多糖的水提法優(yōu)化工藝和清除羥自由基活性作用。方法： 采用苯酚-硫酸法測定多糖含量，以多糖提取率為考察指標，進行單因素實驗，考察固液比、溫度、時間、提取次數等因素對提取率的影響。在此基礎上，進行正交試驗，優(yōu)化水提法工藝條件。采用水楊酸法考察馬齒莧粗多糖清除羥自由基活性。結果： 溫度是影響粗多糖提取率的重要因素。水提法優(yōu)化工藝條

4、件為溫度100 、時間2 h、固液比115、提取次數4次，此條件下多糖提取率達 94.26%，粗多糖得率為15.50% ，多糖含量為22.60%。馬齒莧粗多糖具有清除羥自由基能力，并且其清除能力與質量濃度有明顯的量效關系，馬齒莧粗多糖質量濃度為3.5 mg/mL時清除率達50，質量濃度為17.6 mg/mL時清除率高達90。 結論： 該優(yōu)化工藝可用于馬齒莧多糖的提取，高濃度馬齒莧粗多糖具有較好的抗氧化活性。 【關鍵詞】  馬齒莧多糖提取工藝抗氧化羥自由基Study on extraction and ability to scavenge hydroxyl radicalsfor P

5、olysaccharides from Portulaca oleracea L.ZHU Xiaohuan,  WU Xiangyang,   YANG Liuqing,  FAN Qunyan,  MAO Guanghua(School of Food and Biological Engineering; School of Chemistry and Chemical Engineering; School of Pharmacy, Jiangsu University, Zhenjiang  Jiangsu,212013, C

6、hina)Abstract  Objective: To study the extraction technology and antioxidant activity of polysaccharides from Portulaca oleracea L. Methods： The content of polysaccharides of Portulaca oleracea L. was determined by the method of phenolsulphate acid. On the basis of single factors tests, the fou

7、r factors including temperature, solidliquid ratio, time and the extraction times on the extraction rate of the polysaccharides were studied by orthogonal experimental design. The salicylic acid method was used to inspect the ability to scavenge hydroxyl radicals of the polysaccharides from Portulac

8、a oleracea L.  Results： Temperature was an important factor for the extraction rate of the polysaccharides. The optimal extraction technology conditions were that the temperature was 100 , the extraction time was 2 h, the solidliquid ratio was 115 and the extraction times were 4 times. The extr

9、action rate, yield and content of polysaccharides were 94.26%, 15.50% and 22.60%, respectively. The polysaccharides has good ability to scavenge hydroxyl radicals, and the scavenging ability related with the concentrations. The scavenging rate was 50% at the concentration of 3.5 mg/mL, and the scave

10、nging rate was 90% at the concentration of 17.6 mg/mL. Conclusion： This extraction technology could be used for the extraction of the polysaccharides from Portulaca oleracea L. The polysaccharides has good antioxidant activity at a high concentration.Key words  Portulaca oleracea L; polysacchar

11、ides; extraction technology; antioxidant activity; hydroxyl radicals馬齒莧（Portulaca oleracea L.）系馬齒莧科馬齒莧屬一年生肉質草本植物，是藥食同源野生植物之一，既是一種保健功能食品，又具有重要的藥用價值。多糖是構成生命的四大基本物質之一，具有重要的生物活性。研究表明1-3，馬齒莧多糖能活化巨噬細胞，增強機體免疫功能，并具有抗腫瘤作用，對油脂具有較強的抗氧化能力。但有關馬齒莧多糖提取工藝的研究報道較少4,5。本文在單因素試驗的基礎上采用正交試驗優(yōu)化馬齒莧多糖的水提工藝，并考察粗多糖清除羥自由基的活性，為馬齒

12、莧功能食品和藥品的開發(fā)提供基礎。1  材料與方法1.1  材料與儀器    馬齒莧干品：鎮(zhèn)江江揚國藥有限公司提供，經鎮(zhèn)江市藥檢所陳黎主任藥師鑒定為Portulaca oleracea L，石油醚80 脫脂12 ，35 烘干備用。    醫(yī)用乙醇純度為95%，其他所用試劑均為分析純。    VIS7220型可見分光光度計（北京瑞利分析儀器公司）；R200旋轉蒸發(fā)器（瑞士Büchi公司）；電子天平（北京賽利多斯儀器系統(tǒng)有限公司）。1.2  實驗方法1.2.1 

13、 馬齒莧多糖的提取    稱取適量馬齒莧置于圓底燒瓶中，按一定固液比、水浴溫度和浸提時間在熱水浴中回流浸提數次，冷卻后過濾，合并上清液；上清液減壓濃縮后，加入一定體積95%乙醇，使終濃度為80%進行沉淀，所得沉淀依次用無水乙醇、丙酮、無水乙醚洗滌,干燥后得粗多糖樣品粉末。1.2.2  單因素實驗    影響多糖提取率的主要因素有溫度、時間、固液比和提取次數等。本實驗提取溫度選取40 、60 、80 、90 、100 5個水平，固液比選取19,111,113,15,117,120共6個水平，浸提時間選取 , , ,4 ,5 5

14、個水平，提取次數選取1,2,3,4,5次5個水平，分別進行單因素試驗。1.2.3  正交實驗設計    根據單因素實驗結果，以多糖提取率為考察指標，選取浸提溫度、固液比、浸提時間和次數作為考察因素，各取3個水平，進行正交實驗設計，優(yōu)化馬齒莧粗多糖的提取工藝條件，并對優(yōu)化條件進行驗證試驗。1.2.4  多糖含量測定61.2.4.1  標準曲線的制作  精確稱取105 干燥至恒重的標準葡萄糖20 mg，用100 ml重蒸水定容。標準液稀釋成質量濃度為30,60,90,120,150,180 g/ml的溶液，分別吸取稀釋液0.6

15、ml，加入50 g/L苯酚1.2 ml混合后迅速加入4 ml濃硫酸，混合均勻后，30 放置30 min，在波長490 nm 處測定光密度，空白對照以重蒸水代替糖溶液。以糖濃度（C）為橫坐標，光密度（D）為縱坐標，制作標準曲線。標準曲線線性回歸方程為D0.005 8C-0.031 2，0.999 6，其中D為光密度，C為葡萄糖溶液濃度（g/ ml） 。1.2.4.2  原料中多糖含量的測定  稱取適量馬齒莧于100 、固液比120、時間 條件下，提取5次，得到粗多糖。根據以上標準曲線計算多糖的濃度，再計算求得原料中多糖的質量和含量。根據標準曲線計算得到馬齒莧原料中多糖含量為4

16、.68%。1.2.4.3  樣品中多糖含量測定  稱取適量粗多糖樣品，蒸餾水定容至10 ml，精密吸取0.6 ml按1.2.4.1中方法操作，測定光密度，根據標準曲線計算多糖的濃度，再計算求得樣品中多糖的質量和含量。1.2.5  多糖提取率的計算多糖提取率=粗多糖樣品中多糖質量原料中多糖質量×100%1.2.6  體外抗氧化試驗清除羥自由基活性試驗    利用H2O2和Fe2+混合發(fā)生Fenton反應，生成具有很高反應活性的·OH，在體系內加入水楊酸捕捉·OH并產生有色物質，該物質在510 nm

17、下有最大吸收。但若加入具有清除作用的物質，便會與水楊酸競爭，從而使有色產物生成量減少。本實驗在Smironff等7報道的方法的基礎上進行了改進，在試管中依次加入6 mmol/L FeSO4溶液2 ml、不同濃度粗多糖溶液2 ml，6 mmol/L H2O2溶液2 ml，搖勻，靜置10 min，再加入6 mmol/L水楊酸溶液2 ml，搖勻，靜置30 min后于510 nm處測得不同粗多糖濃度下的光密度Di；用水代替水楊酸時測得某濃度粗多糖的本底光密度Dj；用水代替抗氧化劑時測得空白對照光密度D0。清除率按下式計算:清除率S=1-Di-DjDo×100%2  結果與分析2.1

18、  單因素試驗2.1.1  溫度對多糖提取量的影響  圖1為在固液比115、時間3 h和提取1次條件下不同提取溫度對馬齒莧多糖提取質量的影響。 可以看出多糖質量隨溫度升高而增加， 90 以后多糖質量增加很少。因此提取溫度為90 較為適宜。圖1  溫度對多糖提取量的影響（略）Fig 1  Effect of temperature on polysaccharides weight2.1.2  固液比對多糖提取量的影響  圖2為提取溫度90 、時間3 h和提取1次條件下，不同固液比對馬齒莧多糖提取質量的影響。結果表明，在固液比

19、大于115時，隨著固液比的減小，多糖質量迅速增加，當固液比小于115后，隨著固液比的減少，多糖質量增加不多。由于浸提液在后續(xù)工藝中須經過濃縮步驟，初期加水量過大會使后續(xù)濃縮能耗增加，效率降低，因此在實際提取過程中固液比為115較為合適。    圖2  固液比對多糖提取量的影響（略）Fig 2  Effect of solidliquid ratio on polysaccharides weight2.1.3  提取時間對多糖提取量的影響  圖3為提取溫度90 、固液比115、提取1次條件下不同提取時間對馬齒莧多糖提取質量的

20、影響。結果表明，多糖質量隨提取時間延長而增加，3 h 以后多糖質量增加較小。考慮到提取時間對能耗以及多糖結構穩(wěn)定性的影響，實際提取時間為3 h 較合適。    圖3  提取時間對多糖提取量的影響（略）Fig 3  Effect of time on polysaccharides weight2.1.4  提取次數對多糖提取量的影響  圖4為提取溫度90 、固液比115、提取時間3 h 條件下不同提取次數對馬齒莧多糖提取質量的影響?？梢?，多糖質量隨提取次數的增加而增加，提取3次后，多糖質量增加較小。因此實際提取次數為3次較合

21、適。    圖4  提取次數對多糖提取量的影響（略）Fig 4  Effect of extraction times on polysaccharides weight    2.2  正交試驗和方差分析結果    在單因素試驗結果的基礎上，以多糖提取率為考察指標，選定4個因素3個水平進行正交試驗，因素水平見表1，正交試驗結果見表2。    表1  多糖提取正交試驗因素水平表（略）Tab 1  Factors and lev

22、els of orthogonal ofpolysaccharides extraction（略）表2  多糖提取正交試驗結果（略）Tab 2  Results of orthogonal of polysaccharides extraction由正交試驗結果和極差分析可知，影響馬齒莧粗多糖提取率因素的主次順序為浸提溫度(A)、時間(B)、提取次數(D)、固液比(C)；最優(yōu)組合為A3B1C2D3，即提取溫度100 、提取時間2 h、固液比115、提取4次。    表3為方差分析結果，各因素對實驗結果的影響程度是溫度>時間>提取次數> 固液比，溫度有顯著性差異，這與上面的分析結果一致。    表3  多糖提取方差分析表（略）Tab 3   Analysis of variance of polysaccharides extraction對優(yōu)化工藝條件（溫度100