原核蛋白表達(dá)（上清表達(dá)）案例_第1頁
原核蛋白表達(dá)（上清表達(dá)）案例_第2頁
原核蛋白表達(dá)（上清表達(dá)）案例_第3頁
原核蛋白表達(dá)（上清表達(dá)）案例_第4頁
免費(fèi)預(yù)覽已結(jié)束，剩余1頁可下載查看

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、原核蛋白表達(dá)（上清表達(dá)）案例原核蛋白表達(dá)（上清表達(dá)）案例1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊钥蛻籼峁┑哪康牡鞍谆驑?gòu)建表達(dá)載體，通過原核蛋白表達(dá)體系獲得目的蛋白A。2. 實(shí)驗(yàn)設(shè)計（1） 分析客戶提供的目的蛋白序列，設(shè)計蛋白表達(dá)方案；（2）選擇鐘鼎特色載體pCzn1，構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pCzn1-A；（3） IPTG誘導(dǎo)進(jìn)行目的蛋白表達(dá)，并且優(yōu)化表達(dá)條件，將誘導(dǎo)條件調(diào)整至37，經(jīng)分析目標(biāo)蛋白主要呈可溶形式表達(dá)，通過Western Blot檢測蛋白A是否表達(dá)； （4）通過上清純化方式，Ni柱親和純化獲得目的蛋白A，SDS-PAGE檢測純化蛋白純度，BSA方法測定蛋白濃度。3. 蛋白分析（1）經(jīng)EditSeq翻譯目的蛋白A序

2、列：m.w.=10.66kd，pI=6.64（2）經(jīng)UniProt匹配，蛋白A物種來源：擬南芥（3）目的基因稀有密碼子分析及蛋白結(jié)構(gòu)分析蛋白親疏水分析蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域分析蛋白信號肽預(yù)測分析結(jié)果：目的蛋白整體呈親水性、無跨膜結(jié)構(gòu)域、無信號肽序列，可嘗試全長表達(dá)。結(jié)論：將目的基因構(gòu)建在鐘鼎特色載體pCzn1上，可用于原核表達(dá)上清表達(dá)，利用載體自帶信號肽分泌表達(dá)，并在目的蛋白N端添加His標(biāo)簽便于純化。4. 表達(dá)載體構(gòu)建4.1 pCzn1-A質(zhì)粒酶切驗(yàn)證：鐘鼎特色載體pCzn1酶切鑒定Marker: 200,500,800,1200,2000,3000,4500Line1: 酶切前質(zhì)粒Line2: 酶切后質(zhì)粒基因名稱：A（OD260/OD280:1.82）酶切位點(diǎn)：NdeI/XbaI 4.2 pCzn1-A質(zhì)粒測序驗(yàn)證：部分序列比對結(jié)果圖5.蛋白表達(dá)及純化蛋白表達(dá)鑒定SDS-PAGE分析M: 蛋白質(zhì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)1: 未誘導(dǎo)2: 誘導(dǎo)后3: 誘導(dǎo)破碎后上清4: 誘導(dǎo)破碎后沉淀 蛋白純化SDS-PAGE分析M: 蛋白質(zhì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)1: 破碎后處理樣品2: 流出3: 洗脫蛋白Western Blot鑒定分析M: 蛋白質(zhì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)1

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論