直腸黏膜修復(fù)敷料生物學(xué)評(píng)價(jià)研究

1、直腸黏膜修復(fù)敷料生物學(xué)評(píng)價(jià)研究直腸黏膜修復(fù)敷料生物學(xué)評(píng)價(jià)研究 本文關(guān)鍵詞：敷料，直腸，黏膜，生物學(xué)，修復(fù) 直腸黏膜修復(fù)敷料生物學(xué)評(píng)價(jià)研究 本文簡(jiǎn)介：內(nèi)容提要：目的：考察直腸黏膜修復(fù)敷料的生物安全性。方法：按照醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)中的遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn)、體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)、刺激性試驗(yàn)分別對(duì)三個(gè)廠家的直腸黏膜修復(fù)敷料進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。結(jié)果：三批直腸黏膜修復(fù)敷料的安全性檢查，結(jié)果均符合規(guī)定。結(jié)論：三批直腸黏膜修復(fù)敷料用于臨床是安全的。關(guān)鍵詞：直腸黏膜修 直腸黏膜修復(fù)敷料生物學(xué)評(píng)價(jià)研究 本文內(nèi)容： 內(nèi)容提要：目的：考察直腸黏膜修復(fù)敷料的生物安全性。方法：按照醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)中的遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn)、

2、體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)、刺激性試驗(yàn)分別對(duì)三個(gè)廠家的直腸黏膜修復(fù)敷料進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。結(jié)果：三批直腸黏膜修復(fù)敷料的安全性檢查，結(jié)果均符合規(guī)定。結(jié)論：三批直腸黏膜修復(fù)敷料用于臨床是安全的。 關(guān)鍵詞：直腸黏膜修復(fù)敷料；醫(yī)療器械；生物安全性評(píng)價(jià) 自2014年6月1日起開始施行的醫(yī)療器械監(jiān)督管理?xiàng)l例中明確提出國(guó)家對(duì)醫(yī)療器械按照風(fēng)險(xiǎn)程度實(shí)行分類管理。第一類是風(fēng)險(xiǎn)程度低，實(shí)行常規(guī)管理可以保證其安全、有效的醫(yī)療器械。第二類是具有中度風(fēng)險(xiǎn)，需要嚴(yán)格控制管理以保證其安全、有效的醫(yī)療器械。第三類是具有較高風(fēng)險(xiǎn)，需要采取特別措施嚴(yán)格控制管理以保證其安全、有效的醫(yī)療器械1。根據(jù)2017年8月頒布的醫(yī)療器械分類目錄，直腸黏膜修復(fù)

3、敷料屬于無源植入器械中的組織工程支架材料，屬類器械2。按照GB/T系列標(biāo)準(zhǔn)3-6對(duì)直腸黏膜修復(fù)敷料進(jìn)行了細(xì)胞毒性、遲發(fā)型過敏及刺激等生物學(xué)評(píng)價(jià)，以期為進(jìn)一步的臨床研究提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。 1.資料與方法 1.1一般資料 供試品：直腸黏膜修復(fù)敷料，A、B、C三個(gè)廠家生產(chǎn)，共三批。材料、藥品、試劑：高密度聚乙烯，批號(hào)：K0M357，美國(guó)藥典委員會(huì)；氯化鈉注射液，批號(hào)：1601303G，西安京西雙鶴藥業(yè)有限公司；優(yōu)級(jí)胎牛血清，貨號(hào)：TBD21HY，天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司；RPMI培養(yǎng)基，批號(hào)：AB10125297，HyClone；青鏈霉素混合液（100×），批號(hào)：201705

4、03，Solarbio；胰蛋白酶，批號(hào)：SLBP8607V，Sigma；苯酚，批號(hào)：20160317，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。細(xì)胞及動(dòng)物：細(xì)胞株，L929細(xì)胞，武漢博士德生物工程有限公司。白化豚鼠、新西蘭兔，由西安市迪樂普生物資源開發(fā)有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（陜）2014-001。飼養(yǎng)環(huán)境：溫度2226C，相對(duì)濕度40%70%，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（陜）2013-00。儀器：電子天平，BS2202S，賽多利斯儀器有限公司；生化培養(yǎng)箱，BSP-250，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；低速臺(tái)式離心機(jī)，KA-1000，上海安亭科學(xué)儀器廠；醫(yī)用凈化工作臺(tái)，SW-CJ-2

5、F，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司司；CO2培養(yǎng)箱，HF151，上海力康醫(yī)療設(shè)備有限公司；倒置相差顯微鏡，XSZ-D2，重慶光學(xué)儀器廠。 1.2方法 1.2.1遲發(fā)型超敏反應(yīng)封閉貼敷試驗(yàn)4誘導(dǎo)：試驗(yàn)前剔除豚鼠背部被毛。豚鼠30只作為試驗(yàn)組，5只作為對(duì)照組。取供試品用吸收性紗布浸透1mL，貼敷于如圖1所示誘導(dǎo)部位，紗布覆蓋，繃帶固定，貼敷6h。1周中連續(xù)3d重復(fù)該操作，同法操作3周。對(duì)照組以氯化鈉注射液同法操作。見圖1。激發(fā)：最后一次誘導(dǎo)后14d，對(duì)所有豚鼠于圖1中的激發(fā)部位進(jìn)行激發(fā)，方法同，貼敷6h。24h后剔除激發(fā)部位及周圍被毛，溫水洗凈擦干，脫毛后至少2h，按表1對(duì)試驗(yàn)部位評(píng)分，并于48h再次評(píng)

6、分。見表1。1.2.2體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)（MTT法）3,5,6試驗(yàn)樣品及試液的制備：供試液：無菌條件下將直腸黏膜修復(fù)敷料與含血清培養(yǎng)基按0.2g/mL的比例于37C浸提24h后2000r/min離心3min，取上清。陰性對(duì)照液：取高密度聚乙烯（厚度為1mm）36cm2，剪成5mm×25mm的小塊，加12mL細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)液，37C浸提24h，過濾除菌。陽性對(duì)照液：5g/L苯酚溶液，過濾除菌，現(xiàn)用現(xiàn)配。空白對(duì)照液：同細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)液。方法：取6塊96孔培養(yǎng)板，每板各設(shè)6孔，每孔接種100L處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期狀態(tài)良好的L929細(xì)胞混懸液，密度為1×104個(gè)/mL。置5%CO2培養(yǎng)箱37C

7、培養(yǎng)24h后，棄去原生長(zhǎng)培養(yǎng)液。1-3#板各加100L供試液，作為供試品組；4#板加100L空白對(duì)照液，作為空白對(duì)照組；5#板加100L的陽性對(duì)照液，作為陽性對(duì)照組，6#板加100L的陰性對(duì)照液，作為陰性對(duì)照組，置CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)72h。72h后，取出各板，置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，每孔加入20L質(zhì)量濃度為5g/L的MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h后棄去孔內(nèi)液體，每孔加入150LDMSO，振蕩10min，在酶標(biāo)儀570nm和630nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，按下式計(jì)算相對(duì)增值率（RGR）。RGR=A/A0×100%注：RGR相對(duì)增值率，%；A供試品組（陽性及陰性對(duì)照組）在570nm和630nm波

8、長(zhǎng)下的吸光度的差值；A0空白對(duì)照組吸光度。根據(jù)RGR按表2判定毒性反應(yīng)分級(jí)。見表2。1.2.3黏膜刺激試驗(yàn)4選取直腸無明顯刺激癥狀、無缺陷和無損傷的家兔12只，供試品組及對(duì)照組各3只。供試品組將受試物原液1mL注入至直腸內(nèi)，對(duì)照組以氯化鈉注射液1mL同法處理。每隔24h連續(xù)重復(fù)上述操作，連續(xù)5d。觀察記錄會(huì)陰溢液、紅斑及刺激情況。給藥結(jié)束后解剖出直腸組織，觀察黏膜上皮組織。于注射部位取材，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，LEICA生物顯微鏡觀察。按表3記錄每只動(dòng)物病理反應(yīng)評(píng)分，按表4進(jìn)行刺激反應(yīng)程度分級(jí)。見表3、表4。 2.結(jié)果 2.1遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果 于激發(fā)后24h及48h觀察，供試品組及

9、對(duì)照組中豚鼠的反應(yīng)等級(jí)均為0，表明三批直腸黏膜修復(fù)敷料在本試驗(yàn)條件下對(duì)豚鼠皮膚無致敏反應(yīng)，結(jié)果見表5。 2.2體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表明在本實(shí)驗(yàn)室條件下，陽性對(duì)照組細(xì)胞毒性反應(yīng)級(jí)別為4級(jí)，陰性對(duì)照組細(xì)胞毒性反應(yīng)級(jí)別為0級(jí)，直腸黏膜修復(fù)敷料A和C的細(xì)胞毒性反應(yīng)級(jí)別2級(jí)，B的細(xì)胞毒性反應(yīng)級(jí)別1級(jí)，結(jié)果見表6。 2.3黏膜刺激性試驗(yàn)結(jié)果 病理檢查結(jié)果顯示：對(duì)照組黏膜層上皮結(jié)構(gòu)完整，固有層可見輕到中度炎細(xì)胞浸潤(rùn)及極輕度水腫，未見明顯血管充血，平均刺激指數(shù)為3.33；試驗(yàn)組黏膜層上皮結(jié)構(gòu)完整，固有層可見重度炎細(xì)胞浸潤(rùn)，少數(shù)血管充血及極輕度水腫，平均刺激指數(shù)為試驗(yàn)組（A）5.33，試驗(yàn)組（B）6.67

10、，試驗(yàn)組（C）5.33。結(jié)果表明在本實(shí)驗(yàn)室條件下，三批直腸黏膜修復(fù)敷料均具輕度刺激，對(duì)照組具極輕度刺激。病理檢查結(jié)果見圖2，反應(yīng)計(jì)分及程度見表7。 3.討論 醫(yī)療器械的生物學(xué)評(píng)價(jià)是在器械應(yīng)用于人體之前先模擬體內(nèi)、體外生物學(xué)試驗(yàn)，再根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，經(jīng)數(shù)據(jù)分析和信息匯總后進(jìn)行安全性評(píng)估，最終對(duì)該器械應(yīng)用于人體的風(fēng)險(xiǎn)性做出預(yù)判。其意義在于預(yù)測(cè)醫(yī)療器械在與人體接觸使用過程中的潛在危害，將風(fēng)險(xiǎn)性減少到最低的程度，確保使用的安全性7。醫(yī)療器械的生物學(xué)評(píng)價(jià)是確保人體應(yīng)用安全的重要前提，但其本質(zhì)是一項(xiàng)預(yù)測(cè)性工作，由于體外與體內(nèi)的情況不能完全等同，動(dòng)物與人體也存在差異，因此用體外試驗(yàn)的結(jié)果來推測(cè)體

11、內(nèi)的應(yīng)用狀況，用動(dòng)物試驗(yàn)得來的結(jié)果去推測(cè)人體應(yīng)用的安全與否，是有可能會(huì)出現(xiàn)某些偏差的8。正是由于醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)的特殊性及局限性，所以不能簡(jiǎn)單地只以某一項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果就做出判斷，而是應(yīng)該建立在綜合考慮分析的基礎(chǔ)上去做整體評(píng)價(jià)。雖然現(xiàn)在業(yè)內(nèi)已有了一系列的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)及方法，但是由于材料科學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的迅猛發(fā)展，各種類型的醫(yī)用產(chǎn)品不斷問世，現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)或方法還不足以完全適應(yīng)安全性評(píng)價(jià)的需求，這將是當(dāng)下醫(yī)療器械的安全性評(píng)價(jià)領(lǐng)域需要面對(duì)和思考的問題。本文綜合了GB/T16886及GB/T14233的系列標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)三批直腸黏膜修復(fù)敷料進(jìn)行了生物安全性評(píng)價(jià)，結(jié)果均符合規(guī)定。初步認(rèn)為三批直腸黏膜修復(fù)敷料用于臨床是安全

12、的。 參考文獻(xiàn) 1國(guó)務(wù)院.醫(yī)療器械監(jiān)督管理?xiàng)l例Z.2014-03-07. 2國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理?xiàng)l例.醫(yī)療器械分類規(guī)則Z.2015-07-14. 3中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局/中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第12部分:樣品制備與參照樣品S.2005:4-8. 4中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局/中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第10部分:刺激與遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn)S.2005:14-16,25-30. 5中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局/中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第5部分:體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)S.2003:84-88. 6中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局/中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).中華人