生物藥學(xué)作業(yè)題

1、1. 改造鼠源性單克隆抗體的首要目的是 C. 降低免疫源性2. 能用于防治血栓的酶類藥物有 （   ）D. 尿激酶3. 以下可用于菌種純化的方法有  （    ）B. 平板劃線4. 下列屬于多肽激素類生物藥物的是     （     ）D. 降鈣素5. 由于目的蛋白質(zhì)和雜蛋白分子量差別較大，擬根據(jù)分子量大小分離純化并獲得目的蛋白質(zhì)，可采用  （    ）C. 凝膠過濾 6.  獲得目的基因最常用的

2、方法是：B. PCR 技術(shù)7. 促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素（EPO）基因能在大腸桿菌中表達(dá)，但卻不能用大腸桿菌的基因工程菌生產(chǎn)人的促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素，這是因?yàn)椋?#160;（） D. 大腸桿菌不能使人的促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素糖基化8. 以下能用重組DNA技術(shù)生產(chǎn)的藥物為  （） B.   生長(zhǎng)素9. 以大腸桿菌為目的基因的表達(dá)體系，下列正確的是：（） C. 容易培養(yǎng)，產(chǎn)物提純簡(jiǎn)單10. 外源基因在動(dòng)物細(xì)胞與大腸桿菌中表達(dá)產(chǎn)物的主要區(qū)別是（）A. 糖基化11. 篩選雜交瘤細(xì)胞（脾-瘤融合細(xì)胞）選用的培養(yǎng)基是 ：（）   B. HA

3、T12. 鼠源性單克隆抗體改造后得到小分子抗體，常用的是（） B. 單鏈抗體13. 能夠?qū)崿F(xiàn)微生物菌種定向改造的方法是 （     ）D. 基因工程14. 目前分離的1000多種抗生素，約2/3產(chǎn)自（）B. 放線菌  15. 基因表達(dá)最常用的宿主菌是：（）B. 大腸桿菌16. 分離純化早期，由于提取液中成分復(fù)雜，目的物濃度稀，因而易采用（     ）A. 分離量大分辨率低的方法17. 能夠用沙土管保存的菌種是 （     ）C. 青霉菌18. 人類第一個(gè)基

4、因工程藥物是：  （）A. 人胰島素19. 外源基因的高效表達(dá)會(huì)影響宿主細(xì)胞正常的生長(zhǎng)代謝。A.20. 抗體中結(jié)合抗原的部位分布在恒定區(qū)B.×21. 質(zhì)粒不具有自主復(fù)制能力。B.×22. 單克隆抗體就是單鏈抗體B.×23. 單克隆抗體只識(shí)別一種表位(抗原決定簇)的高純度抗體，一般來自單個(gè)淋巴細(xì)胞的克隆或一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的克隆。A.24. PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法的縮寫A.25. 生物藥物指包括生物制品在內(nèi)的生物體的初級(jí)和次極代謝產(chǎn)物或生物體的某一組成部分，甚至整個(gè)生物體用作診斷和治療疾病的醫(yī)藥品。A.26. 細(xì)胞因子：由細(xì)胞分泌的能調(diào)節(jié)生物有機(jī)體

5、生理功能，參與細(xì)胞的增殖、分化和凋亡的小分子多肽物質(zhì)27. 生物藥物：利用生物體、生物組織或其成分，綜合應(yīng)用生物學(xué)、生物化學(xué)、微生物學(xué)、免疫學(xué)、物理化學(xué)、生物技術(shù)和現(xiàn)代藥學(xué)的原理和方法，進(jìn)行加工、制造而成的一大類用于預(yù)防、治療和診斷疾病的制品28. 發(fā)酵工程制藥：采用現(xiàn)代工程技術(shù)手段，利用微生物的某些特定功能，為人類生產(chǎn)有用的藥品，或直接把微生物應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)過程的一種新技術(shù)。29. 誘變育種：誘變育種是指有意識(shí)地將生物體暴露于物理的、化學(xué)的或生物的一種或多種誘變因子下，促使生物體發(fā)生突變，進(jìn)而從突變體中篩選具有優(yōu)良性狀的突變株的過程。30. 基因表達(dá)：基因表達(dá)是指結(jié)構(gòu)基因在生物體中的轉(zhuǎn)錄、翻

6、譯以及所有加工過程。31. 抗體藥物：用于治療的單克隆抗體、抗體片段、基因工程改造的抗體、免疫偶聯(lián)物以及融合蛋白均可統(tǒng)稱為抗體藥物32. 亞單位疫苗：不含病原體核酸，選用能誘發(fā)宿主產(chǎn)生中和抗體的微生物蛋白或表面抗原而制成的疫苗。33. 人-鼠嵌合抗體：嵌合抗體是最早制備成功的基因工程抗體。它是由鼠源性抗體的V區(qū)基因與人抗體的C區(qū)基因拼接為嵌合基因，然后插入載體，轉(zhuǎn)染骨髓瘤組織表達(dá)的抗體分子。因其減少了鼠源成分，從而降低了鼠源性抗體引起的不良反應(yīng)，并有助于提高療效。34. 基因工程藥物：利用DNA重組技術(shù)生產(chǎn)出來的藥物被稱為基因工程藥物。35. 疫苗：用于人工主動(dòng)免疫的生物制品。36. 多肽藥物

7、：多肽和蛋白質(zhì)類藥物指用于預(yù)防、治療和診斷的多肽和蛋白質(zhì)類物質(zhì)生物藥物37. 生物技術(shù)制藥：生物技術(shù)制藥是指運(yùn)用微生物學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)等的研究成果，從生物體、生物組織、細(xì)胞、體液等，綜合利用微生物學(xué)、化學(xué)、生物化學(xué)、生物技術(shù)、藥學(xué)等科學(xué)的原理和方法進(jìn)行藥物制造的技術(shù)。38. 原生質(zhì)體融合：用脫壁酶處理將微生物細(xì)胞壁去除，制成原生質(zhì)，再用聚乙二醇（PEG）促進(jìn)原生質(zhì)體發(fā)生融合，從而獲得融合子的技術(shù)。39. 治療性酶：傳統(tǒng)的藥物分子作為受體激動(dòng)劑或抑制劑也能起到酶治療的部分效果，但是它們沒有催化功能，不能介導(dǎo)級(jí)聯(lián)反應(yīng)。酶的應(yīng)用包括溶解血栓以促進(jìn)灌注水平和加強(qiáng)對(duì)癌細(xì)胞的毒性40. 核酸藥物

8、：具有藥理活性的天然結(jié)構(gòu)的核酸類物質(zhì)和人工合成合成的核酸類物質(zhì)41. 雜交育種：雜交育種一般指將兩個(gè)基因型不同的菌株通過接合使遺傳物質(zhì)重新組合，再?gòu)闹蟹蛛x和篩選出具有新性狀的菌株。雜交后的雜種不僅能克服原有菌種活力衰退的趨勢(shì)，而且，雜交育種使得遺傳物質(zhì)重新組合，擴(kuò)大了變異范圍，改善了產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)量。42. 單克隆抗體：利用雜交瘤技術(shù)制備的單克隆抗體及其衍生物，由一個(gè)識(shí)別一種抗原表位的 B 細(xì)胞克隆產(chǎn)生的同源抗體43. 發(fā)酵工程產(chǎn)品開發(fā)的關(guān)鍵是篩選到高效菌株，一般優(yōu)良菌種的選育方法主要有 自然選育 、 誘變育種 和 原生質(zhì)體融合 。自然選育、 誘變育種 、 原生質(zhì)體融合44. 基因工

9、程藥物制造的主要步驟是：   ；   ；    ；    ；     ?；蚬こ趟幬镏圃斓闹饕襟E是：  目的基因的獲得 ； 構(gòu)建DNA重組體； 構(gòu)建工程菌 ； 目的基因的表達(dá) ； 產(chǎn)物的分離純化 ； 產(chǎn)品的檢驗(yàn) 。45. 根據(jù)真核基因在原核細(xì)胞中表達(dá)的特點(diǎn)，表達(dá)載體必須具備那些條件？表達(dá)載體必須具備下列條件：（1）能夠獨(dú)立的復(fù)制；（2）具有靈活的克隆位點(diǎn)和方便的篩選標(biāo)記，以利于外源基因的克隆、鑒

10、定和篩選；（3）應(yīng)具有很強(qiáng)的啟動(dòng)子，能為大腸桿菌的RAN聚合酶所識(shí)別；（4）應(yīng)具有阻遏子（5）應(yīng)具有很強(qiáng)的終止子（6）所產(chǎn)生的mRNA必須具有翻譯的起始信號(hào)。46. 列舉兩種亞單位疫苗白喉類毒素、破傷風(fēng)類毒素；流感嗜血桿菌莢膜多糖、腦膜炎球菌莢膜多糖；流感病毒血凝素和神經(jīng)氨酸酶；乙型肝炎HBsAg（基因工程疫苗）；人乳頭瘤病毒47. 簡(jiǎn)述生物藥物的藥理學(xué)特性 答： 1、活性強(qiáng): 體內(nèi)存在的天然活性物質(zhì)。 2、治療針對(duì)性強(qiáng),基于生理生化機(jī)制。 3、毒副作用一般較少，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高。4、可能具免疫原性或產(chǎn)生過敏反應(yīng)。48.簡(jiǎn)述發(fā)酵工程制藥的基本過程 答：1.菌種的選育2. 培養(yǎng)基的配置3 滅菌 4.擴(kuò)

11、大培養(yǎng)和接種 5.發(fā)酵過程 6.分離提純49基因工程制藥過程中陽(yáng)性克隆的篩選方法有哪些答：1根據(jù)重組子遺傳重組表型改變的篩選法，包括利用抗生素抗性基因進(jìn)行篩選通過互補(bǔ)使菌產(chǎn)生顏色來篩選，利用報(bào)告基因篩選克隆子；2根據(jù)重組子結(jié)構(gòu)特征的篩選法，包括瓊脂糖凝膠電泳比較重組DNA的大小，限制性內(nèi)切酶分析，印跡雜交方法，PCR法和DNA的序列分析 ；根據(jù)表達(dá)產(chǎn)物采用免疫化學(xué)方法篩選50.簡(jiǎn)述抗體藥物的研發(fā)歷史答；第一階段以1890年Behring發(fā)現(xiàn)白喉抗毒素為代表，其特點(diǎn)是用抗原免疫動(dòng)物來獲得多克隆抗體。第二階段以1975年Kohler創(chuàng)建雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體為代表。1986年，美國(guó)FDA批準(zhǔn)了世

12、界上第一個(gè)單抗治療性藥物抗CD3單抗 OKT3進(jìn)入市場(chǎng)，用于器官移植時(shí)的抗排斥反應(yīng)，此時(shí)單克隆抗體的研制和應(yīng)用達(dá)到了頂點(diǎn)第三階段以1994年Winter以基因工程方法制備人源化抗體為代表51簡(jiǎn)述基因工程藥物的質(zhì)量控制要點(diǎn) 答：1蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。2蛋白質(zhì)純度檢測(cè)。3蛋白質(zhì)Mr測(cè)定。4蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測(cè)定。5蛋白質(zhì)序列分析。6內(nèi)毒素分析，宿主蛋白液和酸殘留分析52簡(jiǎn)述生物藥物的用途答：1）作為治療藥物2)作為預(yù)防藥物3）作為診斷藥物4）用作其他生物醫(yī)藥用品53. 簡(jiǎn)述單克隆抗體經(jīng)篩選和克隆化的雜交瘤細(xì)胞僅能合成及分泌單一抗原表位的特異性抗體，是單克隆抗體。單抗的制作過程大體分為抗原的制備，動(dòng)物的免疫

13、，b細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，篩選雜交瘤細(xì)胞，篩選能產(chǎn)生某種特異性單抗的雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞的克隆化，體外大規(guī)模培養(yǎng)或動(dòng)物腹腔培養(yǎng)特異性雜交瘤細(xì)胞克隆，單抗的純化及鑒定。54. 簡(jiǎn)述基因工程制藥的主要步驟      ；        ；       ；          ；         ?；蚬こ趟幬镏圃斓闹饕襟E是： 

14、目的基因的獲得 ； 構(gòu)建DNA重組體； 構(gòu)建工程菌 ； 目的基因的表達(dá) ； 產(chǎn)物的分離純化 ； 產(chǎn)品的檢驗(yàn) 。55. 比較蛋白和多肽藥物的差異，并分別列舉三個(gè)多肽和蛋白質(zhì)藥物的名稱和功能相對(duì)大分子蛋白或抗體類，多肽在常溫下卻更穩(wěn)定，用量更少，單位活性也更高；與大分子蛋白相比，多肽化學(xué)合成技術(shù)成熟，多肽容易與雜質(zhì)或副產(chǎn)品分離；重組蛋白的質(zhì)量、純度和產(chǎn)量都難以保證。重組蛋白也不能引人非天 然氨基酸，不能在末端酰胺化，同時(shí)生產(chǎn)周期長(zhǎng)，成本高；多肽一般比蛋白抗體類藥物成本低，但比很多小分子藥 物的合成成本高。多肽藥物：格拉替雷，用于治療多發(fā)性硬化癥；蘭瑞肽、 伐普肽、巾白瑞肽、somatoprim 和

15、司格列肽等，用于治療胃腸胰內(nèi)分泌腫瘤、肢端肥大癥等多種相關(guān)疾病。蛋白藥物：重組人胰島素，用于治療糖尿?。恢亟M人促紅細(xì)胞生成素，用于治療貧血；重組人甲狀旁腺激素，用于治療骨質(zhì)疏松癥。56. 如何控制基因工程藥物質(zhì)量？  基因工程藥物的質(zhì)量控制要點(diǎn)如下。1蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。2蛋白質(zhì)純度檢測(cè)。3蛋白質(zhì)Mr測(cè)定。4蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測(cè)定。5蛋白質(zhì)序列分析。6內(nèi)毒素分析，宿主蛋白液和酸殘留分析57. 什么是單克隆抗體？簡(jiǎn)述制備過程。答：經(jīng)篩選和克隆化的雜交瘤細(xì)胞僅能合成及分泌單一抗原表位的特異性抗體，是單克隆抗體。單抗的制作過程大體分為抗原的制備，動(dòng)物的免疫，b細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞 融合形成雜

16、交瘤細(xì)胞，篩選雜交瘤細(xì)胞，篩選能產(chǎn)生某種特異性單抗的雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞的克隆化，體外大規(guī)模培養(yǎng)或動(dòng)物腹腔培養(yǎng)特異性雜交瘤細(xì)胞克隆， 單抗的純化及鑒定。58. 比較基因工程疫苗和傳統(tǒng)疫苗。 答：基因工程疫苗：1、免疫原性良好、效果持久及交叉免疫防護(hù)   2、可精細(xì)設(shè)計(jì)、便于操作、制備簡(jiǎn)便   3、能制備聯(lián)合疫苗   4、能重復(fù)利用   5、可用于免疫治療。   雖然基因工程疫苗擁有傳統(tǒng)疫苗所沒有的優(yōu)越性，但是目前還存在一下不足與缺點(diǎn)：1、安全性

17、尚不穩(wěn)定   2、免疫效果有待提高   3、抗核酸免疫反應(yīng)。59.基因工程制藥過程中陽(yáng)性克隆的篩選方法有哪些？1根據(jù)重組子遺傳重組表型改變的篩選法，包括利用抗生素抗性基因進(jìn)行篩選通過互補(bǔ)使菌產(chǎn)生顏色來篩選，利用報(bào)告基因篩選克隆子；2根據(jù)重組子結(jié)構(gòu)特征的篩選法，包括瓊脂糖凝膠電泳比較重組DNA的大小，限制性內(nèi)切酶分析，印跡雜交方法，PCR法和DNA的序列分析 ；根據(jù)表達(dá)產(chǎn)物采用免疫化學(xué)方法篩選60.何謂治療性疫苗。比較治療性疫苗和預(yù)防性疫苗的區(qū)別。治療性疫苗是指在已感染病原微生物或已患有某些疾病的機(jī)體中，通過誘導(dǎo)特異性的免疫應(yīng)答，達(dá)到治

18、療或防止疾病惡化的天然，人工合成或用基因重組技術(shù) 表達(dá)的產(chǎn)品或制品。治療性疫苗與預(yù)防性疫苗的主要區(qū)別是，一、預(yù)防性疫苗主要作用于未感染機(jī)體。而治療性疫苗的作用對(duì)象作為曾經(jīng)感染的病原體。二、治療性 疫苗能打破機(jī)體的免疫耐受狀態(tài)，預(yù)防性疫苗可通過實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行監(jiān)測(cè)，結(jié)果可靠，而預(yù)防性疫苗可能有一定的不良反應(yīng)伴有不同程度免疫損傷較為復(fù)雜且其準(zhǔn)確性尚 有爭(zhēng)議激發(fā)免疫應(yīng)答的類型不同。61.綜合分析生物藥物和化學(xué)藥物的差異，以及這些差異對(duì)藥物的治療領(lǐng)域和給藥類型的影響小分子化學(xué)藥通常是化學(xué)合成的，而大分子生物藥則通常是生物合成的。源頭的不同就直接造成兩者在結(jié)構(gòu)、成分、生產(chǎn)方法和設(shè)備、知識(shí)產(chǎn)權(quán)、配方、保存方法、

19、劑量、監(jiān)管方式以及銷售方式均有不同。與合成的小分子化學(xué)藥相比，生物藥在分子大小上要大一百至上千倍。比如抗體藥分子量高達(dá)15萬道爾頓，而化學(xué)藥通常不到1000道爾頓。有報(bào)道將小分子化學(xué)藥的大小比作一輛自行車，而生物藥的個(gè)頭則相當(dāng)于一架飛機(jī)，其實(shí)兩者的區(qū)別不僅僅是分子大小的差別。更重要的是，生物藥的分子結(jié)構(gòu)要遠(yuǎn)比化學(xué)藥復(fù)雜。相似還是仿制？由于生物藥具有更大的分子量和復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，生物藥的表征面臨很大挑戰(zhàn)。但由于上述特點(diǎn)，即使目前全世界最先進(jìn)的儀器設(shè)備全用上，也不可能將生物藥的結(jié)構(gòu)等特性完全表征清楚。這些特點(diǎn)也注定生物仿制藥不可能完全和原研藥一模一樣，即使是同一家公司生產(chǎn)的同一種生物藥，不同批次也會(huì)有

20、差異。即使是同一批次，在儲(chǔ)存、流通的過程中，生物藥（尤其是蛋白類藥物）的結(jié)構(gòu)和活性也不可避免地會(huì)有所變化。對(duì)于生物仿制藥生產(chǎn)商而言，由于知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)等多種原因，原研藥公司所采用的生產(chǎn)工藝甚至是所采用的細(xì)胞系都會(huì)不清楚，這就更導(dǎo)致生物仿制藥與原研藥不會(huì)一樣。另外，對(duì)于生物藥而言，其生產(chǎn)及流通過程更加復(fù)雜，要求也更高，有許多步驟，細(xì)胞培養(yǎng)的條件（溫度和營(yíng)養(yǎng)）、產(chǎn)品的加工、純化、儲(chǔ)存和包裝等各個(gè)環(huán)節(jié)都會(huì)影響產(chǎn)品的生產(chǎn)，整個(gè)過程中的微小差別都可能會(huì)對(duì)最終產(chǎn)品的質(zhì)量、純度、生物特性以及臨床效果產(chǎn)生較大影響。正由于上述種種原因，雖然化學(xué)仿制藥的英文是generic drug，但是生物仿制藥并非是bioge

21、neric，而是biosimilar，因?yàn)樯锓轮扑幹豢赡芘c原研藥“相似”（similar），絕不可能一樣。正是由于這個(gè)原因，中國(guó)有業(yè)內(nèi)人士認(rèn)為biosimilar應(yīng)該被譯為生物相似藥，而非生物仿制藥。而對(duì)于傳統(tǒng)的小分子化學(xué)藥而言，一般都有非常確定而且穩(wěn)定的化學(xué)結(jié)構(gòu)，現(xiàn)有的分析方法（比如紅外、核磁共振、X-射線衍射、質(zhì)譜等）足以將其化學(xué)結(jié)構(gòu)完全搞清楚?？偟膩碚f，生物藥的生產(chǎn)對(duì)于其生產(chǎn)條件的要求遠(yuǎn)比化學(xué)藥苛刻，當(dāng)然生產(chǎn)成本也更高，而且生物藥的臨床前和臨床階段的研發(fā)成本也更高。監(jiān)管差別基于此，監(jiān)管機(jī)構(gòu)（尤其在歐美）要求生物仿制藥生產(chǎn)商提供足夠的臨床數(shù)據(jù)，這也導(dǎo)致生物仿制藥在獲批上市前的仿制成本往往

22、比化學(xué)藥高上百倍。也正是由于生物仿制藥高昂的仿制成本和生產(chǎn)成本，一般生物仿制藥和原研藥相比，只能降價(jià)10%30%，而化學(xué)仿制藥則可高達(dá)80%甚至更高。所以，化學(xué)原研藥一旦專利過期，就會(huì)受到仿制藥的猛烈沖擊，而化學(xué)仿制藥也會(huì)很快搶占市場(chǎng)；生物原研藥則在專利過期后，其銷量受仿制藥的影響較小。生物藥和化學(xué)藥的另外一個(gè)重要區(qū)別是它們的免疫原性，幾乎所有的治療性蛋白都會(huì)在人體內(nèi)產(chǎn)生抗體。它們會(huì)通過中和內(nèi)源性因子而降低活力甚至誘發(fā)嚴(yán)重的副作用。上市后的監(jiān)管同樣有區(qū)別。化學(xué)仿制藥由于和原研藥結(jié)構(gòu)相同，且結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，歐美監(jiān)管機(jī)構(gòu)允許自動(dòng)替換政策（即藥劑師可以自主用化學(xué)仿制藥替換原研藥），無須通知開處方的醫(yī)生。而

23、對(duì)于生物仿制藥，歐盟法規(guī)明確要求不允許自動(dòng)替換。盡管美國(guó)目前還沒有明確要求，但是目前看，以后的政策有可能向歐盟靠近。這對(duì)于有志于進(jìn)軍生物仿制藥的企業(yè)而言，也是一個(gè)潛在的風(fēng)險(xiǎn)。所以，相較于化學(xué)藥，更加復(fù)雜并且通常也更加昂貴的生物藥推向市場(chǎng)也面臨更大的挑戰(zhàn)，尤其是對(duì)于低收入水平的發(fā)展中國(guó)家而言。盡管目前在我國(guó)，本土生物藥（如干擾素、生長(zhǎng)因子等）在總的藥物市場(chǎng)所占比例較小，而在歐美獲批的創(chuàng)新生物藥數(shù)量近幾年基本占獲批新藥總量的三成以上，由于生物藥價(jià)格一般更高，生物藥的市場(chǎng)份額在全球不斷快速上升（2011年約占16%）。62闡述鼠源性單克隆抗體改造后的小分子抗體類型和應(yīng)用（1） 人鼠嵌合抗體 

24、; 將鼠MAb的可變區(qū)和人抗體的恒定區(qū)組成嵌合抗體由于這兩部分在空間結(jié)構(gòu)上相對(duì)獨(dú)  立，其獨(dú)特的抗體親和力保持得很好，但因鼠單抗可變區(qū)的存在，應(yīng)用時(shí)仍有較強(qiáng)的排斥反應(yīng)。  （2）改形抗體  在嵌合抗體的基礎(chǔ)上進(jìn)一步將鼠MAb可變區(qū)中相對(duì)保守的FR替換成人的FR，保留與抗原結(jié)合的CDR部位  （3）Fab抗體  Fab段由重鏈V區(qū)及CH1功能區(qū)與整個(gè)輕鏈以二硫鍵形式連接而成，主要發(fā)揮抗體的抗原結(jié)合功能。Fab抗體只有完整IgG的1/3。（4）單鏈抗體  單鏈抗體(Single chain Fv，scFv)是由一段彈性連接肽(Linker

25、)把抗體可變區(qū)重鏈(VH)與輕鏈(VL)相連而成，是具有親代抗體全部抗原結(jié)合特異性的最小功能結(jié)構(gòu)單位。  （5）單域抗體  只含V區(qū)基因片段的小分子抗體，即只有VH或 VL一個(gè)功能結(jié)構(gòu)域，也能保持原單克隆抗體的特異性。這種小分子的抗體片段就稱為單域或單區(qū)抗體，其分子量?jī)H為整個(gè)Ig分子的112。  （6）分子識(shí)別單位  只含有一個(gè)CDR多肽的抗體。63、治療性酶的臨床使用范圍（1）助消化的治療酶類 （2） 消化酶可以用于補(bǔ)充內(nèi)源消化酶的不足，促進(jìn)食物中蛋白質(zhì)、脂肪、糖類的消化吸收，治療消化器官疾病和由其他各種原因所致的食欲不振、消化不良。（3） （2）心血

26、管疾病治療酶類（4） 心血管疾病治療酶類是能夠作用于血液循環(huán)系統(tǒng)的酶，臨床上具有獨(dú)特的抗凝、 止血、擴(kuò)展血管等功能。彈性蛋白酶能夠降低血脂，用于防治動(dòng)脈粥樣硬化。（5） （3） 抗腫痛治療酶類（6） 抗腫瘤的治療酶類，如L-門冬酰胺酶，是從大腸桿菌發(fā)酵液中提取的，是世界上第一個(gè)治療癌癥的酶，是令人矚目的抗白血病藥物，臨床上用于治療淋巴白血病和急性粒細(xì)胞白血病。（7） （4）其他治療酶類（8） 超氧化物歧化酶（SOD)用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和放射病。PEG-腺苷脫氨酶 (PEG-Adenase Bovine)用于治療嚴(yán)重的聯(lián)合免疫缺陷癥。DNA酶和RNA酶可以降低痰液的黏度，用于治療慢性支氣管炎

27、。細(xì)胞色素C用于組織缺氧急救，透明質(zhì)酸酶用于藥物擴(kuò)散劑。青霉素酶可以用于治療青霉素過敏。64、簡(jiǎn)述生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制特點(diǎn)  （1）結(jié)構(gòu)確認(rèn)的不完全性 生物技術(shù)藥物多數(shù)為蛋白質(zhì)或多肽及其修飾物，具有分子量相對(duì)較大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜多樣性和可變性等特點(diǎn)，通過現(xiàn)有的理化方法和手段不能完全確認(rèn)其化學(xué)結(jié)構(gòu)特征，如產(chǎn)品的空間構(gòu)象等。（2）質(zhì)量控制的過程性生物技術(shù)藥物的結(jié)構(gòu)特性容易受到各種理化因素的影響，且分離提純工藝復(fù)雜，因此其質(zhì)量控制體系是針對(duì)生產(chǎn)全過程，采用化學(xué)、物理和生物學(xué)等手段而進(jìn)行的全程、實(shí)時(shí)的質(zhì)量控制。生產(chǎn)過程中每一環(huán)節(jié)或制備條件的改變均可能影響其非臨床安全性評(píng)價(jià)的合理性。（3）生物活性檢

28、測(cè)的重要性生物技術(shù)藥物的生物活性與其藥效和毒性有一定或較好的相關(guān)性，因此藥效學(xué)和安全性研究應(yīng)關(guān)注生物活性的測(cè)定。鑒于生物技術(shù)藥物結(jié)構(gòu)確認(rèn)的不完全性，生物活性檢測(cè)成為反映生物技術(shù)藥物天然結(jié)構(gòu)是否遭受破壞、生產(chǎn)各階段工藝合理性和評(píng)價(jià)終產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要內(nèi)容，也成為非臨床藥理毒理、藥代等試驗(yàn)方案中劑量確定的依據(jù)。65、基因工程中的載體應(yīng)滿足什么條件1）能自我復(fù)制并能帶動(dòng)插入的外源基因一起復(fù)制；（2）載體分子的合適位置上必須有外源DNA插入的位點(diǎn)，即克隆位點(diǎn)，這些位點(diǎn)也就是限制性內(nèi)切酶的切點(diǎn)，在載體上單一的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)越多越好，這樣可以將不同限制性內(nèi)切酶切割后的外源DNA方便的插入載體。（3）具有

29、合適的篩選標(biāo)記，如抗藥性基因等，以便進(jìn)行重組體篩選和鑒定。（4）. 在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定性高且多拷貝，這樣可以保證重組體穩(wěn)定且高效傳代而不易丟失。 66、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體具有以下優(yōu)點(diǎn)：McAb為高純度單一抗體，在氨基酸序列以及特異性方面均為一致，檢測(cè)靈敏度極高；可以通過雜交瘤細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)進(jìn)行生產(chǎn)；雜交瘤細(xì)胞可以用液氮深凍法進(jìn)行長(zhǎng)期保存；可在分子水平上解析存在于病毒表面的抗原或受體；可以用不純的抗原制備純的McAb。但McAb也存在一些缺點(diǎn)：McAb特異性太強(qiáng)，有時(shí)不能檢出微生物突變株；有時(shí)不能產(chǎn)生與抗原交聯(lián)的功能；易受pH、溫度及鹽濃度的影響，或親和力較低、半衰期短；Mc

30、Ab制備程序復(fù)雜、工作量大。因此，可以采用常規(guī)抗體解決的問題就無須制備McAb。 67臨床前安全性評(píng)價(jià)的一般原則 （1）常規(guī)研究的適用性 鑒于生物技術(shù)藥物結(jié)構(gòu)和生物學(xué)性質(zhì)的專一性和多樣性，包括種屬特異性、免疫原性和無法預(yù)料的多種組織親和性等，常規(guī)的藥物毒性試驗(yàn)的研究思路，包括研究步驟、考察項(xiàng)目等，可能不一定完全適合生物技術(shù)藥物。（2）具體品種具體分析應(yīng)根據(jù)具體生物技術(shù)藥物的立題設(shè)計(jì)（包括藥物設(shè)計(jì)思路、作用機(jī)制、分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、創(chuàng)新性程度和特點(diǎn)等）、質(zhì)量控制、非臨床安全性和臨床特點(diǎn)（臨床適應(yīng)癥的性質(zhì)和用藥人群、臨床擬用藥劑量、是否已有較多人用經(jīng)驗(yàn)、預(yù)期重要臨床不良反應(yīng)等）和注冊(cè)法規(guī)中治療用生物技術(shù)

31、藥物注冊(cè)分類及申報(bào)資料項(xiàng)目要求、其它相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則等來對(duì)上述內(nèi)容進(jìn)行具體問題具體分析。對(duì)于那些在結(jié)構(gòu)和藥理作用上與已有大量臨床經(jīng)驗(yàn)的產(chǎn)品類似的生物技術(shù)藥物，可酌情減少毒性試驗(yàn)。（3）良好的試驗(yàn)管理規(guī)范（GLP）毒性試驗(yàn)條件應(yīng)符合 GLP 要求。若不符合 GLP 條件,應(yīng)闡明其對(duì)于總體安全性評(píng)價(jià)的影響。68、多肽蛋白藥物的優(yōu)勢(shì)和缺點(diǎn)肽類藥物多數(shù)源于內(nèi)源性肽或其他天然肽，因此，其結(jié)構(gòu)清楚，作用機(jī)制明確；與多數(shù)一般有機(jī)小分子藥物相比，肽類藥物具有活性高、用藥劑量小、毒副作用低、代謝終產(chǎn)物為氨基酸等突出特點(diǎn)；與蛋白類相比，較小的肽幾乎沒有免疫原性；可化學(xué)合成，產(chǎn)品純度高，質(zhì)量可控。其缺點(diǎn)在于：易降解

32、、半衰期較短；生物利用度差；大多不能口服，一般為注射劑，需要研發(fā)適當(dāng)?shù)慕o藥方式；大規(guī)模合成、分離純化難度大；大肽具有免疫原性。69、生物技術(shù)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究?jī)?nèi)容主要包括 （1）研究生物技術(shù)藥物產(chǎn)品的均一性。 （2）研究建立生物技術(shù)藥物產(chǎn)品生物學(xué)活性或者免疫學(xué)活性測(cè)定方法。（3）研究建立生物技術(shù)藥物產(chǎn)品的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品。（4）建立生物技術(shù)藥物目標(biāo)產(chǎn)品生產(chǎn)相關(guān)雜質(zhì)限量分析方法和標(biāo)準(zhǔn)。（5）在以上研究的基礎(chǔ)上制定出保證上述生物技術(shù)藥物產(chǎn)品安全有效并與WHO標(biāo)準(zhǔn)相一致的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和藥物分析方法。70、單克隆抗體原理 體內(nèi)不同克隆的B淋巴細(xì)胞可合成不同特異性的免疫球蛋白。當(dāng)機(jī)體受到抗原剌激后，抗

33、原表面的抗原決定簇被攜帶有相應(yīng)BCR的B細(xì)胞克隆識(shí)別，在Th 細(xì)胞的輔助下，該B細(xì)胞活化、增殖、分化為漿細(xì)胞，分泌針對(duì)同一抗原決定族的 抗體。由于這一抗體是由來源于同一 B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，只能識(shí)別單一抗原決定 簇，因此稱為單克隆抗體。 兩個(gè)或兩個(gè)以上不同特性的細(xì)胞借助物理或化學(xué)手段融合在一起，形成雜交細(xì)胞，雜交細(xì)胞同時(shí)具有兩種親本細(xì)胞的基因和特性。經(jīng)抗原免疫的小鼠脾細(xì)胞 (含有大量B細(xì)胞）能分泌特定抗體，但在體外不能長(zhǎng)期存活；而小鼠骨髓瘤細(xì)胞在體外可無限增殖，但不能分泌抗體。用一個(gè)骨髓瘤細(xì)胞和一個(gè)具有分泌抗體能 力的B淋巴細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞。這種雜交瘤細(xì)胞既具有骨髓瘤細(xì)胞無限 增殖的特性，

34、又具有免疫B細(xì)胞合成和分泌抗體的能力。由雜交瘤細(xì)胞無性繁殖 形成的細(xì)胞系分泌的單克隆抗體分子在結(jié)構(gòu)、活性、親和力等方面均相同，具有高度的均一性。71、基因工程小鼠制備人全抗體的優(yōu)缺點(diǎn)轉(zhuǎn)基因小鼠：將人抗體生產(chǎn)基因轉(zhuǎn)入小鼠，以替換小鼠的抗體生成基因。轉(zhuǎn)基因小鼠制備人抗體的優(yōu)點(diǎn)是，其功效優(yōu)于其它生產(chǎn)抗人體蛋白單抗技術(shù)。不足之處：(1)轉(zhuǎn)基因通常有體細(xì)胞突變和其它獨(dú)特的序列，導(dǎo)致不十分完全的人序列；(2)由于抗體是在小鼠體內(nèi)裝配，因而產(chǎn)生的單抗具有鼠糖基化模式，所以這些單抗最終并不是全人的；(3)轉(zhuǎn)基因小鼠表達(dá)的人Ig多樣性較少，而且在同一小鼠中不能夠產(chǎn)生IgG各亞類。 72、簡(jiǎn)述發(fā)酵工程中的菌種選育

35、 菌種選育是按照生產(chǎn)的要求，以微生物遺傳變異理論為依據(jù)，采用人工方法使菌種發(fā)生變異，再用各種篩選方法篩選出符合要求的目的菌種。菌種選育的目的包括改善菌種的基本特性，以提高產(chǎn)量，改進(jìn)質(zhì)量，降低成本，改進(jìn)工藝等。選育菌種的基本方法包括自然選育，誘變選育，代謝工程育種，基因定向育種，基因組改組等一系列方法。73、生物藥物質(zhì)量控制中的安全性檢測(cè)項(xiàng)目包括（1） 無菌試驗(yàn) 按照中國(guó)藥典進(jìn)行。注射用制品無菌試驗(yàn)有平皿法和濾膜法?？诜屯庥弥苿z查項(xiàng)目還包括需氧菌、厭氧菌、霉菌和支原體。（2） 熱原試驗(yàn)熱原試驗(yàn)一般采用家兔法。每只家兔耳沿靜脈注射人用最大量的3倍量藥物，判斷標(biāo)準(zhǔn)為每只家兔體溫升高不得超過0.6

36、，3只總和不超過1.6。對(duì)生物活性比較高的細(xì)胞因子產(chǎn)品可以考慮用內(nèi)毒素檢測(cè)替代家兔熱原試驗(yàn)。（3） 異常毒性試驗(yàn)主要檢查生產(chǎn)工藝中是否含有目標(biāo)產(chǎn)品以外的有毒物質(zhì)。具體方法參考中國(guó)藥典。常用動(dòng)物為小鼠和豚鼠，注射劑量分別是小鼠1ml和豚鼠5ml。由于大多數(shù)重組產(chǎn)品本身有很強(qiáng)的生物活性，注射量過大會(huì)導(dǎo)致藥物本身的生物活性引起毒性反應(yīng)。因此不同重組產(chǎn)品，劑量選擇和注射途徑要根據(jù)各自的生物學(xué)活性來確定。（1） 無菌試驗(yàn) 按照中國(guó)藥典進(jìn)行。注射用制品無菌試驗(yàn)有平皿法和濾膜法?？诜屯庥弥苿z查項(xiàng)目還包括需氧菌、厭氧菌、霉菌和支原體。（2） 熱原試驗(yàn)熱原試驗(yàn)一般采用家兔法。每只家兔耳沿靜脈注射人用最大量的

37、3倍量藥物，判斷標(biāo)準(zhǔn)為每只家兔體溫升高不得超過0.6，3只總和不超過1.6。對(duì)生物活性比較高的細(xì)胞因子產(chǎn)品可以考慮用內(nèi)毒素檢測(cè)替代家兔熱原試驗(yàn)。（3） 異常毒性試驗(yàn)主要檢查生產(chǎn)工藝中是否含有目標(biāo)產(chǎn)品以外的有毒物質(zhì)。具體方法參考中國(guó)藥典。常用動(dòng)物為小鼠和豚鼠，注射劑量分別是小鼠1ml和豚鼠5ml。由于大多數(shù)重組產(chǎn)品本身有很強(qiáng)的生物活性，注射量過大會(huì)導(dǎo)致藥物本身的生物活性引起毒性反應(yīng)。因此不同重組產(chǎn)品，劑量選擇和注射途徑要根據(jù)各自的生物學(xué)活性來確定。74、目前主要用來制備人源單克隆抗體的兩種方法窗體頂端(一）噬菌體抗體庫(kù) 噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)是噬菌體表面展示技術(shù)在基因工程抗體應(yīng)用上的一個(gè)成功范例，它可

38、以模擬體內(nèi)B淋巴細(xì)胞受到刺激后分化、成熟直至分泌抗體的過程。通過噬菌體表面展示技術(shù)，可將目的蛋白或多肽的編碼基因與編碼M13噬菌體顆粒末端蛋白的基因構(gòu)建成融合基因，將含有融合基因的重組M13噬菌體轉(zhuǎn)染大腸桿菌，可以在噬菌體顆粒表面展示目的蛋白。通過基因重組技術(shù)，將全套人抗體重鏈和輕鏈的V區(qū)基因與M13噬菌休基因構(gòu)建成融合基因，在噬菌體表面以抗體Fv片段-末端蛋白融合蛋白的形式表達(dá)，表達(dá)這些融合蛋內(nèi)的噬菌體群體就構(gòu)成了噬菌體抗體庫(kù)（phage antibody library)。通過免疫法篩選，可從中得到針對(duì)某一抗原的人抗體Fv 編碼基因。利用噬菌休抗體庫(kù)，不需要雜交瘤細(xì)胞就可得到目的單克降抗休的編碼基因，而且是人源性的。從理論上講，噬菌體抗體庫(kù)具有B細(xì)胞所編碼的全部抗體信息，從抗體庫(kù)中可篩選到任何一種抗體。出于該抗體庫(kù)中重、輕鏈?zhǔn)请S機(jī)組合的，又稱組合文