α－萘異硫氰酸酯誘導(dǎo)大鼠肝損傷機(jī)理及中藥的保護(hù)作用

1、萘異硫氰酸酯誘導(dǎo)大鼠肝損傷機(jī)理及中藥的保護(hù)作用表1 大鼠血清ALT活性 （U/L，xs）注：n=6，與模型組比較，*P0.05，*P0.01表2 大鼠血清AKP (U/L，xs)注：n=6，與模型組比較，*P0.01表3 大鼠血清TBIL (mg/dl，xs)注：n=6，與模型組比較，*P0.01 2.2 大鼠肝組織勻漿PLA2的變化 大鼠染毒2天后，肝組織勻漿PLA2活性明顯增強(qiáng)，與空白組比較差異有顯著性(P0.01)，天后，模型組與其他各組比較差異有顯著性(P0.01)。天后，已經(jīng)趨于正常水平。見表。表4 大鼠肝組織的PLA2活性 (U，xs)注：n=6，與模型組比較，*P0.01 2.3

2、 大鼠血清生化指標(biāo)與肝組織PLA2關(guān)系 血清ALT、AKP、TBIL與肝組織勻漿PLA2呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為 ALT=0.61，AKP =0.577，TBIL=0.593 結(jié)果見圖13。 圖1圖2圖3 2.4 肝組織病變化 光鏡下，可見空白組肝組織肝小葉結(jié)構(gòu)完整，中央靜脈周圍有放射狀排列的肝細(xì)胞索，竇間隙均勻、清晰，肝細(xì)胞體積較大，呈多邊形，大圓形核居中，胞漿豐富，匯管區(qū)清晰可辨，無明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組肝細(xì)胞發(fā)生廣泛的水樣變性，胞漿疏松化及混濁腫脹，肝細(xì)胞體積增大，使肝細(xì)胞索增粗變寬，而肝竇受壓狹窄，甚至消失，能見到一定量的壞死灶，匯管區(qū)可見大量的中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)，膽管上

3、皮增生明顯。金石散、地塞米松組，肝損傷程度明顯恢復(fù)較快，肝細(xì)胞腫脹逐漸減輕，竇間隙逐漸清晰，胞漿疏松化、水樣化逐漸好轉(zhuǎn)，匯管區(qū)炎細(xì)胞滲出明顯減輕，膽管上皮增生減少。 3 討論 3.1 ANIT誘導(dǎo)大鼠肝損傷模型的適用性 肝毒性損傷模型的建立是完成本實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)以血清ALT、AKP、TBIL和肝組織形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)，確認(rèn)肝損傷是否形成，并以此進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察。利用ANIT 誘導(dǎo)動(dòng)物肝損傷模型在國(guó)內(nèi)已有報(bào)道1。本次實(shí)驗(yàn)采用ANIT 100mg/kg體重，灌胃使大鼠染毒，2天后，大鼠血清ALT、AKP、TBIL明顯升高(P0.01)，光鏡下可見肝細(xì)胞變性壞死，匯管區(qū)大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，膽管上皮損傷伴增

4、生性改變。 由于ANIT誘導(dǎo)肝損傷是急性肝損傷，具有自限性，染毒天后，血清ALT、AKP、TBIL有所下降，病理切片肝細(xì)胞變性壞死，匯管區(qū)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，膽管上皮損傷及增生有所減輕，但仍表現(xiàn)為典型的肝損傷狀態(tài)(P0.01)。天后，以上各項(xiàng)指標(biāo)與空白組比較仍有差異。上述結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ图毙愿螕p傷明顯，損傷期能滿足實(shí)驗(yàn)藥物觀察期限，效果滿意。 3.2 PLA2在ANIT誘導(dǎo)大鼠肝損傷中的作用 ANIT誘導(dǎo)肝損傷機(jī)理仍不完全清楚。發(fā)現(xiàn)ANIT誘導(dǎo)的肝損傷表現(xiàn)為肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞，膽管上皮細(xì)胞壞死，匯管區(qū)大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)2。ANIT誘導(dǎo)的肝損傷是中性粒細(xì)胞依賴性的肝損傷，ANIT在體外能使中性粒細(xì)胞活化，進(jìn)

5、一步發(fā)現(xiàn)由活化中性粒細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子如組織蛋白酶、彈力蛋白酶對(duì)體外培養(yǎng)的肝細(xì)胞具有毒性作用3。 作為肝毒性損傷介質(zhì)的中性粒細(xì)胞在肝損傷中如何發(fā)揮作用？過去曾提出過不同解釋由于中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)而誘發(fā)的肝細(xì)胞損傷，其一是由于中性粒細(xì)胞粘附于內(nèi)皮細(xì)胞而導(dǎo)致血管狹窄、血流減少，但后來的實(shí)驗(yàn)并不支持這種觀點(diǎn)；另一是粘附的中性粒細(xì)胞可產(chǎn)生活性氧與蛋白酶活性增加，但后來的實(shí)驗(yàn)證明，當(dāng)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)致肝損傷時(shí)，脂質(zhì)過氧化程度比由過氧化物所引起的程序低一個(gè)數(shù)量級(jí)，因而認(rèn)為活性氧并非導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷的主要原因，認(rèn)為蛋白酶可能是中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的重要因素。 中性粒細(xì)胞要引起肝毒性損傷需三個(gè)基本過程：(1)某些外

6、源性化學(xué)物質(zhì)誘發(fā)中性粒細(xì)胞在肝臟內(nèi)蓄積。(2)中性粒細(xì)胞穿透內(nèi)皮細(xì)胞并蓄積于肝竇。(3)中性粒細(xì)胞粘附并誘發(fā)肝細(xì)胞損傷。這三個(gè)基本過程缺一不可，假如阻斷其中任何一過程，就能減輕肝細(xì)胞毒性損傷。 PLA2存在于所有研究過的細(xì)胞內(nèi)，在許多疾病中發(fā)揮重要作用。PLA2能調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞的活化及炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生和釋放4。PLA2催化膜磷脂產(chǎn)生的花生四烯酸經(jīng)脂氧合酶和環(huán)氧化酶作用產(chǎn)生大量炎癥介質(zhì)，包括氫過氧化合物、白三烯（LTS）、前列腺素（PGS）和血栓素（TXS）等類物質(zhì)，均有不同程度的致炎及炎癥趨化作用5。另外，PLA2在催化生成花生四烯酸的同時(shí)，又可生成溶血卵磷脂，繼而轉(zhuǎn)化為血小板活化因子（PAF）6

7、。 糖皮質(zhì)激素具有抑制免疫反應(yīng)，穩(wěn)定溶酶體膜，抗內(nèi)毒素血癥作用，可起到保護(hù)肝細(xì)胞，減輕肝細(xì)胞壞死作用。糖皮質(zhì)激素對(duì)大鼠血清磷脂酶A2的張力具有抑制作用7。實(shí)驗(yàn)中對(duì)經(jīng)ANIT 誘導(dǎo)肝損傷的大鼠使用地塞米松后，肝組織PLA2活力下降，同時(shí)肝細(xì)胞壞死程度減輕，匯管區(qū)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)減少，血清生化指標(biāo)下降，呈正相關(guān)，以上情況均說明，PLA2在ANIT誘導(dǎo)的肝損傷中發(fā)揮一定的作用。 3.3 金石散對(duì)ANIT誘導(dǎo)肝損傷的作用機(jī)制 大鼠經(jīng)ANIT誘導(dǎo)產(chǎn)生肝損傷，經(jīng)中藥金石散治療后，血清ALT、AKP、TBIL明顯下降。光鏡下，肝細(xì)胞、膽管上皮細(xì)胞變性壞死程度明顯減輕，匯管區(qū)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)減少，同時(shí)肝組織中PLA2活力也降低。說明中藥金石散對(duì)ANIT誘導(dǎo)的肝損傷具有保護(hù)作用。金石散是我院研制開發(fā)的治療膽結(jié)石藥物8，具有清熱解毒、舒肝利膽、利濕退黃功效，能降低膽汁通中膽紅素和黏液含量。 金石散對(duì)ANIT誘導(dǎo)肝損傷的機(jī)制可能通過降低PLA2張力，進(jìn)而減少中性粒細(xì)胞在匯管區(qū)的聚集及與肝細(xì)胞的粘附，減輕肝細(xì)胞損傷。另外，金石散還可通過促進(jìn)膽汁分泌，減輕膽管擴(kuò)張，從而緩解膽管上皮細(xì)胞損傷。因此金石散的保護(hù)作用較糖皮質(zhì)激素明顯。總之，金石散對(duì)肝損傷的保護(hù)作用部分是通過降低PLA2活力發(fā)揮作用的，與糖皮質(zhì)激素作用相似，同時(shí)還通過其他途徑發(fā)揮作用，具體機(jī)制有待進(jìn)一步探