美國藥典溶出度法聯(lián)合高效液相色譜分析低釋放眼用植入制劑

1、美國藥典溶出度4法聯(lián)合高效液相色譜分析低釋放眼用植入制劑David C. Browne and Shawn Kieselmann*Intertek, 291路東22號，塞勒姆工業(yè)園，白宮，美國新澤西州08888目的建立美國藥典溶出度4法聯(lián)合高效液相色譜分析低劑量緩釋眼用植入制劑的方法背景眼部植入制劑是一種體積小，以聚合物為基底的圓盤或者圓柱形的藥用制劑，可改善藥物進入眼睛后的治療釋放（1）。植入劑一些常見的類型包括鞏膜外層植入劑，放置在眼睛的中緯線上；和玻璃體內(nèi)植入劑，經(jīng)外科手術(shù)放置在眼睛（2）玻璃體內(nèi)。圖1展示了眼睛的解剖圖和各種植入劑的放置位置。眼植入物用于治療各種疾病，如糖尿病視網(wǎng)膜病變

2、和黃斑變性（1）。選擇USP4法來測試該類產(chǎn)品的溶出度是由于該法采用層流的方式與體內(nèi)條件具有良好的相關(guān)性，并且開環(huán)的配置方式提供的漏槽條件有利于難溶藥物的溶出。 實現(xiàn)目標(biāo)該方法的建立主要有三個目標(biāo)。第一，由于眼部植入制劑藥物釋放濃度低，需要優(yōu)化色譜條件以獲得定量限1ng/ml。其次，確定美國藥典溶出度4法在測試過程中產(chǎn)生的干擾或吸附。最后，用美國藥典溶出度4法聯(lián)合高效液相色譜法獲取溶出曲線。方法學(xué)實驗初期，選取Sotax CE 7 smart溶出儀（開環(huán)），pH 7.4的磷酸鹽緩沖液作為溶出介質(zhì)進行實驗。泵流速設(shè)置為最低流速（1.5ml/min），用以模擬體內(nèi)條件，因為人體眼部玻璃體的流速大約

3、為2l/min（3）。一個劑量單位的藥物置于鋪有玻璃珠的22.6mm的流通池內(nèi)。溶出液直接在線注入高效液相色譜儀進行分析，幾天內(nèi)每小時采樣一次。不推薦使用收集器和自動進樣器，因為待分析物與一些塑料會發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。圖1 眼部解剖圖和局部給藥的主要方法為使溶出液直接注入高效液相色譜儀，溶出儀出口管路經(jīng)縮小接頭與一PEEK管相連，然后進入進樣閥。在進樣位置，溶出液流經(jīng)閥門，進入廢液接口。在載樣位置，溶出液充滿進樣環(huán)。閥開關(guān)由電子控制。進樣閥是連接到Perkin Elmer Series 200高效液相色譜系統(tǒng)（不包括進樣器）。由于采用的是低流速1.5ml/min，進樣環(huán)的后壓很小，不會對系統(tǒng)的配件和

4、連接部分造成損害。樣品分析使用直徑2.1mm 的SB -苯基色譜柱，進樣量500L以提高檢測靈敏度。 HPLC流速為0.5ml/min，檢測波長為280nm。優(yōu)化的色譜條件可分析濃度低至1ng/ml的樣品。實驗初期評估結(jié)果顯示，待測物在pH值7.4的磷酸鹽緩沖液中難溶，且產(chǎn)生降解。在該溶液中添加0.1%的十二烷基硫酸鈉（SDS）顯著增加藥物的溶解度和穩(wěn)定性。實驗表明，使用氯化鈉代替SDS也可增加藥物的溶解度和溶液穩(wěn)定性。最終，選取按英國藥典制備的pH值7.4磷酸緩沖鹽生理鹽水作為藥物釋放介質(zhì)，既有生物意義，又有功效。在溶出條件下測試空白溶媒，10ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液和定量限濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液1ng

5、/ml， 24h，用于觀測可能產(chǎn)生的干擾。圖2是上述3種溶液的疊加圖。圖2 空白溶媒，最低定量限和10ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液HPLC疊加圖一旦儀器參數(shù)優(yōu)化完成，將單個樣品在溶出條件下測試14天。在第一個24小時內(nèi)，采用自動程序進樣器連接到液相色譜進樣閥，每隔1h采樣分析一次。從24到72小時，每兩小時取樣一次。72h后，每4小時采樣一次。經(jīng)2周測試，獲取待分析物的溶出曲線。圖3是14天內(nèi),以濃度ng/ml為單位的溶出率曲線圖；圖4顯示以質(zhì)量為單位的溶出率曲線圖。圖3 待測物的洗脫速率圖4 待測成分的溶出曲線結(jié)果優(yōu)化的條件下確保待測物具有足夠的檢測靈敏度，保留時間只需約4.3min。溶出無干擾。由于

6、進樣重復(fù)性較差，導(dǎo)致1ng/ml時回收率較高。這主要是自動進樣器清洗和填充樣品環(huán)時間不足所致。這導(dǎo)致響應(yīng)值低而含量測定值偏高。然而，該數(shù)據(jù)表明在溶出試驗過程沒有發(fā)生吸附。隨后的實驗中，經(jīng)設(shè)定進樣器清洗程序，增加進樣量至500L，進樣重復(fù)性得以提高，。14天的溶出曲線中，藥物溶出率最初為17ng/min，在48h逐步下降到6ng/min 。14天的實驗，溶出率穩(wěn)定在3ng/min。溶出趨勢呈規(guī)律性變化，由于植入劑的特殊設(shè)計，藥物溶出度釋放緩慢。結(jié)論研究開發(fā)了一種ng/ml水平眼部植入制劑溶出度測定方法。使用窄口徑HPLC柱，進樣量500L。檢測限小于1ng/ml，適于分析低濃度釋放的眼部植入劑。

7、Sotax CE 7 smart溶出度4法測定儀實現(xiàn)與HPLC的在線分析。在溶出度測試條件下，溶媒無干擾，1ng/ml水平無吸收。生成為期兩周的單一眼植入制劑的溶出度曲線。因該方法與體內(nèi)溶出相關(guān)，具有潛在的廣闊的應(yīng)用前景。參考文獻1. Lee, S. S.; Yuan, P.; Robinson, M. R. Ocular Implants for Drug Delivery. In Encyclopedia of Biomaterials and Biomedical Engineering; Bowlin, G. L., Wnek, G., Eds.;Informa Healthcare: New York, 2004; Vol. 2, pp 11051119.2. Kim, H.; Robinson, M. R.; Lizak, M. J.; Tansey, G.; Lutz, R. J.;Yuan, P.; Wang, N. S.; Csaky, K. G. Controlled Drug Release from an Ocular Implant: An Evaluation Using Dynamic Three-Dimensional Magnetic Resonance Imaging. Invest. Ophth. Vis.