二動(dòng)物蠕蟲學(xué)糞便檢查技術(shù)(二)

1、實(shí)驗(yàn)二 動(dòng)物蠕蟲學(xué)糞便檢查技術(shù)（二一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康丶耙?、掌握動(dòng)物蠕蟲學(xué)常見地實(shí)驗(yàn)室糞便幼蟲培養(yǎng)及檢查技術(shù)2、認(rèn)識(shí)線蟲幼蟲和吸蟲毛蚴等寄生蟲幼蟲地一般形態(tài)特征二、實(shí)驗(yàn)器材載玻片，蓋玻片，平皿，培氏皿，鑷子，燒杯,塑料杯，塑料袋，漏斗，漏斗架，膠帽吸管離心管試管，玻璃棒， 紗布,脫脂棉，糞篩,錦綸篩260目/英寸），搪瓷缸，三角量筒，三角燒杯，膠塞,表玻璃，酒精燈，平底孵化 瓶，貝爾曼氏裝置 乳膠管二端分別連接漏斗和小試管），顯微鏡測微器 目鏡測微尺、物鏡測微尺），血球計(jì)數(shù)板，普通溫箱，光學(xué)顯微鏡等碘液，家畜新鮮糞便等三、實(shí)驗(yàn)方法、步驟和操作要領(lǐng) 幼蟲培養(yǎng)法、毛蚴孵化法、幼蟲分離法、寄生蟲學(xué)測微法

2、）一）幼蟲培養(yǎng)法 Technique for the Culture of Third-stage Larvae）圓線目中有很多線蟲地蟲卵在形態(tài)結(jié)構(gòu)上非常相似，、難以進(jìn)行鑒別有時(shí)為了進(jìn)行科學(xué)研究或達(dá)到確切診斷目地，可進(jìn)行第三期幼蟲地培養(yǎng),之后再根據(jù)這些幼蟲地形態(tài)特征進(jìn)行種類地判定另外,做人工寄生性線蟲感染實(shí)驗(yàn)時(shí)，也要用到幼蟲培養(yǎng)技術(shù)（圖2-1幼蟲培養(yǎng)地方法很多，這里僅介紹最簡單地一種即：取新鮮糞便若干，弄碎置培養(yǎng)皿中央堆成半球狀,頂部略高出，然后在培氏皿內(nèi)邊緣加水少許如糞便稀可不必加水），加蓋蓋好使糞與培氏皿接觸放入2530C地溫箱內(nèi)培養(yǎng) 夏天放置室內(nèi)亦可）每日觀察糞便是否干燥，要保持適宜地濕

3、度約經(jīng)7 15 天,第三期幼蟲即可出現(xiàn) Egg-Li-L2-L3）,它們從糞便中出來，爬到培氏皿地蓋上或四周這時(shí)，我們可 用膠帽吸管吸上生理鹽水把幼蟲沖洗下來，滴在載玻片上覆以蓋片，在顯微鏡下進(jìn)行觀察培養(yǎng)幼蟲時(shí)如無培氏皿，可用一大一小二個(gè)平皿來代蟲第三期幼將小平皿 去掉蓋）加上糞便放于大平皿 中央，大平皿內(nèi)加少許水.然后用大平皿蓋蓋上1.馬圓線蟲 2. 叫m 即先將一個(gè)塑料杯 上大下小）一霍g 上,再把截下地那部分套上 頭向下） 套在該杯上 紗布面朝下），外面套上 便地小杯放在分離裝置地漏斗上用意在放培養(yǎng)物時(shí)務(wù)必小心，不要使糞】二）毛蚴孵化法Miracidum H毛蚴孵化法是專.行孵化，等毛蚴

4、從蟲卵內(nèi)孵出來后 如常規(guī)沉淀孵化法、棉析毛蚴孵化法、 只介紹其中兩種方法（圖2-2即可進(jìn)行培圓線也可用兩個(gè)塑料杯來培養(yǎng)幼蟲，效果更好1裝滿待培養(yǎng)糞便，上用雙層紗布蒙_，把需培養(yǎng)地糞便杯培養(yǎng)好后，用幼蟲分離法分離幼蟲即把裝糞同時(shí)把塑料杯內(nèi)地水也倒入 用水沖洗幾次）注普通圓線蟲 3.,較小地底部用針扎許多小孔4.，使紗布繃緊；然后在另一個(gè)塑料杯內(nèi)加少量水 塑料袋進(jìn)行培養(yǎng)即可三角量筒也可）散開tching Meiod其原理是將含有血吸蟲卵地糞便在適宜地溫度條件下，進(jìn)、向光、向清地特性 ，進(jìn)行觀察，做出診斷方法有多種，,這里門用來診斷血吸蟲病地,借著蚴蟲濕育孵化法、塑料杯頂管孵化法、尼綸篩網(wǎng)集卵孵化法

5、等1 常規(guī)沉孵法 又稱沉淀孵 均勻，通過糞篩濾入另一個(gè)容器 此反復(fù)34次第一次沉淀時(shí)間圖2-2 塑料杯頂管裝置及尼綸篩網(wǎng)示意圖 或沉孵法）取糞便100g, 放成滿，靜置沉淀，之后將上清液申左右，以后20分鐘即可最后將上述反復(fù)淘洗后地沉淀材料加加水約500 ml,攪拌 ,再加清水?dāng)噭?，沉淀?0C地溫水置于三角燒杯中，瓶口用中央插有玻璃管地膠塞塞上毛蚴似針尖大小地白色蟲體時(shí)，可用膠帽吸管吸出在顯微鏡下 規(guī)則螺旋形運(yùn)動(dòng)或短距離搖擺；圖2-3 沉孵法裝置示意圖（引自Yang, 2005,在水面下方4cm以內(nèi)地水中作快速平行.有時(shí)混有纖毛蟲，其色彩也為殳也可用篩絹孔徑為 寸）集卵地 代上述地反淀過程，

6、對地糞渣再進(jìn)2.棉析圖2-4A.東畢吸蟲蟲卵B.3.側(cè)穿入腺管4.血吸蟲蟲卵及毛蚴 日本血吸蟲蟲卵 煙細(xì)胞5.神經(jīng)結(jié)C. 日本血吸蟲毛蚴6.腸細(xì)胞7.纖毛8.錦綸篩排泄孔260目/英辦法來取復(fù)水洗沉洗后所剩行孵化.毛蚴孵化析法）. 取糞便50g,經(jīng)反復(fù)淘洗或錦綸篩淘洗后 圖2-5 棉析法裝置示意圖濁水層毛蚴出現(xiàn)后可集中在棉花上層有限地法 簡稱棉這種方法地優(yōu)點(diǎn)是糞便只需略微淘洗或不 清水水域中，可和下層混濁地糞液隔開，因而便于毛蚴地觀察.三）幼蟲分離法 操作方法：用貝爾曼氏裝置進(jìn)行.即用一根2乳膠管二端分別連接漏斗和小試管 過漏斗加入40C地溫水，水量約達(dá)到漏斗中部.之后漏斗內(nèi)放上置有被檢材料地

7、糞篩 下小試管，吸棄掉上清液，吸取管底沉淀物，進(jìn)行鏡檢I也可以用簡單地平皿法來分離幼蟲；即取糞球璃或平皿、培氏皿內(nèi)，經(jīng)1015分鐘后，取出糞球，吸取皿內(nèi)地液體，在顯微鏡下檢查幼蟲. 四）寄生蟲學(xué)測微法 Micrometry in Parasitology，然后置漏斗架上，通.靜置1小時(shí)后，拿啟璃脾斗0個(gè)，置于放有少量熱水 .使用時(shí)，將目鏡測微尺放于接目鏡內(nèi) ，物鏡測微尺放在載物臺(tái)上 然后用低倍鏡調(diào)節(jié)焦距，使目鏡測 微尺和物鏡測微尺地零點(diǎn)對齊 ，再尋找目鏡測微尺和物鏡測微尺較遠(yuǎn)端地另一重合線，算出目鏡測微尺地幾格相當(dāng)于物鏡測微尺地幾格 ，從而計(jì)算出目鏡測微尺上每格地長度 ，以后測量時(shí)，只用目鏡測

8、微尺量 度就可以了 為了便于計(jì)算，可將目鏡測微尺在固定顯微鏡和固定倍數(shù)物鏡下地09格地長度事先計(jì)算好，列于卡片上，具體測量時(shí)，一查便知在沒有物鏡測微尺時(shí)，可以用血球計(jì)數(shù)板代替使用以該板內(nèi)1個(gè)小方格地長度為標(biāo)準(zhǔn)，即可按上述 方法測出目鏡測微尺每 1格地微M數(shù)用目鏡測微尺測量蟲卵大小時(shí)，一般是測量蟲卵地最長和最寬處，圓形蟲卵則是測量直徑；測量幼蟲 和某些成蟲時(shí)，是測量蟲體地長度、寬度及各部構(gòu)造地尺寸大?。幌x體彎曲時(shí)，可通過旋轉(zhuǎn)目鏡測微尺地辦法，來進(jìn)行分段測量，最后將數(shù)據(jù)加起來即可（圖2-8四、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1 .幼蟲培養(yǎng)法 檢查法或蠕蟲幼蟲檢查法加以處理 地溫箱中進(jìn)行培育-T L _對于吸蟲卵、絳蟲

9、卵、棘頭蟲卵和大多數(shù)線蟲卵 菌地糞便或糞汁 于顯微鏡下， 種蟲卵或幼蟲之前I圖2-8測微尺測量蟲卵示意圖那就必須先將患畜糞便用蠕蟲卵2.毛蚴孵化法 早期孵出；換水時(shí)要一次倒完 來水須放置過夜脫氯后使用，所有與糞便接觸過地用具 需做好登記，附好標(biāo)簽，以免混亂.3 幼蟲分離法凡是檢查組織器官材料，應(yīng)盡量撕碎；但檢查糞便時(shí)，則將完整糞球放入，不必弄碎，以免渣子落入小試管底部，鏡檢時(shí)不易觀察；溫水必須充滿整個(gè)小試管和乳膠管，并使其浸泡住被檢材料 （圖2-9表2-1家畜肺線蟲第一期幼蟲地鑒別特征Yang, 2004）項(xiàng)目網(wǎng)尾線蟲幼蟲原圓線蟲幼蟲后圓線蟲幼蟲大小0.32 0.56mm0.25 0.32mm頭鈕絲狀網(wǎng)尾線蟲: 胎生網(wǎng)尾線蟲:有 無無蟲卵呈橢圓形，外膜不平滑，尾部