TLR4、MyD88mRNA在膽脂瘤型中耳炎中的表達(dá)及意義.doc

1、TLR4、MyD88mRNA在膽脂瘤型中耳炎中的表達(dá)及意義研究背景中耳膽脂瘤是一種位于中耳內(nèi)的囊性結(jié)構(gòu)，而非真性腫瘤， 但它具有類似腫瘤的持續(xù)生長(zhǎng)及破壞能力，常引起一系列嚴(yán)重的顱內(nèi)外并發(fā)癥，危及生命，因此一直受到國(guó)內(nèi)外專家的廣泛關(guān)注。后天性膽脂瘤發(fā)病機(jī)理存在爭(zhēng)議已有一個(gè)世紀(jì)，至少已證實(shí)存在有四個(gè)方面證據(jù), 但現(xiàn)在唯一達(dá)成共識(shí)的是機(jī)體為防御慢性炎癥而產(chǎn)生的一系列異常免疫應(yīng)答，造成膽脂瘤持續(xù)發(fā)展及骨質(zhì)破壞。Toll樣受體（toll-likereceptors ，TLRs）是先天性免疫模式識(shí)別受體 （patternrecognition receptor， PRR）之一，通過(guò)識(shí)別病原微生物及其病原相

2、關(guān)分子模式（ pathogen associatedmolecularpatterns，PAMPs）快速激活天然免疫系統(tǒng)?，F(xiàn) M Szczepanski ，WSzyfter 等研究發(fā)現(xiàn) TLR（TLR-2， TLR-3，TLR-4）在膽脂瘤微環(huán)境中表達(dá)豐富，提示 Toll 樣受體 4 有可能參與了中耳膽脂瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)擬采用 SYBR Green實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（ SYBRRT-PCR）方法 , 觀察炎癥反應(yīng)程度不同的中耳膽脂瘤組織中TLR4的表達(dá)及其下游傳導(dǎo)分子 MyD88的表達(dá)，進(jìn)一步探討TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在中耳膽脂瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用， 深入了解中耳膽脂瘤發(fā)病機(jī)制

3、，并為找尋中耳膽脂瘤有效的保守治療方法提供新的途徑。方法選擇中耳膽脂瘤組織標(biāo)本35 例，均來(lái)自山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院耳鼻咽喉 - 頭頸外科住院患者35 例（男 13 例，女 22 例，年齡 16 62 歲）平均 37.12 歲，耳流膿史 1 個(gè)月 30 年，平均 5.14 年；其中聽(tīng)骨無(wú)破壞者 8 例，破壞一個(gè)聽(tīng)骨者 8 例，破壞兩個(gè)聽(tīng)骨者 13 例，破壞三個(gè)聽(tīng)骨者 6 例。然后我們根據(jù)顯微鏡下所見(jiàn)上皮下基質(zhì)炎癥反應(yīng)的程度， 在手術(shù)中取標(biāo)本時(shí)即分為炎癥組與非炎癥組， 其中炎癥組占 13 份，非炎癥組占 12 份。對(duì)照組標(biāo)本取自中耳乳突根治術(shù)中正常外耳道皮膚組織10 例。上述所有標(biāo)本在收集后立即在

4、顯微鏡下仔細(xì)剔除中耳膽脂瘤鱗屑及其他壞死組織，置于-80 冰箱保存，以備用作 RT-PCR檢測(cè)。所有選取患者術(shù)前均行顳骨高分辨CT檢查，術(shù)后病理活檢均證實(shí)為后天繼發(fā)性膽脂瘤。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time PCR ）直接檢測(cè)炎癥組、非炎癥組、正常對(duì)照組TLR4、MyD88 mRNA的表達(dá)。結(jié)果 1、Real time -PCR方法直接檢測(cè)三組實(shí)驗(yàn)樣本TLR4mRNA，炎癥組 TLR4平均 2-CT值為0.689 （0.200,2.050），非炎癥組 TLR4平均 2-CT值為 0.291（ 0.020,0.990），正常對(duì)照組 TLR4、平均 2-CT值為 0.163（ 0.001

5、,0.990）。2、Real time -PCR 方法直接檢測(cè)三組實(shí)驗(yàn)樣本MyD88mRNA的表達(dá)顯示：炎癥組為 MyD88平均 2-CT值 0.777（0.320 ，1.84 ）；非炎癥組 MyD88平均 2-CT值為 0.320 （0.01,0.990 ），正常對(duì)照組 MyD88平均2-CT值為 0.224 （0.002,0.990 ）。3、炎癥組 TLR4、 MyD88mRNA表達(dá)水平較正常外耳道組分別上升了4 倍和 3 倍，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ p 值均<0.05）; 炎癥組 TLR4、 MyD88mRNA表達(dá)水平較非炎癥組分別上升了2 倍和 1倍，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p 值均 <0.05）。4. 我們將 TLR4與 MyD88做 spearman秩相關(guān)性分析，相關(guān)系數(shù)為r=0.955 ，P 值 <0.05。表明在膽脂瘤型中耳炎發(fā)病過(guò)程中，在基因水平，TLR4與 MyD88是呈正相關(guān)的。結(jié)論 1、中耳膽脂瘤組織中有TLR4mRNA、MyD88mRNA的表達(dá)。 2、中耳膽脂瘤組織中，尤其是炎癥反應(yīng)明顯的膽脂瘤組織，TLR4及其下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的表達(dá)量發(fā)生改變，提示膽脂瘤型中耳炎的發(fā)病確實(shí)與炎癥程度密切相關(guān)。3、炎