硅膠或聚酰胺薄層檢識(shí)SOP

1、硅膠或聚酰胺薄層檢識(shí)SOP一、準(zhǔn)備工作（20分）1.供試品溶液及對(duì)照品溶液制備（1）供試品溶液制備：經(jīng)提取分離后得到待檢識(shí)成分，如果是已知化合物，溶解的溶劑選擇可根據(jù)該化合物的溶解性選擇溶劑溶解樣品。如果是親脂性成分（如揮發(fā)油、游離的生物堿、香豆素苷元、蒽醌苷元、黃酮苷元），除選擇甲醇或乙醇溶解樣品，可選擇甲醇、乙醇、三氯甲烷、乙酸乙酯溶解樣品制成溶液，但不宜選擇沸點(diǎn)較低的乙醚溶解樣品；如果是親水性的成分（苷類(lèi)化合物），常選擇甲醇、乙醇或丙酮溶解樣品，但不宜選擇沸點(diǎn)較高的正丁醇溶解樣品。注意通常不易選擇水溶解樣品。如果是未知化合物，可參考提取分離過(guò)程中選擇的溶劑判斷。（2）對(duì)照品溶液制備：同上

2、。 注意事項(xiàng)：樣品與對(duì)照品要配制成溶液，吸取溶液點(diǎn)樣，不要將混濁液或固體物點(diǎn)到薄層板上。溶液制備是影響薄層效果的重要因素。2.儀器與材料的準(zhǔn)備（1）薄層板：市售薄層板分普通板和高效薄層板，常用硅膠薄層板、硅膠GF254薄層板、聚酰胺薄膜等。在保證色譜質(zhì)量的前提下，如需對(duì)薄層板進(jìn)行特別處理或化學(xué)改性，以適應(yīng)分離要求，可以選擇自制薄層板。市售薄層板使用前處理：如需要，硅膠板臨用前一般應(yīng)在110活化30分鐘。聚酰胺薄膜不需活化。鋁基片薄層板可根據(jù)需要剪裁，但需注意剪裁后的薄層板底部的硅膠層不得有破損。如存放期間被空氣中雜質(zhì)污染，使用前可用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶劑在展開(kāi)缸中上行展開(kāi)預(yù)洗，110活

3、化，置干燥器中保存?zhèn)溆谩Ｗ灾票影澹翰０逡螅簯?yīng)光滑、平整。用溫?zé)嵯匆路鬯滔春?、用自?lái)水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗至不附水珠，置干燥潔靜處晾干，備用。必要時(shí)鋪板前用乙醇擦試后鋪板。 稱取吸附劑（硅膠或硅膠GF254，200300目）置乳缽中，按1:3比例加0.3%0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液（或水），在研缽中按同一方向研磨混勻（目的避免產(chǎn)生大量氣泡），研磨時(shí)間一般不超過(guò)4分鐘（以研杵沾取有粘稠感），倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度0.3mm和0.5mm），取下涂好薄層的薄板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干后，在110活化30分鐘，即置有干燥劑（如變色硅膠）的干燥箱中備用。使用前檢查

4、其均勻度，在反射光及透視光下檢查，表面應(yīng)均勻、平整、光滑、無(wú)麻點(diǎn)、無(wú)氣泡、無(wú)破損及污染。（2）點(diǎn)樣器：定性和定量微升毛細(xì)管；手動(dòng)、半自動(dòng)、全自動(dòng)點(diǎn)樣器材。（3）展開(kāi)容器：稱為展開(kāi)缸（層析缸）。上行展開(kāi)一般可用適合薄層板大小的專(zhuān)用平底或雙槽展開(kāi)缸，展開(kāi)時(shí)須能密閉。水平展開(kāi)時(shí)用專(zhuān)用的水平展開(kāi)缸。（4）顯色裝置：噴霧顯色用玻璃噴霧瓶；專(zhuān)用噴霧器。采用腳踏式或電動(dòng)裝置壓縮氣體使顯色劑呈均勻細(xì)霧狀噴出。浸漬顯色可用專(zhuān)用玻璃器械或用適宜的展開(kāi)缸代用；蒸氣熏蒸顯色可用雙槽展開(kāi)缸或適宜大小的干燥器代替。（5）檢視裝置：裝有可見(jiàn)光、254nm及365nm紫外光光源及相應(yīng)濾光片的暗箱，可附加攝像設(shè)備供拍攝圖像用，

5、暗箱內(nèi)光源應(yīng)有足夠的亮度。（6）其他：配制展開(kāi)劑溶劑、電吹風(fēng)、鉛筆、格尺、移液管、分液漏斗、垃圾缸。二、點(diǎn)樣（20分）1.實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備：將供試品溶液、對(duì)照品溶液、薄層板、點(diǎn)樣器（毛細(xì)管等）、電吹風(fēng)、格尺、鉛筆擺放在潔凈干燥的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，并注意光線、高度及周?chē)h(huán)境等是否適合點(diǎn)樣，實(shí)驗(yàn)者端坐在試驗(yàn)臺(tái)旁。2. 定位：定位用鉛筆，不要用其它筆標(biāo)記位置。預(yù)制板或自制板點(diǎn)樣基線距底邊10mm15mm(1cm1.5cm)，高效板一般基線距底邊8mm10mm(0.8cm1cm)，具體用鉛筆在兩側(cè)先確定，然后連接兩點(diǎn)成直線，保證點(diǎn)樣樣品在一條直線上；點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以相鄰斑點(diǎn)互相不干擾為宜，一般不少于8

6、mm（0.8cm），高效板不少于5 mm（0.5cm）；點(diǎn)樣圓點(diǎn)狀直徑一般不大于3 mm；高效板不大于2 mm；條帶狀寬度一般為5mm10mm(0.5cm1cm)；高效板條帶狀寬度一般為4mm8mm(0.4cm0.8cm)，可用專(zhuān)用半自動(dòng)或自動(dòng)點(diǎn)樣器械噴霧法點(diǎn)樣。3. 點(diǎn)樣注意：接觸點(diǎn)樣時(shí)注意力度，勿損傷薄層表面；根據(jù)點(diǎn)樣量要求，選擇合適的毛細(xì)管（或其他點(diǎn)樣器）一次性將溶液取足量，尤其定量時(shí)最好要一次性取量；根據(jù)點(diǎn)樣量及圓點(diǎn)大小決定點(diǎn)樣次數(shù)，如果需要多次點(diǎn)樣，應(yīng)將前次點(diǎn)樣溶液用吹風(fēng)吹干后再次上樣，以避免斑點(diǎn)擴(kuò)散出現(xiàn)復(fù)斑或拖尾現(xiàn)象，用電吹風(fēng)時(shí)，先預(yù)測(cè)一下風(fēng)力和溫度，必要時(shí)用涼風(fēng)，注意將實(shí)驗(yàn)臺(tái)上實(shí)

7、驗(yàn)材料吹落或溫度過(guò)熱。 4.點(diǎn)樣后整理：點(diǎn)樣后將毛細(xì)管置垃圾缸中，供試品溶液和對(duì)照品溶液等實(shí)驗(yàn)材料歸位放好，再進(jìn)行展開(kāi)。三、展開(kāi)劑配制（20分）1. 實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備：干凈和干燥的展開(kāi)缸，檢查是否密閉，如果密閉性差，在邊緣涂少許凡士林，注意不要污染層析缸；不同規(guī)格干凈及干燥專(zhuān)用移液管；分析純?nèi)軇蝗绻谜归_(kāi)劑需要分層，則需要干凈及干燥的分液漏斗；展開(kāi)缸的干燥不要用烘箱加熱烘干或用熱風(fēng)長(zhǎng)時(shí)間吹干。2. 展開(kāi)劑取量確定：根據(jù)層析缸規(guī)格，按比例配制的總量應(yīng)以將點(diǎn)好的薄層板放入層析缸中，浸入展開(kāi)劑的深度為距原點(diǎn)5mm（0.5cm）為宜，切記不要浸泡或超過(guò)原點(diǎn)。3.展開(kāi)劑配制：按上述確定取量，用移液管吸取溶

8、劑。如果展開(kāi)劑不分層 如氯仿-甲醇（8:2），吸取后直接放入層析缸中（如果是雙槽，放入一側(cè)），迅速密閉，展開(kāi)劑如果需要飽和，則可以在點(diǎn)樣前將展開(kāi)劑配好靜置；如果展開(kāi)劑分層如氯仿-甲醇-水（65:35:10）下層，則應(yīng)在分液漏斗中配制，分層后取上層或下層。4.預(yù)平衡與蒸氣飽和：展開(kāi)前如需要溶劑蒸氣預(yù)平衡，可在展開(kāi)缸中加入適量展開(kāi)劑，密閉，一般保持1530分鐘，溶劑蒸氣預(yù)平衡后，應(yīng)迅速放入載有供試品的薄層板，立即密閉，展開(kāi)。如需展開(kāi)缸達(dá)到溶劑蒸氣飽和的狀態(tài)，則需要展開(kāi)缸的內(nèi)側(cè)放置與展開(kāi)缸內(nèi)側(cè)放置與展開(kāi)缸的內(nèi)徑同樣大小的濾紙，密閉一定時(shí)間，使達(dá)到飽和再如法展開(kāi)。5.展開(kāi)：將點(diǎn)好供試品與對(duì)照品的薄層板

9、放入展開(kāi)缸，密閉，上行展開(kāi)，一般展距815cm，高效薄層板上行展開(kāi)58cm。溶劑前沿達(dá)到規(guī)定的展距，取出薄層板，晾干，待檢測(cè)。四、顯色（20分）1. 日光下檢視：有顏色或顯色成分后檢視：供試品含有可見(jiàn)光下有顏色的成分可直接在日光下檢視，也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色，或加熱顯色，在日光下檢視。2. 紫外光下檢視：有熒光的物質(zhì)或遇某些試劑可激發(fā)熒光的物質(zhì)可在365nm紫外光燈下觀察熒光色譜；對(duì)于可見(jiàn)光下無(wú)色，但在紫外光下有吸收的成分可用帶有熒光劑的硅膠板（如硅膠GF254板），在254nm紫外光燈下觀察熒光板面上的熒光猝滅物質(zhì)形成的色譜。五、結(jié)果檢識(shí)1.記錄：薄層色譜圖像一般可采用攝像設(shè)

10、備拍攝，以光學(xué)照片或電子圖像的形式保存。2.計(jì)算Rf值：Rf =斑點(diǎn)中心與原點(diǎn)距離（cm）/原點(diǎn)與前沿的距離（cm，展距），目的判斷斑點(diǎn)位置，表示各組成成分的位置。3.斑點(diǎn)顏色描述：（1）置可見(jiàn)光下觀察，可見(jiàn)不同顏色斑點(diǎn)；（2）置紫外光燈（365nm）下觀察，可見(jiàn)不同顏色的熒光斑點(diǎn)；（3）置紫外光燈（254nm）下觀察，可見(jiàn)熒光淬滅斑點(diǎn)（以硅膠GF254為吸附劑）4.結(jié)果專(zhuān)業(yè)術(shù)語(yǔ)描述：供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色（或熒光）斑點(diǎn)。六、器材整理（20分）1. 展開(kāi)劑傾入廢液缸內(nèi)，不要倒入下水道或其它地方，通風(fēng)櫥中晾干（必要時(shí)刷洗干凈）。 2. 薄層板記錄結(jié)果后，將硅膠板用水浸濕，刷洗干凈，晾干，備用。3. 將其他實(shí)驗(yàn)器材歸位，將垃圾缸中垃圾倒掉。實(shí)例1：層析板：自制硅膠-CMC硬板樣 品：精品總堿氯仿液對(duì)照品；氧化苦參堿的氯仿溶液展開(kāi)劑：氯仿：甲醇：氨水