油浸食品中防腐劑反相高效液相色譜法測(cè)定(一)

1、油浸食品中防腐劑反相高效液相色譜法測(cè)定(一)    【關(guān)鍵詞】 防腐劑檢測(cè)對(duì)于油浸食品中的防腐劑檢測(cè)，國標(biāo)GB/T500929-2003中沒有明確規(guī)定處理與檢驗(yàn)方法，實(shí)驗(yàn)室一般采用酸性乙醚萃取、濃縮，氣相色譜法檢測(cè)。該方法由于填充柱的吸附及柱效能差別較大，使標(biāo)準(zhǔn)系列線性差，最低檢出限較高，對(duì)于含量低或稀釋倍數(shù)大的樣品無法檢測(cè)。本方法采用乙醇?xì)溲趸c混合液萃取，反相液相色譜紫外檢測(cè)器檢測(cè)，有效消除萃取中乳化現(xiàn)象，提高分析靈敏性和準(zhǔn)確性。1 儀器與試劑11 主要儀器 L7000型高效液相色譜系統(tǒng)(日本日立HITACHI公司)，配L7420型UVVis檢測(cè)器，

2、D7000色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；802型離心機(jī)(上海手術(shù)器械廠)；XK96B型快速混合器(姜堰新康醫(yī)療器械有限公司)。12 試劑 苯甲酸和山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：100mg/ml(國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心)；001mol/L氫氧化鈉乙醇溶液;008mol/L氯化氫溶液；002mol/L乙酸銨溶液；石油醚乙醚混合液：石油醚(AR)+乙醚(AR)=3+1；甲醇：色譜純。 13 儀器條件 色譜柱：Kromasil C18(250×46mm，ID5m)；流動(dòng)相：甲醇+002mol/L乙酸銨溶液=5+95；流速：10ml/mim；進(jìn)樣量：5l;柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm。14 方法 (1)樣品處理:準(zhǔn)

3、確稱取混勻后的樣品100g于10ml的具塞離心管中，加入50ml的石油醚乙醚混合液,用快速混合器使油脂溶解。加入001mol/L氫氧化鈉乙醇溶液40ml，上下振蕩20次，靜置15min后，在離心機(jī)中3500r/min離心5min，取下層溶液于10ml容量瓶中，按上述方法再萃取1次，合并2次萃取液，用008mol/L氯化氫溶液調(diào)節(jié)pH7，用雙蒸水定容至10ml，混勻，取適量定容液，用045m濾膜過濾，注入具塞小試管中，待測(cè)。同法做試劑空白。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及樣品測(cè)定：分別取苯甲酸和山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制出00，100，200，500，1000，1500，2000g/ml標(biāo)準(zhǔn)工作曲線濃度系列,在

4、上述儀器條件下，用5l定量環(huán)取標(biāo)準(zhǔn)及樣品溶液進(jìn)行液相色譜分析。以標(biāo)準(zhǔn)系列質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，樣品測(cè)定結(jié)果由其峰面積經(jīng)工作曲線計(jì)算得出。2 結(jié)果21 萃取劑的選擇 利用苯甲酸和山梨酸的酸性，分別采用Na2CO3、NaHCO3、NaOH等堿性化合物配成一定濃度的萃取液，通過對(duì)樣品萃取效率、時(shí)間及樣品的乳化情況進(jìn)行綜合比較，NaOH溶液效果較好，但由于其堿性強(qiáng)，為減少樣品萃取時(shí)的乳化及皂化，應(yīng)嚴(yán)格控制使用的濃度。通過食品中防腐劑最大使用限量與萃取效率計(jì)算，并用不同濃度的NaOH溶液實(shí)際操作對(duì)比，濃度在001005mol/L時(shí)效果較好。22 樣品的乳化與破乳 樣品中含有

5、大量的油脂，因此，在萃取過程中會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的乳化現(xiàn)象，為有效破乳，分別采用濃硫酸除脂、氯化鈉氫氧化鈉混合液萃取、乙醇?xì)溲趸c混合液萃取、離心破乳等不同方法對(duì)同一樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，乙醇?xì)溲趸c混合液萃取后再離心法破乳效果最好，使用中應(yīng)注意乙醇濃度不易太高，否則將有較多的有機(jī)雜質(zhì)、色素等進(jìn)入萃取劑中，使色譜柱分離困難。通過對(duì)不同濃度的乙醇?xì)溲趸c體系萃取分離效果的對(duì)比，乙醇含量在2535為最佳，離心時(shí)轉(zhuǎn)速越大，時(shí)間越長(zhǎng)，破乳率越高，一般在2000r/min以上，作用2min后，破乳率即可達(dá)100。23 萃取的效率 液液萃取是利用樣品中不同組分在不混溶2種溶劑中溶解度的不同來達(dá)到分離提取的目的，

6、要獲得較高的萃取效率，可采用高分配系數(shù)的萃取劑、增大萃取劑用量、多次萃取等方法。試驗(yàn)用10ml萃取劑分為1次、2次、3次對(duì)同一樣品萃取效率進(jìn)行比較，分別為945，983，986%，因此，采用2次萃取即可取得滿意的結(jié)果。24方法的線性范圍及檢出限量 本實(shí)驗(yàn)的線性范圍苯甲酸0200g/ml，r=099996，回歸方程Y=17000X+7514；山梨酸0200g/ml，r=099997，回歸方程Y=29442X+9204。取置信因子P=095，儀器噪聲電平的2倍為檢出限，則苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的最低檢出濃度為012和008g/ml。若取樣品100g，萃取后定容至10ml，則樣品的最低檢出濃度為苯甲

7、酸12mg/kg，山梨酸08mg/kg。25 方法的精密度和準(zhǔn)確度 用本方法平行測(cè)定含苯甲酸、山梨酸的樣品各6次。結(jié)果，苯甲酸平均含量110mg/kg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)28；山梨酸平均含量126mg/kg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)32。在樣品中加入高、低2種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用本法測(cè)得苯甲酸的回收率在9541026之間，山梨酸的回收率在961%1035之間，說明本方法精密度與準(zhǔn)確度均較高，結(jié)果可靠，見表1。表1 樣品加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）26 樣品的分析及方法比對(duì) 采用本方法與氣相色譜法同時(shí)測(cè)定不同樣品中的苯甲酸(樣品本底)、山梨酸(樣品加標(biāo))含量，經(jīng)測(cè)定結(jié)果配對(duì)t檢驗(yàn)，表明2法對(duì)同一

8、樣品檢測(cè)結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。表2 2種方法測(cè)定結(jié)果比較（略）注：t苯甲酸=1004,t山梨酸=1001,(t02(3)=1638),P>023 小結(jié)試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法的精密度和準(zhǔn)確度較高，線性范圍寬，比氣相色譜檢測(cè)法樣品處理更簡(jiǎn)單、快速，試劑消耗少，從而減少雜質(zhì)的引入，降低了空白值，提高結(jié)果的準(zhǔn)確性，為油浸食品中的防腐劑檢測(cè)提供更完善、可靠的手段。參考文獻(xiàn)1 Stephen P Holland.Extraction capacity and the optimal order of extractionJ.Journal of Environmental Economics and Management,2003，(45):569-58