郁金藥材水溶性部分的指紋圖譜研究

1、郁金藥材水溶性部分的指紋圖譜研究蘭州大學(xué)藥學(xué)院藥學(xué)專業(yè)：劉曉麗 指導(dǎo)老師：封士蘭教授摘 要 目的：研究比較郁金水溶性部分和復(fù)方制劑的指紋圖譜，并計(jì)算指紋圖譜相似度，為郁金藥材及其復(fù)方制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。 方法：采用氣相法測定郁金和含郁金的復(fù)方制劑的各特征指紋圖譜,并且以每天三次、連續(xù)三天的進(jìn)樣模式，分別得到郁金水溶性樣品和復(fù)方制劑樣品的指紋圖譜各9張。郁金水溶性樣品色譜圖中得到了相對(duì)穩(wěn)定的7個(gè)共有峰，且在含郁金的復(fù)方制劑樣品中同樣具有與郁金相應(yīng)的7個(gè)峰。計(jì)算各色譜峰與共有模式的相似度以及各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)。郁金8個(gè)樣品的相似度分別為:0.6903、0.8960、

2、0.8012、0.8407、0.8997、0.6845、0.8400、0.7864，平均相似度為 0.7838；復(fù)方制劑9個(gè)樣品的相似度分別為：0.9713、0.9979、0.9894、0.9950、0.9981、0.9983、0.9921、0.9970、0.8933，平均相似度為0.9701。 郁金各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD%分別為：0.9953、0.3502、0.0000、0.3427、0.5233、0.4955、0.4622；復(fù)方制劑各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD%分別為：0.1742、0.1226、0.0000、0.1184、0.1801、0.1691、0.1826。 結(jié)論 該方法具有

3、快速、簡便、數(shù)據(jù)準(zhǔn)確等特點(diǎn);郁金指紋圖譜和復(fù)方制劑指紋圖譜的相似度都>0.78,重現(xiàn)性好,RSD均<1%。我們以共有峰進(jìn)行標(biāo)定，得到的色譜指紋圖譜具有一定的特征性，為郁金藥材和以水提為制劑工藝的含郁金的復(fù)方制劑的質(zhì)量控制提供了一定的技術(shù)支持和科學(xué)依據(jù).關(guān)鍵詞 指紋圖譜; 相似度評(píng)價(jià); 質(zhì)量控制;郁金;水溶性The curcuma raw material for medicine water-soluble part fingerprint atlas studiesdepartment of Pharmaceutical of lanzhou University :Liu xi

4、aoliInstructor：Feng Shilan ProfessorAbstract Purpose ：Research comparison curcuma water-soluble part and mixture (i.e. compound prescription preparation) the fingerprint atlas, and calculates the fingerprint atlas similarity, the curcuma quality control provides the basis for the compound prescripti

5、on preparation in. Method：Uses the GC determination curcuma and the mixture (compound prescription preparation) various characteristics fingerprint atlas, and by daily three, continual three day-long specimen handling patterns, obtains the curcuma and mixture fingerprint atlas 9 separately. In the c

6、urcuma sample chromatograph chart obtained relatively stably 7 altogether had the peak, also had similarly in the curcuma compound prescription preparation sample with the curcuma correspondingly 7 Peak。Calculates various chromatographs peak with to altogether have pattern similarity and Various chr

7、omatographs peak relative retention time relatively standard deviation (RSD%)。The curcuma 8 sample similarities respectively are: 0.6903、0.8960、0.8012、0.8407、0.8997、0.6845、0.8400、0.7864，The average similarity is0.7838；The compound prescription preparation 9 sample similarities respectively are: 0.97

8、13、0.9979、0.9894、0.9950、0.9981、0.9983、0.9921、0.9970、0.8933，The average similarity is0.9701。Curcuma various chromatographs peak relative retention time relatively standard deviation RSD% are 0.9953、0.3502、0.0000、0.3427、0.5233、0.4955、0.4622；Compound prescription preparation various chromatographs peak

9、 relative retention time RSD% are 0.1742、0.1226、0.0000、0.1184、0.1801、0.1691、0.1826。Conclusion：This method has,simple, the data fast accurate and so on the characteristics; The curcuma fingerprint atlas and compound prescription preparation fingerprint atlas similarity >0.78, the reproduction qual

10、ity is all good,all of RSD<1%。We by altogether have the peak to carry on the demarcation, obtains the chromatograph fingerprint atlas has certain characteristic value, For curcuma raw material for medicine and by water-withdraws the preparation craft curcuma compound prescription preparation qual

11、ity control has provided certain technical support and the scientific basis.Key words Fingerprint diagram ；Object；Quality control； Curcuma aromatica Salisb；Soluble 郁金藥材水溶性部分的指紋圖譜研究引 言 中成藥由于其成分極其復(fù)雜、有效成分及這些成分間相互的藥理作用不明確，導(dǎo)致其質(zhì)量很難控制。但是如果我們傳統(tǒng)的中藥想走出國門，走向世界，被歐美所接受，就必須進(jìn)行中藥質(zhì)量控制。中藥的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)不能簡單的等同于化學(xué)藥品的控制標(biāo)準(zhǔn)

12、，必須制訂中藥自己獨(dú)特的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。中藥盡管曾經(jīng)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中建立多項(xiàng)鑒別試驗(yàn),但也不能做到逐一味藥、逐一成分進(jìn)行鑒定。色譜指紋圖譜分析使中藥質(zhì)量控制的可行策略即對(duì)某種(或某產(chǎn)地)中藥材或中成藥經(jīng)適當(dāng)處理后采用一定的分析手段,得到能夠標(biāo)識(shí)該中藥材或中成藥特性的色譜或光譜的圖譜。目前,國際上已認(rèn)可用中藥指紋圖譜來作為控制中藥質(zhì)量的質(zhì)控模式。指紋圖譜又是中藥實(shí)現(xiàn)國際化的關(guān)鍵技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)以經(jīng)生藥學(xué)鑒定的郁金和混合藥材做為研究對(duì)象, 樣品經(jīng)過預(yù)處理后用GC分析技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行分析, 并通過不斷試驗(yàn)建立合適的色譜條件。按照已經(jīng)建立的分析方法, 獲取郁金和復(fù)方制劑的指紋圖譜中特征峰及保留時(shí)間和峰面積等數(shù)據(jù)在此條

13、件下進(jìn)行樣品的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，得到專屬性、準(zhǔn)確度與穩(wěn)定性好(RSD<1%)的郁金水提部分的指紋圖譜,并以此圖譜作為復(fù)方制劑中郁金水提部分的特征指紋圖譜.將未知樣品的指紋圖譜與已經(jīng)建立的郁金水提物部分的指紋圖譜進(jìn)行比較, 即可為未知樣品的真?zhèn)渭坝艚鹚幉暮鸵运釣橹苿┕に嚨挠艚饛?fù)方制劑的質(zhì)量控制提供一定的技術(shù)支持和科學(xué)依據(jù). 本實(shí)驗(yàn)建立的指紋圖譜可為該復(fù)方制劑中郁金藥材的真?zhèn)舞b別和質(zhì)量控制提供一定的依據(jù)。通過相似性和相關(guān)性對(duì)比,發(fā)現(xiàn)質(zhì)量變異和缺陷,從而在全過程中及時(shí)把握和控制中藥的質(zhì)量命脈。正 文中藥作為我國的傳統(tǒng)醫(yī)藥,是中華民族的瑰寶,是中國人幾千年來通過以身試藥，保留和傳承下來的寶貴的歷史文

14、化遺產(chǎn)。也是歷史上唯一以人作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象的醫(yī)藥體系.我們的傳統(tǒng)的醫(yī)藥中醫(yī)藥在數(shù)千年的應(yīng)用中，通過不斷的摸索與實(shí)踐形成了自己獨(dú)特的診斷方式和用藥原則！勤勞的中華民族就是通過它治療疾病和強(qiáng)身健體的！中醫(yī)藥的 “理、法、方、藥”的理論滲透著深厚的古代哲學(xué)思想和觀點(diǎn)。以中藥而論,其性味歸經(jīng)、五行生克等理論就是在大量臨床觀察的基礎(chǔ)上,利用古代哲學(xué)思想歸納演繹出來的理論,再返回來指導(dǎo)臨床應(yīng)用。傳統(tǒng)的復(fù)方中藥制劑的組方理論從神農(nóng)本草經(jīng)、素問就規(guī)定了“君、臣、佐、使”的組方法則。而“辨證論治”則是中醫(yī)用藥的精髓。本草學(xué)家、方劑學(xué)家以及臨床學(xué)家對(duì)此有許多精辟的解釋和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。中醫(yī)藥理論的形成實(shí)際上反映了我國古代的

15、科學(xué)與科學(xué)認(rèn)識(shí)方式。人類科學(xué)認(rèn)識(shí)史已經(jīng)經(jīng)歷了三個(gè)重要的發(fā)展階段。古代的科學(xué)與哲學(xué)基本上是一體的學(xué)問,自然哲學(xué)代表了當(dāng)時(shí)科學(xué)發(fā)展的最高成就。與古代科學(xué)認(rèn)識(shí)水平相適應(yīng)的主要是直觀的和綜合的思維方式,這種科學(xué)認(rèn)識(shí)方式是在科學(xué)觀察手段非常粗糙的情況下憑天才猜測試圖探求世界本質(zhì),力求把表面上極為復(fù)雜的自然現(xiàn)象歸結(jié)為幾個(gè)簡單的基本概念和關(guān)系。如中醫(yī)把自然、人體和藥物都用樸素的辯證觀點(diǎn)歸結(jié)成“陰和陽”以及“五行生克”。就藥材而論,中醫(yī)將每一味藥材視為一個(gè)單一的不可分割的“個(gè)體”,將其藥理作用按照“性”“味”歸結(jié)為“寒熱溫涼”;“升降浮沉”以及“酸甘苦辛咸”。復(fù)方方劑是幾個(gè)“個(gè)體”組合的“群體”,歸結(jié)為“君、

16、臣、佐、使”的關(guān)系,使之各司其職,發(fā)揮不可分割的“整體作用”。經(jīng)過歷代的發(fā)展和演繹,形成了一個(gè)有著濃厚古典自然哲學(xué)思想與民族文化背景的理論體系。過去對(duì)于藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣是通過感官對(duì)藥材作為一個(gè)整體分辨其形態(tài)氣味,對(duì)制劑制備的質(zhì)量控制,由于當(dāng)時(shí)沒有科學(xué)的檢測手段,則認(rèn)為“丸散膏丹,神仙難辨”,只能以“修合雖無人見,存心自有天知”的道德修養(yǎng)來約束。10近年來，隨著疾病譜和治療模式的轉(zhuǎn)變，天然藥物越來越受到世人的關(guān)注。中藥及其制劑正是將天然植物經(jīng)過加工而成的。因此中藥及其制劑倍受青睞。據(jù)報(bào)道中醫(yī)藥在世界替代醫(yī)學(xué)與療法中,占據(jù)前沿位置。但是由于中藥成分極其復(fù)雜、有效成分及其相互的藥理作用不明確，導(dǎo)致我們

17、的中藥在國際天然藥物市場中僅占3 %5 %的份額。要想中藥可以真正的走出國門，為全世界所接受，我們就必須能夠提供類似于西藥質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)，與化學(xué)藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的不同之處在于，中藥還不是可以據(jù)以直接評(píng)價(jià)療效的標(biāo)準(zhǔn),目前的這種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可以反映上市的商品的真實(shí)性和優(yōu)良程度,以判斷產(chǎn)品是否合格、穩(wěn)定和一致。這種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)作為控制指標(biāo)在監(jiān)督檢查市場中成藥商品的真?zhèn)蝺?yōu)劣、保證藥品的質(zhì)量方面起到了肯定的積極作用。中藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有兩個(gè)分支,一個(gè)是接近于化學(xué)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的有效成分的定性定量分析,它可能比較適用于處方簡單,現(xiàn)代科學(xué)基礎(chǔ)研究比較深入,有效成分與臨床治療的指標(biāo)比較吻合的品種。一個(gè)是中藥制劑“藥效成分”的

18、色譜圖像分析或指紋圖譜分析,提高綜合分析的能力,可能更適應(yīng)中醫(yī)傳統(tǒng)理論的需要,或者是二者的結(jié)合。目前國家藥典采用定性或定量測定中藥材中活性成分或有效成分來評(píng)價(jià)其質(zhì)量，但研究證明，中藥的療效是來自其多種“活性成分”之間的協(xié)同作用，甚至是與“非活性成分”之間的協(xié)同作用或“生克作用”。在中醫(yī)理論指導(dǎo)下的中藥，任何一種活性成分均不能全面反映中醫(yī)用藥所體現(xiàn)的整體療效。中藥成份本身的復(fù)雜性和其制備工藝的不完善，是造成中藥產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定的一個(gè)重要因素，如何對(duì)中藥（制劑）質(zhì)量進(jìn)行控制和評(píng)價(jià)是企業(yè)、科研及管理部門關(guān)注的問題。國家食品藥品監(jiān)督管理局從2000 年開始推出采用指紋圖譜技術(shù)進(jìn)行中藥質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)的試行

19、方案以來，形成了中藥指紋圖譜技術(shù)研究的熱點(diǎn)。7郁金為姜科植物溫郁金（Curcuma wenyujin Y.H.chen et C.Ling)、姜黃屬植物姜黃（黃絲郁金，Curcuma longa L）、廣西莪術(shù)(桂郁金，)、蓬莪術(shù)/ 綠絲郁金，Curcuma phaeocaulis Val.）的干燥塊根。冬季或早春當(dāng)?shù)厣喜糠挚菸蟛赏?，取下端的塊根（郁金），洗凈，開水煮熟后曬干或烘干3。郁金主產(chǎn)于廣西、廣東、四川等，溫郁金含揮發(fā)油0.3% ，主要含有莪術(shù)醇、莪雙酮、異味吉馬烯、吉馬烯、樟腦、龍腦、異龍、莰烯、-蒎烯、- 蒎烯及川芎素等。姜黃含揮油2.01%，成分有姜黃酮、姜油烯、水芹烯、1,8

20、-桉葉素、香檜烯等。廣西莪術(shù)含揮發(fā)油0.3% ，揮發(fā)油成分不含姜黃素，主要為莪術(shù)酮類及類同溫金和姜黃中的烯類酮類成分。蓬莪術(shù)含揮發(fā)油0.35%,成分有蓬莪術(shù)環(huán)氧酮、蓬莪術(shù)酮、蓬莪術(shù)二烯、蓬莪術(shù)環(huán)二烯酮、姜黃醇酮等3。氣相色譜法具有靈敏度高、選擇性好、分離效率高、分析速度快、應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn),11 本文采用氣相色譜法測定郁金和含郁金的復(fù)方制劑的各特征指紋圖譜,并且以每天三次、連續(xù)三天的進(jìn)樣模式，分別得到郁金和復(fù)方制劑的指紋圖譜各9張。比較這些指紋圖譜，并計(jì)算各色譜峰與共有模式的相似度以及各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)。該方法具有快速、簡便、準(zhǔn)確等特點(diǎn);郁金指紋圖譜和復(fù)方制劑指紋圖

21、譜各自都有相似性,重現(xiàn)性好，RSD%均1%。該方法可用于鑒別和控制復(fù)方制劑中郁金的質(zhì)量，具有簡便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)等特點(diǎn)?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下:實(shí)驗(yàn)部分：1.儀器與試藥1.1儀器氣相色譜儀:北分GC 3420；彈性石英毛細(xì)管柱:中科安泰 S-PEG-20M（m）；檢測器：FID；超聲儀:昆山市超聲儀器有限公司 KQ 3200 DB 型數(shù)控超聲波清洗器；載氣:N2高純氮(99.99%),空氣流速:300ml/min,氫氣流速:30ml/min；分流進(jìn)樣,分流比為40:1；工作站:N2000 蘭州化物所研制。1.2試藥色譜純甲醇:山東禹王實(shí)業(yè)有限公司禹城化工廠生產(chǎn)的色譜純甲醇；分析純甲醇:山東禹王實(shí)業(yè)有

22、限公司禹城化工廠生產(chǎn)的分析純甲醇；水：重蒸餾純凈水；本實(shí)驗(yàn)所用郁金購于甘肅省蘭州市黃河藥市,由蘭州大學(xué)生藥教研室周印鎖教授進(jìn)行生藥學(xué)鑒定為姜科植物溫郁金（Curcuma wenyujin Y.H.chen et C.Ling)、姜黃屬植物姜黃（黃絲郁金，Curcuma longa L）、廣西莪術(shù)(桂郁金，)、蓬莪術(shù)/ 綠絲郁金，Curcuma phaeocaulis Val.）的干燥塊根。郁金復(fù)方制劑由10味中藥材研制而成，其中郁金為君藥,由蘭州大學(xué)藥物分析研究所提供。2. 方法與結(jié)果2.1供試品溶液的制備復(fù)方制劑樣品(含有10味中藥材，其中郁金為君藥)： 按處方10倍量稱取藥材,混合,水煎煮

23、3次,第一次1h,第二次40min,第三次40min,合并三次所得的煎煮液，離心，棄去沉淀，提取液濃縮至干（水浴蒸發(fā)后，42冷凍干燥）得復(fù)方制劑浸膏。精密稱取復(fù)方制劑粉末2.0764克至10ml的容量瓶中，加入8ml甲醇，超聲提取30min，放置至室溫,至刻度，用0.45m的微孔濾膜過濾,到供試品復(fù)方制劑樣品。郁金樣品:稱取郁金藥材100克，以10倍量的水煎煮3次，第一次1h,第二次40min,第三次40min, 合并三次所得的煎煮液，離心，棄去沉淀，提取液濃縮至干（水浴蒸發(fā)后，42冷凍干燥）得郁金浸膏。精密稱取郁金浸膏0.4196g置于10ml容量瓶中,加甲醇超聲溶解（30 min），放置至

24、室溫，用甲醇定容至刻度，用0.45m的微孔濾膜過濾，得到郁金樣品溶液.2.2色譜分離條件選擇極性部分S-PEG-20M（1）色譜條件1：彈性石英毛細(xì)管柱:中科安泰 S-PEG-20Mm）；氣化室溫度：250；檢測器溫度：260；壓力0.06kpa；進(jìn)樣量2l；柱溫：初始80，5/min升至250，保持5min。此條件下得到郁金樣品的譜圖見圖1-1。圖1-1可以從圖中看到，譜圖在24 min后基線出現(xiàn)了漂移，但一般第一次進(jìn)樣時(shí)由于儀器的不穩(wěn)定和柱中可能殘存其他溶劑，會(huì)導(dǎo)致譜圖的不準(zhǔn)確。為了排除這些影響，我們?cè)诖松V條件下進(jìn)了第二針郁金溶液，得到郁金樣品的譜圖見圖1-2。圖1-2通過這張譜圖我們發(fā)

25、現(xiàn)基線還是存在漂移，但是24min以后出現(xiàn)的色譜峰明顯多于圖1-1，可能是該色譜條件不合適，所以要更改色譜條件。比較以上兩張圖可以發(fā)現(xiàn)在30min以后幾乎沒有多少峰，我們可以將升溫的速度減慢，使中間部分的峰能盡量多出一點(diǎn)，所以將色譜條件更改為色譜條件2。（2）色譜條件2：彈性石英毛細(xì)管柱:中科安泰 S-PEG-20Mm）；氣化室溫度：250；檢測器溫度：260；壓力0.06kpa；進(jìn)樣量3l；柱溫：初始120，3/min升至230，不保持。此條件下得到郁金樣品的譜圖見圖1-3。圖1-3可以看到基線的后部仍然存在漂移,而且出的峰的數(shù)量和形狀都沒有圖1-2多，因此考慮采用二階程序升溫。首先以較慢的

26、升溫速度升至200，并且多保持一會(huì)（因?yàn)閳D1-2在24 min附近出現(xiàn)了大量的峰，延長保持時(shí)間有助于使這些峰都達(dá)到分離），接著以較快的升溫速度升到250（因?yàn)樵谧V圖的末端出現(xiàn)的峰很少，加快升溫速度可以使采集時(shí)間縮短，提高效率）,所以將色譜條件改為色譜條件3。（3）色譜條件3：彈性石英毛細(xì)管柱:中科安泰 S-PEG-20Mm）；氣化室溫度：250；檢測器溫度：260；壓力0.06kpa；進(jìn)樣量3l；柱溫：程序升溫，初始80，5/min升至200，保持10min，10/min升至250，不保持。此條件下得到郁金樣品的譜圖見圖1-4。圖1-4在此條件下，出現(xiàn)的色譜峰不但多，而且響應(yīng)值也不小，同時(shí)各色

27、譜峰基本上實(shí)現(xiàn)了基線分離.對(duì)復(fù)方制劑也在這一條件下進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)復(fù)方制劑色譜圖的分離效果同樣很好,因此可以將此色譜條件（氣化室溫度：250；檢測器溫度：260；壓力0.06kpa；進(jìn)樣量3l；柱溫（程序升溫，初始80，5/min升至200，保持10min，10/min升至250，不保持）作為郁金指紋圖譜研究的條件。非極性部分SE-54（1）氣相m）；氣化室溫度：250；檢測器溫度：300；壓力0.06kpa；進(jìn)樣量3l；柱溫：初始50保持5min，5/min升至250，保持5min。此條件下得到郁金樣品的譜圖見圖2-1。圖2-1此色譜條件下各色譜峰的響應(yīng)值很小，幾乎看不到尖銳的色譜峰。但一般第

28、一次進(jìn)樣時(shí)由于儀器的不穩(wěn)定和柱中可能殘存其他溶劑，會(huì)導(dǎo)致譜圖的不準(zhǔn)確。為了排除這些影響，我們?cè)诖藯l件下進(jìn)了第二針郁金樣品，得到的譜圖見圖2-2。 圖2-2郁金仍然沒有出現(xiàn)明顯的吸收峰，而且譜圖的末端沒有峰，那250時(shí)的保留就沒有意義。所以根據(jù)此情況將起始溫度調(diào)高至100，將色譜條件改為2。（2）氣相色譜條件2：m）；氣化室溫度：250；檢測器溫度：300；壓力0.06kpa；進(jìn)樣量1l；柱溫：初始50保持5min，5/min升至250，保持5min。此條件下得到郁金樣品的譜圖見圖2-3。圖2-3可以從圖中看到基線的后部出現(xiàn)了5個(gè)小峰，但是在420min這段時(shí)間里幾乎沒有任何峰出現(xiàn)，具體條件更改

29、為氣相色譜條件3。以便確定峰主要出現(xiàn)在哪段時(shí)間中，再根據(jù)出峰情況改變色譜條件為3。（3）氣相色譜條件3：彈性石英毛細(xì)管柱:中科安泰 m）；氣化室溫度：250；檢測器溫度：300；壓力0.06kpa；進(jìn)樣量1l；柱溫：初始50，保持5min ，5/min升至100，10/min升至250，不保持。 此條件下得到郁金樣品的譜圖見圖2-4。圖2-4此條件下雖然在圖譜的中部出現(xiàn)了幾個(gè)小峰，但是后面的曲線仍然存在漂移，譜圖不是很理想。并且圖的中部沒有峰，將條件更改為氣相色譜條件4。（4）氣相色譜條件4：m）；氣化室溫度：250；檢測器溫度：300；壓力0.06kpa；進(jìn)樣量1l；柱溫：初始80，保持5m

30、in ，5/min升至180，10/min升至300，不保持。此條件下得到郁金樣品的譜圖見圖2-5.圖2-5色譜圖仍然很不理想. 由于時(shí)間關(guān)系,并沒有摸索出合適的SE-54的色譜條件.由于即便是在同一條件下,郁金的色譜圖仍然不能夠重復(fù),如圖2-1和圖2-2,考慮到SE-54為非極性柱,而本實(shí)驗(yàn)的樣品采用極性很強(qiáng)的水進(jìn)行提取,根據(jù)相似相溶的原理,水提物部分可能含有的非極性成分不多.同時(shí),GC主要研究的是揮發(fā)油類成分,而本實(shí)驗(yàn)中樣品的處理采用煎煮的方法,并沒有采取任何回餾裝置,揮發(fā)油類成分極易揮發(fā)而使其不穩(wěn)定,所以并沒有出現(xiàn)穩(wěn)定的色譜峰。如果以后有機(jī)會(huì),我希望可以繼續(xù)這一有意義的實(shí)驗(yàn)。2.3指紋圖

31、譜的測定和研究分別吸取郁金樣品和復(fù)方制劑的樣品3l,注入氣相色譜儀，記錄39min 的色譜圖。將做的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)的9張郁金圖譜進(jìn)行比較,在色譜圖上選擇一個(gè)特定色譜峰,該峰為所有樣品所共有,且位于色譜圖中心位置和具有較高的強(qiáng)度,將其指定為參考峰。本實(shí)驗(yàn)將郁金譜圖中16min附近的3號(hào)峰作為參照峰。在此基礎(chǔ)上求出所有色譜峰的相對(duì)保留值。相對(duì)保留值計(jì)算公式為:= tri/trs 。其中tri 為待測峰的絕對(duì)保留時(shí)間, trs 為參考峰的絕對(duì)保留時(shí)間。相對(duì)面積計(jì)算公式為: Sr = (待測峰i 的相對(duì)面積/準(zhǔn)樣品的總面積) ×100%?；旌先軇┑淖V圖中標(biāo)明的7個(gè)色譜峰的保留時(shí)間與郁金的基本上吻

32、合。郁金樣品的9張色譜圖見圖3-1至圖3-9,復(fù)方制劑樣品的9張色譜圖見圖4-1至圖4-9.測得的保留時(shí)間和相對(duì)保留時(shí)間的RSD值見表1、表2。研究結(jié)果表明:在有效成分不完全明確的前提下,利用色譜指紋圖譜來鑒別中成藥中郁金的真?zhèn)蝺?yōu)劣是切實(shí)可行的,并為不同品種郁金之間的鑒別提供了科學(xué)依據(jù). 圖3-1 圖 4-1 圖3-2 圖 4-2 圖3-3 圖4-3 圖3-4 圖4-4 圖3-5 圖4-5 圖3-6 圖4-6 圖3-7 圖4-7 圖3-8 圖4-8 圖3-9 圖4-9峰號(hào)圖3-1圖3-2圖3-3圖3-4圖3-5圖3-6圖3-7圖3-8圖3-9平均值RSD%10.63320.63200.6334

33、0.61880.62740.63160.64250.62850.63290.63110.995320.82990.82910.83090.82130.82710.82850.82330.82420.82730.82700.350231.00001.00001.00001.00001.00001.00001.00001.00001.00001.00000.000041.31671.31771.31641.33091.32171.31761.32081.32061.32311.32060.342751.80011.80431.80131.82961.81181.80361.81211.81211.

34、80011.80830.523361.96751.97161.96911.99781.97971.97111.97731.97881.96561.97540.495572.17272.17802.17212.20262.18692.17812.18462.18512.17022.18120.4622表1：郁金的保留時(shí)間(min)和相對(duì)保留時(shí)間的RSD%峰號(hào)圖3-1圖3-2圖3-3圖3-4圖3-5圖3-6圖3-7圖3-8圖3-9平均值RSD%10.63370.63280.63400.63460.63490.63580.63640.63380.63430.63450.174220.82570.82

35、280.82520.82480.82500.82390.82280.82430.82440.82430.126031.00001.00001.00001.00001.00001.00001.00001.00001.00001.00000.000041.31671.31961.31711.31651.31481.31531.31461.31771.31631.31650.118451.80351.81171.80271.80431.80021.80221.80311.80581.80281.80400.180161.96951.97661.96981.96981.96601.96581.9668

36、1.97051.96721.96910.169172.17822.18722.17702.17852.17372.17442.17582.17772.17572.17760.1826表2：復(fù)方制劑的保留時(shí)間(min)和相對(duì)保留時(shí)間的RSD%計(jì)算公式：相似度2.4指紋圖譜精密度、穩(wěn)定性的考察（PEG-20M色譜柱）本實(shí)驗(yàn)對(duì)同一供試品溶液的指紋圖譜峰面積與其共有模式峰面積相比較，并進(jìn)行相似度計(jì)算，其中8組郁金樣品指紋圖譜的相似度分別為0.6903、0.8960、0.8012、0.8407、0.8997、0.6845、0.8400、0.7864；9組復(fù)方制劑溶液的指紋圖譜相似度分別為0.9713、0

37、.9979、0.9894、0.9950、0.9981、0.9983、0.9921、0.9970、0.8933。8組郁金樣品相似度數(shù)據(jù)中有5個(gè)在0.8000以上;9組復(fù)方制劑樣品的相似度數(shù)據(jù)中有8組在0.9700以上，而只有一組為0.8933，說明郁金樣品及其復(fù)方制劑的穩(wěn)定性好,其中穩(wěn)定性較低的一組可能是由于儀器、進(jìn)樣量、操作人員等誤差引起的。按照指紋圖譜相關(guān)技術(shù)要求，對(duì)郁金和混合物溶液的檢測方法進(jìn)行精密度和穩(wěn)定性考察，并計(jì)算相關(guān)系數(shù)。精密吸取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣3次，持續(xù)3天。以郁金樣品的指紋圖譜中的3號(hào)峰為參照峰，各峰與共有模式的相對(duì)保留時(shí)間的RSD%分別為郁金樣品：0.9953%、0.

38、3502%、0.0000%、0.3427%、0.5233%、0.4955%、0.4622%；復(fù)方制劑樣品：0.1742%、0.1226%、0.0000%、0.1184%、0.1801%、0.1691%、0.1826%。 2.5討論 郁金和復(fù)方制劑都是多組分的混合物，而氣相色譜分析的目的是對(duì)多組分混合樣進(jìn)行定性和定量的分析，所以本實(shí)驗(yàn)采用了GC作為分析的手段。由于絕對(duì)保留值受操作條件影響較大，重復(fù)性較差,如果采用某組分與另一基準(zhǔn)物的相對(duì)保留值來定性，則可以消除某些操作條件影響。本文采用相對(duì)保留時(shí)間（即以譜圖中峰面積中等、保留時(shí)間中等、在郁金樣品譜圖中部的3號(hào)峰作為參照峰，其他組分的保留時(shí)間與3號(hào)

39、峰保留時(shí)間的比值）來計(jì)算RSD%。因?yàn)榻^對(duì)保留值只受柱溫和固定相的影響，與操作條件無關(guān)。但是絕對(duì)保留值在同一根色譜柱上不同的組分可能具有相同的數(shù)值或者差別很小，這就需要采用雙柱保留值法進(jìn)行定性。因此我們選用了極性相反的PEG-20M和SE-54色譜柱。一般來說，在兩根極性差別較大的柱子上的定性結(jié)果如果一致的話，就基本可以確定該組分，結(jié)果比較可靠。11實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PEG-20M部分各峰與共有模式的相對(duì)保留時(shí)間的RSD均1%，說明, 儀器和方法的的精密度很好。但是由于時(shí)間關(guān)系SE-54部分的實(shí)驗(yàn)未能完成。AE.SE-54毛細(xì)管柱法測定郁金樣品及含郁金的復(fù)方制劑樣品的指紋圖譜尚未得出令人滿意的結(jié)果。但是由圖2-1-圖2-5可見用SE-54毛細(xì)管色譜柱對(duì)郁金藥材水溶性成份指紋圖譜的測定效果不佳，可能是由于本實(shí)驗(yàn)中對(duì)供試品進(jìn)行處理時(shí)，先水煎煮法提取后濃縮成浸膏，在這過程中郁金中揮發(fā)性成分大量揮發(fā)，在制成的供試品溶液中含量很少或幾乎不存在;另外，也可能是在研究中儀器、柱子等的影響所造成，建議重新選擇其它規(guī)格的非極性柱子，或者是盡量不用非極性柱子測定郁金及含復(fù)方制劑水溶性部分的指紋圖譜. 3.結(jié)