實驗報告-不同因素對酶的影響

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專業(yè)： 姓名： 學(xué)號： 日期： 地點： 裝 訂 線 實驗報告生物化學(xué)實驗（甲）酶的基本性質(zhì)實驗底物專一性劑、激活劑和抑制、最適溫度 課程名稱： 指導(dǎo)老師： 成績： 實驗名稱： 實驗類型： 分離鑒定實驗 同組學(xué)生姓名： 一、實驗?zāi)康暮鸵螅ū靥睿┒?、實驗?nèi)容和原理（必填）三、主要儀器設(shè)備（必填）四、操作方法和實驗步驟五、實驗數(shù)據(jù)記錄和處理六、實驗結(jié)果與分析（必填）七、討論、心得.酶的基本性質(zhì)底物專一性一、實驗?zāi)康暮鸵?. 了解酶的專一性。2. 掌握驗證酶的專一性的基本原理及方法。3. 學(xué)會排除干擾因素，設(shè)計酶學(xué)實驗。二、實驗基本原理酶是一種具有催化功能的蛋白質(zhì)。酶蛋白

2、結(jié)構(gòu)決定了酶的功能酶的高效性，酶催化的反應(yīng)（酶促反應(yīng)）要比相應(yīng)的沒有催化劑的反應(yīng)快103-1017 倍。 酶催化作用的一個重要特點是具有高度的底物專一性，即一種酶只能對某一種底物或一類底物起催化作用，對其他底物無催化反應(yīng)。根據(jù)各種酶對底物的選擇程度不同，它們的專一性可以分為下列幾種：1.相對專一性 一種酶能夠催化一類具有相同化學(xué)鍵或基團(tuán)的物質(zhì)進(jìn)行某種類型的反應(yīng)。2.絕對專一性： 有些酶對底物的要求非常嚴(yán)格只作用于一種底物，而不作用于任何其他物質(zhì)。如脲酶只能催化尿素進(jìn)行水解而生成二氧化碳和氨。如麥芽糖酶只作用于麥芽糖而不作用其它雙糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纖維素。3.立體異構(gòu)專一性 有些

3、酶只有作用于底物的立體異構(gòu)物中的一種，而對另一種則全無作用。如酵母中的糖酶類只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。 本實驗以唾液淀粉酶、蔗糖酶對淀粉、蔗糖水解反應(yīng)的催化作用來觀察酶的專一性。采用Benedict試劑檢測反應(yīng)產(chǎn)物。Benedict試劑是堿性硫酸銅溶液，具有一定的氧化能力，能與還原性糖的半縮醛羥基發(fā)生氧化還原反應(yīng)，生成磚紅色氧化亞銅沉淀。 Na2CO3+ 2H2O 2NaOH + H2CO3 CuSO4+ 2NaOH Cu(OH)2+ Na2SO4 還原糖(CHO or C=O)+ 2Cu(OH)2 Cu2O (磚紅色或黃色) + 2H2O + 糖的氧化產(chǎn)物在分子結(jié)構(gòu)上，淀粉幾乎

4、沒有，而蔗糖、棉子糖全無半縮醛基，它們均無還原性，因此它們與Benedict試劑無呈色反應(yīng)。 淀粉被淀粉酶水解，產(chǎn)物為葡萄糖；蔗糖和棉子糖被蔗糖酶水解，其產(chǎn)物為果糖和葡萄糖，它們都為具有自由半縮醛羥基的還原糖，與Benedict試劑共熱，即產(chǎn)生紅棕色Cu2O沉淀。本實驗以此顏色反應(yīng)觀察淀粉酶、蔗糖酶對淀粉和蔗糖的水解作用。三、實驗材料與試劑1、實驗材料 蔗糖酶(樣品）； 新鮮唾液（含唾液淀粉酶）；2、實驗試劑 蔗糖酶液 蔗糖酶液(樣品）加蒸餾水適當(dāng)稀釋，備用； 唾液淀粉酶液（學(xué)生自制） 取0.5mL唾液至25ml量筒中，用蒸餾水（稀釋）到25ml，用棉花過濾備用。唾液稀倍數(shù)因人而異，可稀釋50

5、400倍，甚至更高； 5%蔗糖（A.R.）溶液； 0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）； Benedict試劑 ；四、實驗器材與儀器1.漏斗， 2.脫脂棉花； 3.恒溫水?。?7，100）； 4.量筒；5.試管；6.燒杯；7.吸量管。 五、實驗操作方法和步驟 檢查試劑 取3支試管，按下表操作：注：1、檢查目的：試劑是否有干擾因素存在。2、也可對蔗糖酶液、唾液淀粉酶液進(jìn)行檢查是否也有干擾因素存在，請自己設(shè)計。淀粉酶的專一性取三支試管，按下表操作：注：可增加一組唾液淀粉酶液 經(jīng)100加熱3min處理后的樣品對照組。蔗糖酶的專一性取三支試管，按下表操作：注：可增加一組蔗糖酶液 經(jīng)100加熱3min

6、處理后的樣品對照組。六、結(jié)果分析討論各試管觀察結(jié)果依次是：（一）：1號藍(lán)綠色，2號藍(lán)色， 3號藍(lán)色Benedict試劑是堿性硫酸銅溶液，具有一定的氧化能力，能與還原性糖的半縮醛羥基發(fā)生氧化還原反應(yīng)，生成磚紅色氧化亞銅沉淀。3只試管都為藍(lán)色說明幾只試管中都沒有果糖和葡萄糖，說明在不加酶時，淀粉和蔗糖不易水解。試劑無干擾因素的存在。（1號試管是藍(lán)綠色可能是因為有少部分的淀粉水解）（二）：1號土黃色，2號黃綠色，3號藍(lán)色加入唾液淀粉酶，1號試管底物是淀粉，所以很容易水解成葡萄糖，與Benedict試劑共熱，即產(chǎn)生紅棕色Cu2O沉淀。所以1號顏色變化比較大。（2號可能是因為蔗糖在37恒溫水浴中也有少部

7、分水解，所以顏色變化，但變化不明顯。）總的來看可以看出唾液淀粉酶只對淀粉有催化活性，不能催化蔗糖水解，具有對淀粉的底物專一性。3號是對照。（三）：1號藍(lán)色， 2號紅棕色，3號藍(lán)色加入蔗糖酶，2號試管底物是蔗糖，所以很容易水解成果糖和葡萄糖，與Benedict試劑共熱，即產(chǎn)生紅棕色Cu2O沉淀。所以2號顏色變化比較大。（1號可能是因為淀粉在37恒溫水浴中也有部分水解，所以有顏色變化，但變化不明顯。）從這三支試管看出蔗糖酶只對蔗糖的水解 有催化作用，對淀粉無催化作用，具有對蔗糖的底物專一性。3號是對照。七、思考題1觀察酶專一性實驗為什么要設(shè)計這3組實驗？每組各有何意義？蒸餾水有何用？第一組作為整個

8、實驗的空白對照組，檢測 Benedict 試劑對實驗結(jié)果的顏色有何影響，排除干擾因素的存在。第二組作為檢測淀粉酶的專一性實驗組，第三組作為檢測蔗糖酶的專一性的實驗組。蒸 餾水作為每一個組中的空白對照，與組內(nèi)其余兩組進(jìn)行對照。2將酶液煮沸10min后，重做二、三的操作，觀察有何結(jié)果？各試管都為藍(lán)色，因為酶在煮沸過程中 已經(jīng)變性，失去催化活性，故不能催化各自對應(yīng)底物的水解反應(yīng)。3在此實驗中，為什么要用0.5%淀粉(0.3%NaCl)溶液？0.3%NaCl的作用是什么？0.3%NaCl 中的Cl- 是作為激活劑激活唾液淀粉酶的活性，使實驗結(jié)果不至于因為唾液淀 粉酶的活性不足而導(dǎo)致不同。八、注意事項1

9、.試管要干凈，所有試劑加量準(zhǔn)確，加好試劑后要搖勻。2.使用試劑時不要人為造成試劑間的互相污染；試劑用好瓶蓋要立即蓋好，防止試劑間的互相污染。以免實驗結(jié)果的錯誤。. 影響酶活性的因素激活劑和抑制劑一、實驗?zāi)康暮鸵?. 了解激活劑和抑制劑對酶促反應(yīng)速度的影響。2. 學(xué)習(xí)檢定激活劑和抑制劑影響酶促反應(yīng)速度的原理和方法。二、實驗基本原理在酶促反應(yīng)過程中，酶的活性常受某些物質(zhì)的影響，有些物質(zhì)能使酶的活性增加，稱為激活劑；某些物質(zhì)它們并不引起酶蛋白變性，但能使酶分子上的某些必需基團(tuán)（主要是指酶活性中心上的一些基團(tuán)）發(fā)生變化，因而引起酶活力下降，甚至喪失，致使酶反應(yīng)速度降低，稱為酶的抑制劑。酶的激活劑種類

10、： 1、一些簡單的無機(jī)離子，如Mg2+、Cl-等； 2、一些中等大小的有機(jī)分子，如抗壞血酸等也是激活劑，它們對某些含巰基的酶具有激活作用； 3、有些酶的催化作用易受某些抑制劑的影響，因而能除去抑制劑的物質(zhì)也可稱為激活劑，如EDTA能除去重金屬，因而能解除重金屬對酶的抑制作用。4、具有蛋白質(zhì)性質(zhì)的大分子物質(zhì)，這些激活劑是指可對某些無活性的酶原起作用的酶。 酶的抑制劑有許多種： 如重金屬離子（Ag+、Hg2+、Pb2、Cu2等）、CO、氯化物、H2S、砷化物、氟化物、生物堿、有機(jī)磷農(nóng)藥等都是抑制劑。 少量的激活劑或抑制劑就能影響酶的活性，而且常具有特異性。值得注意的是激活劑和抑制劑不是絕對的，各種

11、激活劑對酶的作用是不同的。 本實驗利用淀粉被水解的不同階段產(chǎn)物與碘有不同顏色反應(yīng)，定性觀察唾液淀粉酶在酶促反應(yīng)中激活或抑制現(xiàn)象。淀粉經(jīng)酶促水解為葡萄糖的不同階段的產(chǎn)物與碘作用的顏色反應(yīng)如下：本實驗中，Cl-為唾液淀粉酶的激活劑； Cu2+為唾液淀粉酶的抑制劑。利用淀粉被水解的不同階段產(chǎn)物與碘有不同的呈色反應(yīng)，定性觀察唾液淀粉酶在酶促反應(yīng)中激活和抑制現(xiàn)象。淀粉 + 碘 藍(lán)色淀粉 + 淀粉酶 水解產(chǎn)物 + 碘 顏色變化水解的程度是通過水解混合物遇碘溶液所呈現(xiàn)的顏色之變化來判斷的。三、實驗材料與試劑1、實驗材料 新鮮唾液2、實驗試劑 唾液淀粉酶（學(xué)生自制） 取唾液1ml至25ml量筒中，用蒸餾水稀釋

12、至25ml，用棉花過濾備用。唾液稀釋倍數(shù)因人而異，可稀釋50400倍，甚至更高。 0.1% 淀粉溶液 1.0% 氯化鈉溶液 1.0% 硫酸銅溶液 1.0% 硫酸鈉溶液 碘化鉀-碘液四、實驗器材與儀器1.試管及試管架2.量筒3.漏斗4.脫脂棉花5.點滴板6.吸量管7.恒溫水?。?7） 五、實驗操作方法和步驟取試管4支，按下表操作：注意： 找出準(zhǔn)確的保溫時間，是本實驗是實驗?zāi)芊癯晒Φ年P(guān)鍵步驟之一，唾液淀粉酶液濃度可根據(jù)個人情況而定，通過37水浴溶保溫計時，反應(yīng)時間最好在815min以內(nèi)，只有確定準(zhǔn)確的保溫時間才能進(jìn)行實驗。 （2） 加入酶液后，務(wù)必充分搖勻，保證酶與全部淀粉液接觸的反應(yīng)才能得到理想

13、的顏色梯度變化結(jié)果。（3）碘化鉀碘液不要過早地加到點滴板上，以免碘液揮發(fā)，影響顯色效果。六、結(jié)果分析討論1號試管為藍(lán)紫色，2號為淺黃色，3號為褐色，4號為淺褐色。試管 1 中顏色最深，說明 CuSO 4 可以抑制淀粉酶的活性；試管 2 中顏色最淺，基 本呈碘色，故淀粉酶活性最高，說明 NaCl 可以激活淀粉酶的活性；試管 3、4 中顏色基本 一致，且深淺居于試管1、2 之間，淀粉酶活性一般，說明Na+、SO 4 2- 對淀粉酶活性都沒有 影響。故總體上看，可以得出Cl - 是唾液淀粉酶的激活劑，Cu 2+ 是唾液淀粉酶的抑制劑。七、思考題1. 激活劑可分哪幾類？本實驗中NaCl、硫酸銅是屬于哪

14、種類型？激活劑可分為：簡單無機(jī)離子、中等大小有機(jī)分子、能除去抑制劑的物質(zhì)、具有蛋白質(zhì)性質(zhì)的大分子物質(zhì)等。NaCl 屬于簡單無機(jī)離子；CuSO4 屬于重金屬抑制劑。2. 本實驗中，1，2，3，4管各有何用意？為什么要設(shè)計第3管和第4管？1 管可觀察抑制劑對反應(yīng)影響的現(xiàn)象，2管可觀察激活劑對反應(yīng)影響的現(xiàn)象，第3管可以將1管中的Na+ 和2 管中的SO42- 對反應(yīng)的影響去除，4管作為空白對照。3. 抑制劑與變性劑有何不同？試舉例說明。抑制劑只改變酶的催化活性，并不使蛋白質(zhì)變性，其影響是可逆的；變性劑破壞了蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)，使蛋白質(zhì)變性，并且多數(shù)變性劑的影響是不可逆的。如：Cu2+ 是唾液淀粉酶的抑

15、制劑，但如果將Cu2+ 去除淀粉酶的活性又可以變?yōu)檎Ｋ?。八、注意事?.試管要干凈，所有試劑加量準(zhǔn)確，加好試劑后要搖勻。2.使用試劑時不要人為造成試劑間的互相污染，以免實驗結(jié)果的錯誤。3.試劑用好瓶蓋要立即蓋好，防止試劑間的互相污染。4.兩種淀粉不要弄錯。5.激活劑抑制劑實驗中，注意運用點滴板（顯色板）來控制保溫時間； 如1，2，3，4管顏色反應(yīng)無明顯差別，可能是唾流淀粉酶活力太高或太低，若酶活性太高可將酶稀釋后重做；若酶活性太低，可延長保溫時間或增加酶的濃度。. 影響酶活性的因素溫度，最適溫度測定一、實驗?zāi)康暮鸵?. 了解溫度對酶活力的影響；2. 學(xué)習(xí)測定最適溫度的原理和方法；二、實驗

16、基本原理酶的催化反應(yīng)受溫度影響很大，每一種酶所催化的反應(yīng)，在一定條件下，僅在某一溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出最大的活力，即反應(yīng)速度最大時的溫度，這個溫度稱為該酶促反應(yīng)的最適溫度，高于或低于最適溫度時，反應(yīng)速度逐漸下降。因此，酶促反應(yīng)與溫度的關(guān)系，用酶活力對溫度作圖，通常具有鐘罩形曲線特征。 溫度與酶活力的關(guān)系測定是選擇一定的條件，把底物濃度、酶濃度、反應(yīng)時間、pH等固定在最適狀態(tài)下，然后在一系列不同溫度條件下，進(jìn)行反應(yīng)初速度測定，以酶反應(yīng)初速度對溫度作圖，可以得一個鐘罩形的曲線，即為溫度酶活性曲線，在某溫度有一酶活力最大值，這個溫度即為最適溫度。實驗利用唾液淀粉酶為試驗對象，在065之間選擇不同的溫度，進(jìn)

17、行酶活力測定。根據(jù)淀粉被唾液淀粉酶水解的程度的不同，遇碘呈現(xiàn)顏色的變化來判斷酶活力的大小及最適溫度。 實驗采用蔗糖酶為試驗對象，在室溫至75之間選擇不同溫度進(jìn)行酶活力測定。蔗糖酶的活力常以其反應(yīng)產(chǎn)物還原糖（葡萄糖）的生成量來表示。測定還原糖的方法很多，本實驗選擇3,5二硝基水揚酸法測定還原糖量。在堿性條件下，3,5二硝水楊酸與還原糖溶液共熱后被還原成紅色氨基化合物，并在一定濃度范圍內(nèi)，還原糖的量與反應(yīng)溶液所呈棕紅色物質(zhì)顏色的深淺程度成正比。因此，可以用分光光度法測定酶促反應(yīng)后生成的還原糖量，從而測定蔗糖水解的速度和酶活力。三、實驗材料與試劑1、實驗材料 蔗糖酶液(樣品）加蒸餾水適當(dāng)稀釋，備用；

18、 新鮮唾液。2、實驗試劑 0.2mol/L醋酸緩沖液（pH4.6） 5%蔗糖（A.R.）溶液（W/V） 3,5二硝基水揚酸（簡稱DNS）試劑 0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl） KI-I2溶液 四、實驗器材與儀器1.試管及試管架， 2恒溫水浴， 3吸量管, 4滴管, 5點滴板，6分光光度計， 7制冰機(jī)。五、實驗操作方法和步驟一、溫度對唾液淀粉酶活力的影響1觀察溫度對酶活動的影響： 取5支試管，按下表操作。注意： 找出準(zhǔn)確的保溫時間，是本實驗是實驗?zāi)芊癯晒Φ年P(guān)鍵步驟之一，唾液淀粉酶液濃度可根據(jù)個人情況而定，通過37水浴溶保溫計時，反應(yīng)時間最好在815min以內(nèi)，只有確定準(zhǔn)確的保溫時間才能進(jìn)行

19、實驗。（2）加入酶液后，務(wù)必充分搖勻，保證酶與全部淀粉液接觸的反應(yīng)才能得到理想的顏色梯度變化結(jié)果。（3）碘化鉀碘液不要過早地加到點滴板上，以免碘液揮發(fā)，影響顯色效果。各管保溫時間要相同。2、繪制溫度-酶活力曲線圖，以反應(yīng)溫度為橫坐標(biāo)，反應(yīng)液顏色的深淺程度（代表酶活力的大?。榭v坐標(biāo)。繪制溫度酶活力曲線（鐘罩形），確定唾液淀粉酶的最適溫度。二、溫度對蔗糖酶活力的影響1、蔗糖酶最適溫度的測定 取試管7支進(jìn)行編號，0號管為空白對照，以蒸餾水代替酶液，17號順序為測定管，向各管加入0.2mol/L醋酸緩沖液（pH4.6）1ml， 2%蔗糖溶液0.5ml，然后將各編號管依次放入相應(yīng)溫度（見下表）的恒溫水浴或恒溫箱中，預(yù)熱2min，再逐管準(zhǔn)確計時加入0.5ml經(jīng)適當(dāng)稀釋的蔗糖酶液，迅速混勻；精確反應(yīng)10min后，加入1ml 3,5二硝基水楊酸（DNS）試劑，立即混勻，放入沸水浴中加熱5min。取出用流水冷卻至室溫后，向各管加入5ml蒸餾水，充分混勻。以0號管作空白對照A520值為零，在分光光度計上于520nm波長處測定各管的A520值，并作好記錄。2、繪制溫度酶的活力曲線圖 以反應(yīng)溫度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的A520（表示反應(yīng)初速度）為縱坐標(biāo)，繪制出溫度酶活力（A520值）曲線圖，從而可以測出蔗糖酶在本實驗條件下的最適溫度。六