PCR技術(shù)的種類與應(yīng)用資料全

1、 PCR技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用平駿 摘要：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction, PCR）是1985年由美國PE- Cetus 公司的科學(xué)家Kary Banks Mullis發(fā)明的一種可在體外快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列的技術(shù)。經(jīng)歷了近30年的技術(shù)發(fā)展，現(xiàn)如今PCR技術(shù)在生命科學(xué)研究以與相關(guān)的很多領(lǐng)域都得到廣泛的應(yīng)用。本文主要對PCR的基本原理、反應(yīng)組份作簡要的介紹；同時(shí)也對在PCR基礎(chǔ)上發(fā)展起來的相關(guān)技術(shù)作簡要綜述。關(guān)鍵詞：PCR技術(shù)；PCR原理；PCR新技術(shù)對核酸的研究己有100多年的歷史，20世紀(jì)70年代初人們就致力于研究基因的體外分離技術(shù)，Korana于1971

2、年最早提出核酸體外擴(kuò)增的設(shè)想，該設(shè)想在1985年被Mullis等人實(shí)現(xiàn)，他們發(fā)明了具有劃時(shí)代意義的聚合酶鏈反應(yīng)6。這項(xiàng)新技術(shù)是根據(jù)生物體DNA序列能進(jìn)行快速復(fù)制的特點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)在體外對特定DNA序列進(jìn)行快速擴(kuò)增，可在短時(shí)間從試管中獲得數(shù)百萬個(gè)特異DNA序列拷貝。PCR技術(shù)操作簡便、結(jié)果可靠，被世界各國廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)、考古學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域的基因研究和分析，對分子生物學(xué)的發(fā)展產(chǎn)生了深遠(yuǎn)的影響18。發(fā)明人Kary Banks Mulis也因此榮獲了1994年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。 1、PCR 技術(shù)的原理1,2PCR技術(shù)是模擬細(xì)胞DNA的天然復(fù)制過程，DNA 聚合酶以單鏈DNA為模板，借助一小段雙鏈 DNA

3、來啟動(dòng)合成，通過一個(gè)或兩個(gè)人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA 模板中的一段互補(bǔ)序列結(jié)合，形成部分雙鏈。在適宜的溫度和環(huán)境下， DNA 聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3，- OH 末端，并以此為起始點(diǎn)，沿模板5，3，方向延伸，合成一條新的 DNA互補(bǔ)鏈。簡言之，其基本原理包括3個(gè)基本反應(yīng)過程：變性退火延伸。PCR 反應(yīng)的基本成分包括：模板DNA( 待擴(kuò)增DNA )、引物、4種脫氧核苷酸( dNTPs)、DNA 聚合酶和適宜的緩沖液。每一循環(huán)中所合成的新鏈，又都可作為下一循環(huán)中的模板。PCR 合成的特定的DNA序列產(chǎn)量隨著循環(huán)次數(shù)呈指數(shù)增加，每完成一次循環(huán)需2-4min，2-3h就能將目的基因擴(kuò)增，

4、從而達(dá)到迅速大量擴(kuò)增的目的。2、 PCR技術(shù)的反應(yīng)組份2.1 模板DNAPCR反應(yīng)的模板可以是單鏈DNA也可以是雙鏈 DNA，可以是基因組DNA 或 cDNA，mRNA 也能作為PCR的模板，只需用逆轉(zhuǎn)錄酶把 mRNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA即可。模板量的多少與其純度的高低，是PCR成敗與否的關(guān)鍵因素之一6。由于PCR反應(yīng)的特異性由寡聚核苷酸引物決定, 模板DNA不需要高度純化，但應(yīng)避免任何蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制劑、能結(jié)合DNA的蛋白質(zhì)與多糖類物質(zhì)的污染18。PCR所需模板DNA的量極微(通常在納克級圍)，通常適宜的模板DNA濃度為30-50ng，不到1納克的基因組DNA序列就足以用來進(jìn)行

5、PCR分析，甚至用1個(gè)DNA分子就能擴(kuò)增出特定的DNA 序列。A-變性；B-退火；C-延伸 圖1 PCR原理（摘自 鄧小紅等, 2007）2.2 引物引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR引物是一段與待擴(kuò)增DNA序列互補(bǔ)的寡核苷酸片段，長度大多為 10-30個(gè)堿基。一般情況下，一對引物包含5，端與正義鏈互補(bǔ)的寡核苷酸片段和3，端與反義鏈互補(bǔ)的寡核苷酸片段，這兩個(gè)寡核苷酸片段在模板 DNA 上的結(jié)合位置之間的距離決定 PCR 擴(kuò)增片段的長度。PCR 反應(yīng)成功的關(guān)鍵是設(shè)計(jì)最佳的引物。引物設(shè)計(jì)的先決條件是與引物結(jié)合的靶 DNA 序列必須是已知的，設(shè)計(jì)引物時(shí)盡可能的選擇堿基隨機(jī)分布的序列，盡量避免多嘌呤

6、、多聚嘧啶或其他異常序列。避免引物自身形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)等二級結(jié)構(gòu)，尤其是兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，尤其是在引物的3，末端，即使無法避免，其3，端的互補(bǔ)堿基也不能多于2個(gè)，以減少“引物二聚體”的形成。否則會影響靶DNA序列的擴(kuò)增。在合成新鏈時(shí)，DNA聚合酶將單核苷酸添加到引物的3，末端，因此引物3，端的5- 6 個(gè)堿基與靶 DNA 片段的配對必須精確、嚴(yán)格。兩個(gè)引物中G+ C堿基對的百分比( G+ C%)應(yīng)盡量相似，若待擴(kuò)增序列中GC 含量已知時(shí)，引物的 GC 含量則應(yīng)與其類似。一般情況下，設(shè)計(jì)引物時(shí)，G+ C 堿基對含量以40% - 60%為佳，解鏈溫度 ( melting temperatu

7、re,Tm) 應(yīng)高于55。2.3 DNA聚合酶最初的DNA聚合酶是從大腸桿菌中提取得到的DNA聚合酶I的Klenow片段。該片段具有DNA聚合酶活性和3，-5，的外切核酸酶活性，能識別和消除錯(cuò)配的引物末端，以校正復(fù)制過程中錯(cuò)配的核苷酸。但是它有一個(gè)缺點(diǎn)，即Klenow 片段對熱很敏感，DNA的變性溫度就可以使酶失去活性，因此在PCR的變性步驟之后都必須重新添加聚合酶，否則實(shí)驗(yàn)無法繼續(xù)進(jìn)行，這樣增加了PCR操作的繁瑣程度，而且反應(yīng)效率低，成本增加。后來，在美國國家公園的溫泉中發(fā)現(xiàn)了嗜熱菌-水生棲熱菌(Thermus aquatics, Taq)，從中分離提取出了一種DNA聚合酶。由于這些聚合酶具

8、有95以上的耐熱性，只要在PCR反應(yīng)開始時(shí)加一次聚合酶，就能在整個(gè)PCR循環(huán)中保持酶活性，大大簡化了PCR操作程序，提高了PCR擴(kuò)增效率，從而使PCR 技術(shù)得到了進(jìn)一步完善。目前，Taq DNA 聚合酶在PCR反應(yīng)中廣為應(yīng)用。2.4 dNTPsdNTPs ( dATP、dCTP、dGTP和dTTP ) 是PCR反應(yīng)中靶DNA序列擴(kuò)增的原料。dNT P在溫度較高時(shí)容易失活，因此需要在- 20 下冰凍保存，以保證 dNTP的質(zhì)量。在PCR 反應(yīng)中，dNTP濃度以50-200µmol/L為宜，但是也不能低于10- 15µmol/L。dNTP濃度過高易引起非特異性PCR產(chǎn)物，還會抑

9、制Taq 酶的活性；濃度過低則會影響擴(kuò)增產(chǎn)量。尤其重要的是4種dNTP的體積濃度要相等，否則就會引起錯(cuò)配。2.5 M g2+緩沖液PCR反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液通常含有10mmol/L Tri-s HCl (pH8.3)，50mmol/L KCl和1.5mmol/ L MgCl2。PCR反應(yīng)體系中Mg2+的濃度非常的重要，當(dāng)各種dNTP濃度為200µmol/L時(shí)，M g2+濃度為1. 5-2. 0mmol/L時(shí)為宜。當(dāng)M g2 +濃度過高時(shí)，會使反應(yīng)特異性降低，出現(xiàn)非特異擴(kuò)增；當(dāng)濃度過低時(shí)會使Taq DNA聚合酶的活性降低，使反應(yīng)產(chǎn)物減少。同時(shí)，Mg2+的有效濃度受到高濃度的螯合劑、高濃度的

10、帶負(fù)電荷離子基團(tuán)的影響，比如EDT A、磷酸根等。它們可與Mg2+結(jié)合從而降低Mg2+的有效濃度。因此，每當(dāng)首次使用靶序列、引物、dNTP(含磷酸根)的新組合時(shí)，都要將Mg2+濃度調(diào)至最佳。通常的方法是設(shè)置一組反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，每一反應(yīng)的Tri-s HCl (10mmol/ L)和KCl (50mmol/ L)濃度一樣，MgCl2濃度不同 ( 0.05- 5mmol/ L，每次增加0.5mmol/ L ) ，反應(yīng)結(jié)束后，通過瓊脂糖凝膠電泳或聚丙烯酰胺凝膠電泳來比較各反應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物的量，從中選出最佳的Mg2+濃度。3、PCR相關(guān)技術(shù)的發(fā)展3.1 PCR芯片傳統(tǒng)的PCR擴(kuò)增儀的缺點(diǎn)是體積大，因此所需的樣品量

11、大，熱容量也大，降低了反應(yīng)效率。隨著微電子機(jī)械系統(tǒng)（microelectromechanical system, MEMS）技術(shù)的發(fā)展，wilding于1994年首次成功的在硅芯片上完成了PCR擴(kuò)增反應(yīng)。PCR芯片的原理是把硅制薄片的反應(yīng)器代替?zhèn)鹘y(tǒng)的 塑料小管用于PCR反應(yīng)，構(gòu)成了一次性PCR芯片4。. 與傳統(tǒng)PCR儀相比，PCR微芯片具有體積更小，反應(yīng)速度加快、操作更加簡便、價(jià)格低、樣品使用量少、節(jié)省試驗(yàn)成本、集成化、結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)。芯片表面的化學(xué)材料的特性對PCR的成功起到關(guān)鍵的作用。沒有經(jīng)過表面處理過的裸露的以與一些硅相關(guān)的材料對PCR擴(kuò)增反應(yīng)起抑制作用24。目前通常使用的方法是對芯片中

12、的微反應(yīng)池/通道的表面進(jìn)行鈍化處理4，比如對反應(yīng)接觸面進(jìn)行硅烷化與多聚物處理，或者在芯片表面添加一層二氧化硅以消除芯片表面對PCR的影響12。利用微電子機(jī)械系統(tǒng)（MEMS）技術(shù)不僅可以制作PCR芯片，實(shí)現(xiàn)DNA片段的迅速擴(kuò)增，而且可將整個(gè)分子生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)過程包括采樣、稀釋、抽提、進(jìn)樣、擴(kuò)增、分離、檢測等集成在微芯片上，實(shí)現(xiàn)分析系統(tǒng)從樣品處理到檢測的整體微型化、集成化與便攜化，并最終實(shí)現(xiàn)微全分析系統(tǒng)(Micro Total Analysis System，-TAS)或稱為芯片實(shí)驗(yàn)室(Lab On Chip)。PCR芯片實(shí)質(zhì)上就是在固相載體上固定與研究對象相關(guān)的許多已知基因的引物陣列，并且用于PC

13、R檢測，其制作時(shí)最關(guān)鍵的是目的基因的引物設(shè)計(jì)17?；谛酒腜CR技術(shù)主要有兩種模式：一種是試劑在溫度循環(huán)變化的管道區(qū)間中連續(xù)流動(dòng)實(shí)現(xiàn)PCR擴(kuò)增，稱為連續(xù)流動(dòng)PCR微芯片；另一種是試劑不動(dòng)，而芯片腔體的溫度迅速循環(huán)變化實(shí)現(xiàn)PCR擴(kuò)增，稱為PCR微池芯片。前一種方式容易實(shí)現(xiàn)集成化，后一種方式的反應(yīng)速度要比前一種快。根據(jù)不同的需要，可將不同的PCR技術(shù)與芯片結(jié)合，如利用微加工技術(shù)制備的微型PCR芯片5、實(shí)時(shí)定量 PCR芯片9、熒光定量PCR芯片17等。3.2 固相PCR 所謂固相PCR，就是將特定引物寡核苷酸通過不同的方法共價(jià)固定到固相支持物上來擴(kuò)增目標(biāo)DNA。固相支持物有瓊脂糖小珠、乳膠小珠、聚

14、丙烯酰胺小珠、普通玻片、磁珠、硅片等。在固相支持物上固定核酸的方法有兩種，1）將核酸的末端修飾上氨基，比如利用氨基與甲苯磺?；螂禄姆磻?yīng)來固定核酸； 2）將核酸的末端磷酸化修飾，再通過磷酸基團(tuán)與其他功能基團(tuán)結(jié)合將核酸固定在固相支持物表面。容易分離純化PCR產(chǎn)物是固相PCR的主要優(yōu)點(diǎn)。例如用瓊脂糖小珠固定引物與RT-PCR相結(jié)合, 就能很方便地構(gòu)建cDNA文庫12。圖2 橋式固相PCR原理 （摘自 生策等, 2001）3.3 電子PCR 電子PCR( Electronic PCR, e-PCR)是一種新概念，主要是用于基因組作圖12。 現(xiàn)在已經(jīng)成為常用的核苷酸序列電子分析工具，它在DNA 片段

15、的染色體定位、基因組測序、基因組輔助作圖、PCR引物輔助設(shè)計(jì)和基因克隆等方面都發(fā)揮著重要的作用20。電子PCR技術(shù)是利用生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫作為平臺，借助相應(yīng)的分析運(yùn)算軟件，搜索要查詢的DNA序列( query sequence) 是否含有序列標(biāo)記位點(diǎn) ( Sequence Tagged Sit, STS)，并且根據(jù)序列標(biāo)記位點(diǎn)（STS）在已知基因組圖譜的位置將所查詢的DNA 序列在基因組圖譜上進(jìn)行定位21。它的原理與BLAST相似，但是BLAST是將所查詢序列與數(shù)據(jù)庫中序列的全長進(jìn)行比對，而電子PCR是將所查詢序列與數(shù)據(jù)庫中STS序列兩端的PCR引物序列進(jìn)行比對。從一定意義上說，電子PCR 是一

16、種不需要具體實(shí)驗(yàn)操作的，并且借助于某些生物信息數(shù)據(jù)和專用分析軟件在計(jì)算機(jī)上進(jìn)行的PCR技術(shù)，而BLAST是類似于電子雜交技術(shù)。3.4 簡并PCR簡并PCR是于20世紀(jì)90年代初建立起來的用于細(xì)胞遺傳學(xué)中特異擴(kuò)增DNA的技術(shù)，它根據(jù)密碼子存在的簡并性設(shè)計(jì)寡核苷酸引物，并進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，由于該P(yáng)CR反應(yīng)不需要知道要擴(kuò)增DNA片段的核苷酸序列，所以該技術(shù)在很多領(lǐng)域都得到廣泛的應(yīng)用。PCR最初是為了擴(kuò)增已知序列設(shè)計(jì)的，簡并PCR技術(shù)能擴(kuò)增未知的序列。當(dāng)待研究的基因序列不明，僅僅知其一部分蛋白質(zhì)的氨基酸序列，可根據(jù)已知氨基酸序列合成一組簡并引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對基因家族中的未知基因進(jìn)行分離15。要

17、成功的進(jìn)行簡并PCR的關(guān)鍵是設(shè)計(jì)好兩組引物庫和對反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化10。 簡并PCR技術(shù)是尋找和發(fā)現(xiàn)”新”基因和蛋白質(zhì)家族新成員的一種非常有用的工具15。3.5 等位基因特異PCR技術(shù) 等位基因特異PCR( Allele specific PCR, AS-PCR)的基本原理：根據(jù)SNP 位點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性引物，其中一條鏈(特異鏈)的3，末端與SNP位點(diǎn)的堿基互補(bǔ)或一樣，另一條鏈(普通鏈) 按常規(guī)方法進(jìn)行設(shè)計(jì)，因此，AS-PCR技術(shù)是一種基于SNP的PCR標(biāo)記。因?yàn)樘禺愐镌谝环N基因型中有擴(kuò)增產(chǎn)物，而在另一種基因型中沒有擴(kuò)增產(chǎn)物，用凝膠電泳可以很容易地分辨出是否有擴(kuò)增產(chǎn)物，從而確定基因型的SNP。圖3

18、 AS-PCR技術(shù)原理（摘自 吉寶等. 2005）3.6 原位PCR原位PCR ( In situ polymerase Chain reaction) 就是將PCR技術(shù)的高效擴(kuò)增和原位雜交的細(xì)胞定位結(jié)合起來，從而在組織細(xì)胞中原位檢測單拷貝或低拷貝的特定的DNA或RNA序列。雖然PCR的擴(kuò)增產(chǎn)物可以利用凝膠電泳或Southern印記雜交來顯示結(jié)果，PC R對很多細(xì)胞的靶序列進(jìn)行分析時(shí)，需要破碎細(xì)胞或組織，并且分離出核酸，因此不能將擴(kuò)增結(jié)果直接在組織中定位，所以不能確定靶序列所在的細(xì)胞和細(xì)胞的類型，這是PC R技術(shù)的一個(gè)明顯的局限性。1990年，H aase等首次將PCR技術(shù)和原位雜交技術(shù)相結(jié)合

19、的方法檢測了羊絨 毛膜絡(luò)叢細(xì)胞中的綿羊脫髓鞘腦炎病毒4。IS-PCR技術(shù)成功0地將PCR技術(shù)和原位雜交技術(shù)結(jié)合起來，既可以定位靶序列在細(xì)胞或組織中的位置，又可以快速、靈敏、特異性的檢測樣品。原位PCR技術(shù)的待檢樣本一般要先進(jìn)行化學(xué)固定，以保持良好的組織或細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。細(xì)胞質(zhì)膜和核膜均具有一定的通透性，當(dāng)進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，引物，DNA聚合酶，核苷酸等均可進(jìn)入細(xì)胞或細(xì)胞核，以固定在細(xì)胞或細(xì)胞核的DNA或RNA為模板，進(jìn)行原位擴(kuò)增。擴(kuò)增的產(chǎn)物一般分子較大， 也可能互相交織，不易穿過細(xì)胞膜，或者在膜外彌散而被保留在原位。原有的細(xì)胞單拷貝或低拷貝的特定DNA或RNA序列在原位呈指數(shù)級擴(kuò)增，利用原位雜交

20、技術(shù)可以很容易的檢測到擴(kuò)增產(chǎn)物6。3.7 反轉(zhuǎn)錄PCR反轉(zhuǎn)錄PCR( Reversed Transcript PCR, RT - PCR )，也叫做逆轉(zhuǎn)錄PCR，是一種將cDNA 合成與PCR技術(shù)結(jié)合，快速靈敏的分析基因表達(dá)的方法，其原理是提取組織或者細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA為模板，反轉(zhuǎn)錄所有mRNA，合成cDNA，再以cDNA 為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增13。反轉(zhuǎn)錄PCR主要用于對表達(dá)信息進(jìn)行檢測或定量分析，可用于測定目的基因表達(dá)的強(qiáng)度。RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個(gè)數(shù)量級，使對極為微量RNA樣品的分析成為可能6,13。圖4 反轉(zhuǎn)錄PCR原理 (摘自 鄧小紅等, 2007)3

21、.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)時(shí)熒光定量PCR( realtime flurescent quantitive polymerase chain reaction, FQ- PCR) 技術(shù)于1996年由美國 Applied Biosystes公司推出23， FQ- PCR是基于熒光能量傳遞技術(shù)，在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整PCR進(jìn)程，受體熒光染料發(fā)射出的熒光信號強(qiáng)度與 DNA產(chǎn)量成正比，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法23,7,3。它是PCR技術(shù)與核酸探針技術(shù)、熒光共振能量傳遞技術(shù)的有機(jī)結(jié)合，而熒光探針是熒光定量PCR的核心。熒光定量PCR具有特異性強(qiáng)、重

22、復(fù)性好、靈敏度高、速度快、定量準(zhǔn)確、全封閉反應(yīng)等特點(diǎn)，是對PCR技術(shù)的革新，該技術(shù)在分子生物學(xué)研究、分子診斷、動(dòng)植物檢疫和食品安全檢測等方面有廣泛的應(yīng)用，擴(kuò)大了PCR的應(yīng)用圍3,7。 按照熒光產(chǎn)生的原理，可將FQ-PCR分為非特異性DNA結(jié)合染料法和探針法。探針法又可分為水解探針法（Taq Man探針）、分子信標(biāo)、雙雜交探針和復(fù)合探針法。圖5 熒光定量PCR原理 (摘自 鄧小紅等, 2007)3.9 其他類型的PCR技術(shù)名稱原理巢式PCR13用兩套引物進(jìn)行擴(kuò)增的PCR技術(shù)，用外兩對引物先后擴(kuò)增靶基因片段。多重PCR( multiplex PCR)1,12,13在一個(gè)反應(yīng)管中使用多套引物，針對多

23、個(gè) DNA模板或同一模板的不同區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增的過程即為多重PCR。免疫PCR4,13用DNA分子作為標(biāo)記物，在做一般的免疫反應(yīng)的同時(shí)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。使Taq DNA聚合酶只在樣品溫度超過至少70時(shí)才發(fā)揮作用的PCR。菌落PCR技術(shù)16跳過DNA抽提這一步，而直接以菌體熱、凍解后暴露的DNA為模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。數(shù)字PCR技術(shù)8數(shù)字PCR技術(shù)是在擴(kuò)增結(jié)束后對每個(gè)反應(yīng)單元的熒光信號進(jìn)行采集，通過直接計(jì)數(shù)或泊松分布公式計(jì)算得到樣品的原始濃度或含量。單細(xì)胞PCR6單細(xì)胞PCR是以一個(gè)細(xì)胞所含的DNA 或 RNA為模板的PCR。4 討論P(yáng)CR 技術(shù)是生物工程技術(shù)與現(xiàn)代分子生物學(xué)的核心，了解和掌握PCR技

24、術(shù)是進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。了解PCR的反應(yīng)原理與操作方法并不難，但由于研究目的、技術(shù)要求等的不同，各實(shí)驗(yàn)室一定要根據(jù)實(shí)際情況選擇適合自身研究的PCR技術(shù)。隨著科技的不斷發(fā)展更新，許多研究者對PCR技術(shù)進(jìn)行研究和改進(jìn)，使PCR技術(shù)得到了飛速發(fā)展，在PCR基礎(chǔ)上誕生了很多新技術(shù)， 如熒光定量PCR、RT-PCR、原位PCR、單細(xì)胞PCR、多重PCR等。 這些技術(shù)相互融合，為生命科學(xué)領(lǐng)域的研究提供了更加方便的研究方法，同時(shí)為深入開展科學(xué)研究提供了高質(zhì)量的技術(shù)保障，也為公共衛(wèi)生事業(yè)的檢測提供了方便。參考文獻(xiàn)1 明潔, 方倜, 柯濤, 熊志勇, 何光源. 多重 PCR一種高效快速的分子生物學(xué)技術(shù) J

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