結(jié)核桿菌對利福平藥物的靈敏性實驗

1、結(jié)核桿菌對利福平藥物的靈敏性實瞼【摘要】目的分析結(jié)核分枝桿菌對利福平的耐藥現(xiàn)況，為結(jié)核病的防治提供依據(jù)。方式采納直接涂片檢查法和培育法，對肺結(jié)核病人的痰液進(jìn)行檢查，陽性標(biāo)本經(jīng)抗酸染色鏡檢確認(rèn)后，采納絕對濃度法的間接法進(jìn)行耐藥性測定。結(jié)果131例疑似肺結(jié)核病人痰標(biāo)本中，直接涂片法檢出陽性標(biāo)本21例，陽性檢出率為(21/131)；培育法共檢出陽性標(biāo)本56例，陽性檢出率為(56/131)。比較兩種檢測方式的陽性檢出率，不同有顯著性(P<)o培育法高于直接涂片法。將培育陽性標(biāo)本進(jìn)行利福平藥物靈敏性實驗，其中有17株發(fā)生耐藥，耐藥率為(17/56)。結(jié)論結(jié)核桿菌對利福平的初始耐藥率仍處在較

2、高水平，必需進(jìn)一步增強(qiáng)對耐藥結(jié)核桿菌的監(jiān)控?！娟P(guān)鍵詞】結(jié)核分枝桿菌福平藥敏實驗StudyontheprimarydrugresistanceagainstrifampicinfortubercolusisZHANGSheng,CHENSidong,WANGBaoguo,ZHOUYong,ZHOUWeiping(InstituteofDiseasePreventandControlofSonggangofTown,Shenzhen518105;GuangdongCollegePharmacy,Guangzhou,Guangdong510006,China)Abstract:ObjectiveTo

3、studythesituationandtrendofrifampicinresistancefortuberculosisandprovidethebasisfortuberculosispreventionandtreatment.MethodsSputumfluidisexaminedwithdirectsmearandcultureonmodifiedLowenstein-Jensenmediumaftertreatmentwith4%NaOH.Thenthepositivesamplesweresubjectedtosusceptibilitytestingagainstrifamp

4、icinusingabsoluteconcentrationmethod.ResultsThepositiveratewithculturingandsmearingmethodwas%(56/131),andthepositiveratewithdirectsmearingmethod%(21/131).Theprevalencerateofprimarydrugresistancewas%(17/56).ConclusionTherateofprimarydrugagainstrifampicinisstillatahigherlevel.Monitoringoftheresistance

5、oftuberculosisshouldbestrengthened.Keywords:mycobacteriumtuberculosis;rifampicin;drugresistancetest結(jié)核病是我國重點(diǎn)操縱的重大疾病之一，也是全世界關(guān)注的公共衛(wèi)生問題和社會問題，世界衛(wèi)生組織已將結(jié)核病作為重點(diǎn)操縱的傳染病之一。全世界80%的結(jié)核患者散布在22個結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家,中國是其中之一，結(jié)核患者人數(shù)僅次于印度居世界第二位lo可是,近10年來，臨床上發(fā)覺抗結(jié)核藥的耐藥性對結(jié)核病化療成效的阻礙日趨嚴(yán)峻，尤其是利福平耐藥的發(fā)生率不斷上升給抗結(jié)核醫(yī)治帶來較大的困難。為了解結(jié)核桿菌對利福平耐藥的狀況，為

6、臨床合理、聯(lián)合用藥提供依據(jù)，特作本研究。結(jié)果報告如下。1材料與方式病例來源2005年11月2006年5月,在廣州市白云區(qū)某醫(yī)院、深圳市寶安區(qū)某醫(yī)院檢查第一次確診為肺結(jié)核的病人，共131例。病例發(fā)病前均未服用過抗結(jié)核藥物。結(jié)核分枝桿菌參考菌株為H37Rv靈敏株,由中國結(jié)核病防治臨床中心國家參比實驗室提供。痰液直接涂片檢查用接種環(huán)取膿性痰液12環(huán)，均勻涂于載玻片上，待自然干燥，微火焰固定，經(jīng)抗酸染色后鏡檢。分枝桿菌培育培育基為酸性羅氏培育基。成份：谷氨酸鈉（純度95%以上）g,KH2P0414g,MgS04-7H20g,枸椽酸鎂g,甘油12mL,蒸播水600mL,馬鈴薯淀粉30g,新鮮雞卵液100

7、0mL,2%孔雀綠水溶液20mLo制備方式各鹽類成份溶解后，加馬鈴薯淀粉，混勻，滾水浴煮沸1h呈糊狀（不時搖動，防凝塊），待冷后，加經(jīng)消毒紗布過濾的新鮮雞卵液，混勻，再加入2%孔雀綠水溶液，混勻，分裝于經(jīng)121c高壓滅菌的中型試管，每管加培育基約7mL,斜置血清凝固器內(nèi)12層，斜面高度占試管2/3,90h或851h間歇2次。冷卻后，37無菌實驗24h。培育基斜面顏色鮮艷，表面滑膩無泡，有必然韌性和酸堿緩沖能力,4保留，1個月內(nèi)利用。接種方式取痰標(biāo)本12mL,加入2倍量4%aOH,于室溫下放置30min（期間振蕩23次）后，取處置消化后痰液mL,無菌操作接種于培育基斜面上，每份標(biāo)本同時接種2支酸

8、性改良羅氏培育基，放置37恒溫箱培育。每周觀看1次,記錄細(xì)菌生長情形，至8周為止。藥做實驗具體操作參照結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)查驗規(guī)程2。藥物利福平由美國Sigma公司生產(chǎn)，北京索萊寶科技提供。為純品，粉劑。培育基改良羅氏培育基。成份：谷氨酸鈉（純度95%以上）g,KH2P04g,MgS04-7H20g,枸椽酸鎂g,甘油12mL,蒸儲水600mL，馬鈴薯淀粉30g,新鮮雞卵液1000粉,2%孔雀綠水溶液20mLo制備方式制備方式同酸性羅氏培育基，只是在培育基制成后分裝于中型試管前，按每100mL培育基加入1mL利福平稀釋藥液，混勻，再行分裝中型試管，加溫凝固成斜面。利福平藥液配制及稀釋利福平藥物為純品

9、，生物效價為1000Ug/mg。參照文獻(xiàn)2,配制2個濃度的含藥培育基，藥物濃度為：50Ug/mL、250Ug/mLo依照痰培育陽性標(biāo)本例數(shù)，每支試管含培育基7mL,計算所需培育基體積。每100mL培育基加入1mL利福平稀釋藥液。菌懸液的制備及接種方式參照全國臨床查驗操作規(guī)程（第3版）進(jìn)行。質(zhì)控每批藥敏實驗應(yīng)以結(jié)核分枝桿菌參考菌株（H37Rv）檢測含藥培育基質(zhì)量。結(jié)果判定對照培育基菌落數(shù)必需在200以上且無融合。假設(shè)菌落數(shù)低于50時，從頭做藥物靈敏性測定。（-）：培育基斜而上無分枝桿菌菌落生長。（1+）：菌落數(shù)約占斜面面積的1/4。(2+)：菌落數(shù)約占斜面面積的1/2。(3+)：菌落數(shù)約占斜面面

10、積的3/4。(4+)：菌落呈菌苔樣生長。菌落數(shù)少于20個時，報告菌落數(shù)。含藥培育基菌落數(shù)少于20個時，看成不生長。低濃度含藥培育基上生長的菌落數(shù)多于20個時，即可判定為耐藥。低濃度生長、高濃度不生長為中度耐藥；高、低濃度均生長為高度耐藥。2結(jié)果痰涂片情形131例肺結(jié)核病人標(biāo)本中，共有21例痰涂片為陽性，陽性率為虬痰培育情形131例標(biāo)本中，經(jīng)培育有菌生長且經(jīng)抗酸染色鏡檢后，共有56例確信為結(jié)核分枝桿菌，陽性檢出率為。兩種檢測方式其陽性檢出率比較，不同有顯著性(P<)o培育法高于直接涂片法。見表lo表1直接涂片法和培育法檢出陽性結(jié)果（略）Theresultsofsputumfluid

11、examinationwithdirectsmearandculture與直接涂片法比較：*P<（x2查驗）藥做實驗結(jié)果質(zhì)控H37Rv生長情形：對照培育基為4+,高、低濃度含藥培育基均不生長，為靈敏。故所配制的培育基質(zhì)量合格，能用于藥物靈敏性測試。56株痰培育陽性標(biāo)本中，共有17株顯現(xiàn)耐藥，總耐藥率為,其中，屬中度耐藥有10株，耐藥率為%,屬高度耐藥有7株，耐藥率為。見表2。表256株痰培育陽性標(biāo)本利福平靈敏性測定結(jié)果（略）Theresultsofsusceptibilitytestingagainstrifampicinin56positivesamples3討論直接涂片檢查法

12、和分枝桿菌培育法是結(jié)核病實驗室診斷中經(jīng)常使用的2種方式，2種方式的陽性檢出率對結(jié)核病實驗室診斷有重要阻礙。本研究中培育法陽性檢出率高于直接涂片檢查法。因此，臨床上可將2種方式結(jié)合利用，以提高結(jié)核菌的陽性檢出率。耐藥性實驗不僅是臨床選擇和評判化療方案的依據(jù)，更是流行病學(xué)的重要指標(biāo)。我國于2000年開展了第4次全國結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查，結(jié)果顯示，利福平耐藥的初始耐藥率為3,本研究中利福平靈敏性實驗初始耐藥率為，比全國流行病學(xué)調(diào)查測出的耐藥率要高；與其他省份耐藥情形相較，湖北省的研究顯示結(jié)核桿菌對利福平的初始耐藥率為4,福建省的為5,本研究中利福平初始耐藥率高于該兩?。慌c廣東省內(nèi)其他城市相較，深圳

13、市利福平初始耐藥率為%6,東莞地域為%7,本次藥敏實驗利福平初始耐藥率也均高于兩市的研究結(jié)果。利福平自1971年發(fā)明以來，一直是結(jié)核化療方案中的一個關(guān)鍵藥物。專門在短程化療中起著重要作用。而對利福平的耐藥意味著一方面由于患者對利福平耐藥，臨床上須加大用藥劑量或改用其他抗結(jié)核藥物，使患者的療程延長，增加患者的危險和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)；另一方面擴(kuò)大耐藥性傳播的機(jī)遇，使得整體人群暴露于耐藥結(jié)核桿菌的危險性增加。研究說明8,利福平產(chǎn)生耐藥性是由于其作用靶分子RXA多聚酶亞單位的編碼基因(rpoB)突變所致。由于結(jié)核分枝桿菌產(chǎn)生自然耐藥變異的頻率很低，造成耐藥的要緊緣故是醫(yī)治進(jìn)程中不合理的聯(lián)合用藥、中斷用藥、不執(zhí)

14、行歸口治理與醫(yī)治等。因此，在爾后的結(jié)核病防治工作中，重點(diǎn)為社會性綜合防治方法，抓好結(jié)核病人的發(fā)覺、記錄、治理和合理醫(yī)治。堅持在直接面視短程化療(DOTS)9下,初期、適量、規(guī)律、全程、聯(lián)合應(yīng)用靈敏藥物或抗結(jié)核藥物復(fù)合劑，輔以避免疫劑醫(yī)治，使得在強(qiáng)化期內(nèi)迅速、大量殺滅結(jié)核菌,使痰菌轉(zhuǎn)陰。關(guān)于耐藥病例防治，須堅持聯(lián)合用藥的原那么，依照既往用藥史和藥物靈敏性實驗制定個體化醫(yī)治方案。結(jié)核病防治有關(guān)部門也應(yīng)增強(qiáng)對耐藥菌株的檢測，把握結(jié)核病耐藥趨勢，以指導(dǎo)臨床合理、有效用藥?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1DONALDAE,HANSLR,THURIDURA,etal.Managementoftuberculosis,agu

15、ideforlowincomecountriesM.TheFifthEdition.Paris:UnionAgainstTuberculosisandLungDisease,2000:3.2中國防瘠協(xié)會.結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)查驗規(guī)程J.中國防痍雜志,1996,18：28-31.3劉宇紅,姜廣路,趙立平,等.第四次全國結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查一結(jié)核分枝桿菌耐藥性分析與評判J.中華結(jié)核和呼吸雜志,2002,25(4):224-227.4李國明，吳興榮，張堤，等.湖北省結(jié)核分枝桿菌耐藥性監(jiān)測研究J.中華結(jié)核和呼吸雜志,2002,25(12):723-726.5鄒盛華，代臘梅,張麗水.1008例初治菌陽肺結(jié)核患者的初始耐藥情形分析J.海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2004,1