大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目結題報告書(模板)

1、附表四：大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目結題報告書 項目名稱： 黔北麻羊GHSR基因外顯子2多態(tài)性及其與體重體尺的關聯(lián) 項目負責人： 李 達 項目主持單位： 貴州大學動物科學學院 指導教師： 羅衛(wèi)星 簽訂時間： 2012年9月6日 貴州大學教務處制項目名稱黔北麻羊GHSR基因外顯子2多態(tài)性及其與體重體尺的關聯(lián)分析項目等級國家級 省級級 校級 項目編號項目類別創(chuàng)新訓練項目 創(chuàng)業(yè)訓練項目 創(chuàng)業(yè)實踐項目負責人姓名李達班級09動科a班聯(lián)系方式項目組其他成員序號姓名班級項目分工2韋國渠09動科a班資料收集3趙英09動科a班樣品采集整理4宋桃偉研二指導實驗校內(nèi)導師羅衛(wèi)星職稱（職務）教師研究方向遺傳育種企業(yè)導師職

2、稱（職務）所屬單位資助經(jīng)費1500元支出經(jīng)費3000元立項時間2012年9月6日完成時間2013年4月28日項目實施情況（1500字以內(nèi)）：概要：本研究以黔北麻羊為試驗對象，采用DNA池結合PCR產(chǎn)物直接測序及PCR-SSCP技術對GHSR基因進行單核苷酸多態(tài)性檢測。結果發(fā)現(xiàn)，在黔北麻羊GHSR基因外顯子2處檢測到1個錯義突變位點G200A，氨基酸由甘氨酸變?yōu)榻z基酸，表現(xiàn)為3種基因型，分別命名為GG、GA和AA，其頻率分別為：、和，等位基因G、A頻率分別為和。2檢驗表明，黔北麻羊GHSR基因G200A位點分布符合Hardy-Weinberg平衡（）。基因型與體重體尺的關聯(lián)分析顯示，GG和GA基

3、因型個體的體重極顯著高于AA基因型個體（），而其余6個指標差異不顯著（）。用軟件自行設計2對引物，擴增山羊GHSR基因目的序列，引物送上海生工生物工程合成。1.4 PCR反應體系及條件 DNA池PCR PCR反應體系為DNA模板4 mL，上下游引物(10 pmol/mL)各3 mL，2Taq PCR MasterMix 25 mL，加雙蒸水至50 mL。PCR反應條件：94 預變性4 min，94 變性40 s， 退火45 s，72 延伸45 s，35個循環(huán)，72 再延伸10 min，最后4 保存。 1.4.2 PCR-SSCP PCR反應體系為15 mL，包括DNA模板2 mL，上下游引物(

4、10 pmol/mL)各1 mL，2Taq PCR MasterMix 7.5 mL，雙蒸水3.5 mL。PCR反應條件：94 預變性4 min，94 變性30 s，61.7 退火35 s，72 延伸35 s，30個循環(huán)，72 再延伸10 min，最后4 保存。單鏈構象多態(tài)性PCR產(chǎn)物用10%的聚丙烯酰胺凝膠（PAGE膠）電泳檢測。5 mL PCR產(chǎn)物中加入8 mL變性劑（95%去離子甲酰胺，25 mmol/L EDTA，0.025%二甲苯青，0.025%溴酚藍），于100 沸水浴中變性15 min，置于20 冰箱中保存15 min，同時將10%的PAGE膠進行250 V電壓預電泳30 min

5、，待點樣完成先進行250 V電壓預電泳15 min，后改為120 V電壓電泳10-12 h，最后銀染并判型。1.5 PCR產(chǎn)物測序 利用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物。選取特異性好、產(chǎn)量高的PCR產(chǎn)物送北京諾賽基因組研究中心（雙向）測序。1.6 統(tǒng)計分析 統(tǒng)計基因型頻率和等位基因頻率，并進行適合性卡方檢驗。構建單因素最小二乘模型：Yijk=m+marker+eijk。其中，Yijk為性狀表型值，m為總體均數(shù)，marker為標記基因型效應，eijk表示隨機殘差。采用統(tǒng)計軟件GLM模型對基因多態(tài)性與性狀間的相關性進行最小二乘分析，統(tǒng)計結果均以平均值標準差表示。項目創(chuàng)新點與特色（包括使用了什么樣

6、的創(chuàng)新方法、手段，項目的科學意義和應用價值等，500字以內(nèi)）： 運用DNA池和測序技術篩查SNP具有方便快捷、切實有效等優(yōu)點。李穩(wěn)等9運用DNA池檢測到了豬Dppa5基因的多態(tài)位點并利用單鏈構象多態(tài)性技術進行了驗證?；从罎?0先采用PCR-SSCP技術檢測了牛SIX3和SIX6基因在5個牛群體中的部分SNPs，后根據(jù)DNA池進行了對比，結果一致。而在李敬瑞的豬五個候選基因的遺傳變異研究碩士論文中，也可以看到該技術檢測SNP位點的準確性11。本試驗采用該方法首次在黔北麻羊GHSR基因外顯子2處檢測到1個SNP位點G200A，針對G200A位點，設計一對特異引物，采用SSCP技術對其進行檢測，結果

7、顯示該位點處確實存在突變位點G200A，這一結果驗證了運用DNA池技術篩查SNP位點的可靠性。DNA池作為一種快速篩查SNP位點的檢測方法，以其時間段和成本低等優(yōu)點必將在分子生物學領域受到更廣泛的運用項目詳細成果：包括發(fā)表論文（應注明論文題目、發(fā)表刊物、發(fā)表時間、作者、是否被SCI、EI收錄等詳細信息）、專利（專利申請及獲批、專利名稱、專利號、申請人、獲得日期等信息）、實物、軟件、圖紙、獲獎證書等。項目申請書中的預期成果及成果提交方式：1. 對貴州山羊品種的指標進行測量，進行體測與體重的相關分析2 . 在核心期刊上發(fā)表論文12篇。項目結題時取得的成果：1. 本試驗采用運用DNA池和測序技術篩查

8、SNP方法首次在黔北麻羊GHSR基因外顯子2處檢測到1個SNP位點G200A，針對G200A位點，設計一對特異引物，采用SSCP技術對其進行檢測，結果顯示該位點處確實存在突變位點G200A，這一結果驗證了運用DNA池技術篩查SNP位點的可靠性。DNA池作為一種快速篩查SNP位點的檢測方法，以其時間段和成本低等優(yōu)點必將在分子生物學領域受到更廣泛的運用。2. 在貴州農(nóng)業(yè)科學2013年第十期發(fā)表核心期刊論文一篇。項目實施的收獲與體會（1000字以內(nèi)）： 已有研究表明，GHSR是調(diào)節(jié)機體體重和能量平衡的一個重要組成部分，GHSR與其前體GHRL的結合具有促進GH分泌的功能3。Lei M等12研究發(fā)現(xiàn)G

9、HSR基因外顯子1上的G18790036A位點變異與雞皮下脂肪帶寬度極顯著相關。Shuto Y等7發(fā)現(xiàn)GHSR功能缺失的轉基因大鼠與對照組相比體重降低、脂肪組織減少。Pantel等13研究了2個身高矮小家族GHSR基因多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)選擇性損害GHSR活性導致了機體的生長障礙。目前，國內(nèi)外鮮見關于山羊GHSR基因的相關報道。本試驗采用PCR-SSCP技術檢測了黔北麻羊GHSR基因第2外顯子多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)G200A位點存在2種等位基因G和A，等位基因頻率分別為和，3種基因型GG、GA和AA，其頻率分別為、和，G為優(yōu)勢等位基因，GG為優(yōu)勢等位基因型。群體遺傳結構分析顯示，該位點多態(tài)信息含量表現(xiàn)為中度多態(tài)

10、且分布符合Hardy-Weinberg平衡，說明該位點能夠提供比較合理的遺傳信息。多態(tài)性與體重體尺性狀間的關聯(lián)分析表明，GG和GA基因型個體的體重極顯著優(yōu)于AA基因型個體（），而其他各性狀各基因型間差異未達到顯著性水平（），這提示了GHSR基因可能是影響黔北麻羊生長性狀的候選基因，但該位點能否作為黔北麻羊體重指標選擇的遺傳標記而用于指導地方山羊品種選育有待進一步研究。通過本實驗老師的認真指導與師兄的耐心引導，使我們一組的同學充分感受到了研究學術的氛圍，為我們今后從事各種工作追求真理與刻苦鉆研提供良好的經(jīng)驗，本次實驗對于我即將走進研究生更是意義重大，我將把它當做我研究生開始科研項目的第一步，總結

11、經(jīng)驗在今后的實驗中努力學習，不斷提高，使自己真正在學術方面有所成就。再次，非常感謝學校有這樣的創(chuàng)新型項目讓我們又自我提升的機會，同時再次感謝導師的指導。經(jīng)費使用情況序號經(jīng)費科目金額（元）1資料打印費1502樣品采集費40033、進行實驗階段 DNA提取用藥品材料，PCR化學試劑測序所需試劑，實驗試劑盒購買8004論文撰寫與發(fā)表版面費1650合計3000項目組承諾：我保證上述填報內(nèi)容的真實性，經(jīng)費使用規(guī)范合理，項目成果無弄虛作假情況。主持人簽名： 項目組其他成員簽名：日 期：指導教師意見（手寫）： 簽名： 年 月 日學院意見： 主管領導簽字（蓋章）： 年 月 日學校意見：綜合評價：（ ）優(yōu) （

12、）良 （ ）中 （ ）合格 （ ）不合格 簽字（蓋章） 年 月 日附錄一：項目總結報告項目名稱：黔北麻羊GHSR基因外顯子2多態(tài)性及其與體重體尺的關聯(lián)分析總結報告撰寫要求一、結構總結報告一般分題目、參加人姓名、參加人所在學院、指導教師姓名及職稱、摘要、關鍵詞（以上均需中、英文）、正文、感悟與寄語、參考文獻等幾個部分。其中：正文：（1）理工農(nóng)類，應由選題背景、方案論證、材料與方法、結果與分析、創(chuàng)新點、討論等部分組成；（2）經(jīng)管文法類，應由選題背景、方案論證、研究方法、研究內(nèi)容、研究結果、討論等幾個部分組成；（3）藝術、體育及其它按照學科專業(yè)特點參照以上畢業(yè)設計、論文、創(chuàng)作闡釋等撰寫。參考文獻：總結報告中引用他人成果、結論、觀點的文字，文中需有參考文獻標識。參考文獻作者3人以上時，必須寫齊前3人姓名，超過3人時，其后加“，等”。二、格式具體格式參考貴州大學本科畢業(yè)論文（設計）指南撰寫規(guī)范。三、字數(shù)總結報告不少于3000字。附錄二：項目成果（具體成果材料附后）成果