紫外分光光度法測(cè)定荔枝核抗乙肝成份的含量

1、紫外分光光度法測(cè)定荔枝核抗乙肝成份的含M【關(guān)鍵詞】荔枝核；，抗乙肝；，黃酮類(lèi)；，紫外分光光度法摘要：目的研究荔枝核抗乙肝成份黃酮類(lèi)化合物的測(cè)定方式。方式紫外分光光度法在510nm處測(cè)定。結(jié)果成立了回歸方程C(Ug/ml)=61+26A,相關(guān)系數(shù)8,平均加標(biāo)回收率為%(RSD)。測(cè)定荔枝核抗乙肝成份黃酮類(lèi)化合物含量為。結(jié)論該方式簡(jiǎn)便,準(zhǔn)確,可用于測(cè)定荔枝核抗乙肝成份黃酮類(lèi)化合物的含量。關(guān)鍵詞：荔枝核；抗乙肝；黃酮類(lèi)；紫外分光光度法DeterminationoftheContentofAntihepatitisBConsituentsinLitchiSeedbySpectrophotometric

2、MethodAbstract：ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofthecontentofantihepatitisBconstituentsflavonoidsinLitchicontentofanti-hapatitisBconsituentsflavnoidsinLitchiSeedwasdeterminedbyspectrophtometricmethodat510nm.ResultsTheregressionequationC(Hg/ml)+AandR=oftherelationshipbetweenconcentratio

3、nandabsorbancewereestablished.Theaveragerecoverywas%andRSDwas%.ThecontentofantihepatitisBconsituentsflavonoidsinLitchiSeedwas%.ConclusionThemethodiseasyandaccurate,andcanbeusedfordeterminationofthecontentofantihepatitisBconsituentsflavnoidsinLitchiSeed.Keywords：LitchiSeed;AntihepatitisB;Flavonoids;S

4、pectrophometicmethod荔枝核是無(wú)患子科植物荔枝的干燥成熟種子，要緊散布在福建、臺(tái)灣、廣西、廣東等省。我國(guó)古代藥典記載荔枝核性溫，歸肝、腎經(jīng)，能祛寒止痛?，F(xiàn)代臨床實(shí)驗(yàn)研究顯示荔枝核能夠降低血糖、調(diào)劑血脂和提高抗氧化能力、抑制乙肝病毒的作用1,2。徐慶等3發(fā)覺(jué)荔枝核中黃酮類(lèi)化合物具有專(zhuān)門(mén)好的抑制乙肝病毒表面抗原HBsAg的功效。目前除少量荔枝核被藥用外，大量荔枝核都被遺棄浪費(fèi)。為了充分利用該資源、變廢為寶、研究如何開(kāi)發(fā)荔枝核抗乙肝成份黃酮類(lèi)化合物很成心義和價(jià)值。天然藥用植物中黃酮類(lèi)化合物測(cè)定方式要緊有紫外可見(jiàn)分光光度法4、高效液相色譜法5、薄層色譜法6等。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)關(guān)于荔枝核中黃

5、酮類(lèi)化合物的測(cè)定方式尚未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)，木文成立了鋁鹽顯色分光光度法測(cè)定荔枝核抗乙肝成份黃酮類(lèi)化合物的方式，并測(cè)定荔枝核抗乙肝成份黃酮類(lèi)化合物的含量。1儀器與材料儀器756MC紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)（上海分析儀器總廠(chǎng)）;WS2-133-74多功能電子恒溫水浴鍋（廣東汕頭醫(yī)療器械二廠(chǎng)），Explorer-11140電子天平（瑞士0HAUS公司）。材料荔枝核購(gòu)自中藥材公司，產(chǎn)地廣西；蘆丁對(duì)照品來(lái)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；氯化鋁、亞硝酸鈉、氫氧化鈉（分析純）；95%乙醇；石油酸；水為蒸儲(chǔ)水。2方式與結(jié)果測(cè)定方式依據(jù)以蘆丁為對(duì)照品測(cè)定荔枝核抗乙肝成份黃酮類(lèi)化合物的含量，加入鋁離子試劑，同時(shí)操縱適宜pH值，使黃

6、酮類(lèi)化合物與鋁鹽形成配合物在可見(jiàn)光區(qū)能取得穩(wěn)固的特點(diǎn)吸收峰。試樣品溶液的配制荔枝核打成粉過(guò)40目的篩。取必然量的荔枝核粉，加入適量50%乙醇浸提。提取液過(guò)濾后加入石油酸萃取以除去酯類(lèi)物質(zhì)和色素，分液去掉石油酸層取得荔枝核黃酮類(lèi)化合物的提取溶液。對(duì)照品溶液的配制精準(zhǔn)稱(chēng)取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品mg,用50%乙醇溶解后定容，配制成蘆丁50%乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（mg/ml）o檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇各取試樣品溶液和蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液少量，按2.5方式顯色后在400650nm區(qū)間掃描，確信二者在510nm處均有一強(qiáng)吸收峰（圖廣2）,應(yīng)選擇510nm為測(cè)定波長(zhǎng)。圖1蘆丁標(biāo)樣顯色掃描曲線(xiàn)（略）標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的成立精準(zhǔn)量取蘆丁對(duì)照溶液，ml于

7、251nl容量瓶，加水至6mlo加入5%NaN02溶液ml,混勻后放置6min；再加入10%A1C13溶液ml,混勻后放置6min；最后加入4%NaOH溶液ml顯色，加水至刻度。靜置15mins后在510nm處測(cè)定吸光度，以1號(hào)瓶為空白。繪制出吸光度-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（圖3）o用最小二乘法求出回歸方程為：C（Ug/ml）=61+26A,相關(guān)系數(shù)r=8,P說(shuō)明蘆丁含量在線(xiàn)性范圍、Ug/ml之間與吸光度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。圖2荔枝核提取液顯色掃描曲線(xiàn)（略）圖3蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（略）準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)取荔枝核黃酮類(lèi)化合物的提取液，加50%乙醇配成不同濃度的3種樣品。取1ml樣品溶液，按2.5顯色測(cè)定A。結(jié)果見(jiàn)表lo實(shí)

8、驗(yàn)顯示5次測(cè)定A值轉(zhuǎn)變很小，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差（RSD）%（n二5）,說(shuō)明該方式準(zhǔn)確性高。表1準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）穩(wěn)固性實(shí)驗(yàn)取1ml的1號(hào)樣品顯色后，每隔10min測(cè)定1次A值。結(jié)果見(jiàn)表2。實(shí)驗(yàn)說(shuō)明在30min內(nèi)A值維持穩(wěn)固，1h后A值下降約10%,因此提取液顯色后應(yīng)在30min內(nèi)測(cè)定吸光度。表2穩(wěn)固性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)取3號(hào)樣品1ml于25ml,再加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，ml,按法顯色測(cè)定總黃酮含量，計(jì)算加標(biāo)回收率。結(jié)果見(jiàn)表3。表3加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）從表3可見(jiàn)，總黃酮含量在線(xiàn)形范圍、Ug/ml）內(nèi)，回收率在飛之間,平均回收率達(dá)到出52%）,說(shuō)明該方式能夠作為荔枝核中抗乙肝成份黃酮類(lèi)化合物含量

9、的測(cè)定方式。荔枝核抗乙肝成份黃酮類(lèi)化合物含量的測(cè)定荔枝核打成粉過(guò)40目的篩。平行取5g荔枝核粉5份，加入50%的乙醇溶液100ml,80回流提取兩次，第1次6h,第2次4h。歸并兩次提取液，提取液加入石油酸萃取除去酯類(lèi)物質(zhì)。取必然體積的萃過(guò)液，稀釋至必然倍數(shù)。吸取稀釋液1ml按上面的方式顯色，測(cè)定吸光度，通過(guò)回歸方程計(jì)算出稀釋液中總黃酮的濃度。荔枝核中總黃酮含量按下式計(jì)算：含量晚戶(hù)總黃酮的濃度X25X提取液的體積數(shù)X稀釋倍數(shù)荔枝核原料的質(zhì)量X100%表4是5次平行實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。從表中能夠看到荔枝核中抗乙肝成份黃酮類(lèi)化合物的平均含量為,RSD=%(n=5)。表4荔枝核黃酮類(lèi)化合物含量(略)3討論采

10、納紫外分光光度法測(cè)定荔枝核抗乙肝成份黃酮類(lèi)化合物的含量具有快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)。提取液顯色前用石油酸萃取掉脂類(lèi)物質(zhì)和色素，減少了干擾，使含量測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性更高，重現(xiàn)性更好。荔枝核抗乙肝成份黃酮類(lèi)化合物的含量測(cè)定顯示黃酮類(lèi)化合物的含量較高，能夠作為新的抗乙肝藥物成份來(lái)源開(kāi)發(fā)利用。參考文獻(xiàn):1潘競(jìng)鏘，郭潔文，韓超，等.荔枝核的藥理實(shí)驗(yàn)研究J.中國(guó)新藥雜志,2000,9(1)：14.2肖柳英，潘競(jìng)鏘，饒衛(wèi)農(nóng)，等.荔枝查對(duì)小鼠免疫性肝炎的實(shí)驗(yàn)研究J.中國(guó)新醫(yī)藥，2004,3(6)：7.3徐慶，宋蕓娟，陳全斌，等.荔枝核黃酮類(lèi)化合物對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞系HBsAg與HBeAg表達(dá)及HV-DNA含量的阻礙J.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004,25(20)：1862.4王仲英，李香蘭.馬齒覽中黃酮類(lèi)化