胃癌組織中化學(xué)趨化因子mRNA表達(dá)與TAM、MC計(jì)數(shù)的相關(guān)性研究

1、胃癌組織中化學(xué)趨化因子mRNAft達(dá)與TAMMC#數(shù)的相關(guān)性研究秦啟翻許干新，符正豪【摘要】目的：研究胃癌組織中白細(xì)胞介素8(IL8)mRNA單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP1)mRNA和巨噬細(xì)胞炎性蛋白1%(MIP10c)mRNAg達(dá)水平及腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM)、肥大細(xì)胞(MC)計(jì)數(shù)，探討它們之間的彼此關(guān)系及臨床病理意義。方式：51例胃癌常規(guī)制作石蠟包埋切片，應(yīng)用原位雜交方式檢測(cè)胃癌組織IL8mRNAMCPImRNA口MIP1%mRNA勺表達(dá)水平，并應(yīng)用免疫組化方式測(cè)定胃癌組織TAMff口M3h數(shù)，比較不同臨床、病理特點(diǎn)胃癌患者3種趨化因子的表達(dá)及TAMMC+數(shù)，并比較IL8mRNAMCP1m

2、RNAMIP10cmRNA同表達(dá)者TAMff口MC#數(shù)。結(jié)果：高、中分化及I+11期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度T1+T2患者IL8mRNAMCP1mRNAMIP10cmRN郊日性表達(dá)率及TAMff口M3h數(shù)明顯低于低、未分化及m+IV期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度T3+T4者(P<IL8mRNAMCP1mRNAF口MIP1%mRNAB性表達(dá)病例TAMM曲數(shù)均明顯高于陰性病例(P&lt；。結(jié)論：IL八、MCP1和MIP1%3種化學(xué)趨化因子mRNAlTAMMC#數(shù)可作為反映胃癌進(jìn)展、生物學(xué)行為和預(yù)后的重要標(biāo)志物，3種化學(xué)趨化因子mRN峋能增進(jìn)癌基質(zhì)中TAMMCM潤(rùn)和遷移?！娟P(guān)鍵詞】胃

3、癌；化學(xué)趨化因子類；腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞；肥大細(xì)胞；原位雜交；免疫組織化學(xué)ABSTRACTObjective:TodeterminerelationsofexpressionsofIL8mRNA,MCP1mRNA,MIP1%mRNAandthecountsofTAMandMCingastriccarcinomaandclinicalpathologicalsignificance.Methods:ExpressionlevelsofIL8mRNA,MCP1mRNAandMIP1%mRNAweredeterminedusinginsituhybridizationinparaffinembedded

4、sectionsofsamplesof51patientswithgastriccancer,andTAMandMCcountsofthesamplesofgastriccancerweredeterminedbyimmunohistochemistry.ExpressionlevelsofIL8mRNA,MCP1mRNAndMIP1%mRNA,andcountsofTAMandMCwerecomparedaccordingtodifferentclinicalandpathologicalfeaturesofgastriccancer,andrelationsbetweenexpressio

5、nlevelsofIL8mRNA,MCP1mRNAandMIP1認(rèn)mRNAanddifferentcountsofTAMandMCwerestudied.Results:PositiveexpressionratesofIL8mRNAMCP1mRNAMIIP1%mRNAandcountsofMCandTAMinpatientsofhighandmediumdegreedifferentiation,clinicalstageI+U,nolymphnodemetastasis,andinfiltrationofT1+T2weresignificantlylowerthanthoselowdegr

6、eelymphnodemetastasis,andinfiltrationofT3+T4(P<countsofTAMandMCincasesofpositiveexpressionofIL8mRNAMCPdifferentiationandundifferentiation,clinicalstageHI+IV,1mRNAndMIP1%mRNAweresignificantlyhigherthanthoseinnegativecases(P<).Conclusion:ChemokinesofIL8mRNA,MCP1mRNAandMIP1%mRNAcanpromote

7、infiltrationandmigrationofTAMandMCingastriccarcinoma,whichandcountsofTAMandMCmaybeimportantmarkersofthebiologicalbehavior,progressandprognosisofgastriccarcinoma.KEYWORDSGastriccarcinoma;Chemokines;Tumorrelatedmacrophage;Mastcell;Insituhybridization;Immunohistochemistry研究發(fā)覺一些趨化因子表達(dá)與惡性腫瘤進(jìn)展、血管生成、轉(zhuǎn)移發(fā)生及預(yù)

8、后有緊密關(guān)系1。最近幾年研究發(fā)覺惡性腫瘤組織中浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞即腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumorassociatedmacrophage,TAM激量及肥大細(xì)胞(mastcells,MC)浸潤(rùn)數(shù)量與惡性腫瘤進(jìn)展、血管生成及預(yù)后也有緊密關(guān)系26。本研究應(yīng)用原位雜交方式檢測(cè)胃癌組織白細(xì)胞介素8(IL8)mRNA單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP1)mRNAF口巨噬細(xì)胞炎性蛋白1%(MIP1%)mRNA的表達(dá)水平，并應(yīng)用免疫組化方式測(cè)定胃癌組織TAMF口MCT數(shù)，以探討其臨床病理意義及其彼此關(guān)系。1材料與方式標(biāo)本來源搜集本院普外科2007年1月2020年11月行胃癌根治術(shù)的胃癌及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)標(biāo)本51例,所有患者術(shù)前均

9、未行抗腫瘤醫(yī)治。其中男性27例,女性24例,年齡3284歲，中位年齡62歲。高、中分化19例,低分化32例;無淋巴轉(zhuǎn)移33例，有淋巴轉(zhuǎn)移18例，肝轉(zhuǎn)移4例；I+11期25例，m+IV期26例。51例均經(jīng)手術(shù)、病理檢查證明。方式標(biāo)本經(jīng)4獅醛固定后常規(guī)制作石蠟包埋切片，切片厚4m（1）IL8mRNAMCP1mRN原口MIP1%mRN麻納原位雜交法進(jìn)行染色，具體步驟參照試劑盒說明（IL8mRNAMCP1mRNABMIP1%mRNAM位雜交t劑盒及AECS色試劑盒購(gòu)自武漢博士德公司）。以切片中陽(yáng)性細(xì)胞率A25附陽(yáng)性，<25%者為陰性；以博士德公司提供的陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以原位雜交專用

10、PBS液替代雜交液作為陰性對(duì)照。（2）TAM和MCM納EnVisionTM免疫組化法進(jìn)行染色，具體步驟參照試劑盒說明（鼠抗人CD6濟(jì)口色胺酶單克隆抗體購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)公司，EnVisionTM染色試劑盒購(gòu)自上海基因生物技術(shù)公司）。細(xì)胞質(zhì)和（或）細(xì)胞核中含棕黃色顆粒者為陽(yáng)性細(xì)胞，TAM和MC計(jì)數(shù)方式：選低倍光鏡下5個(gè)含TAMF口MO量最多的區(qū)域，高倍鏡下計(jì)數(shù)5個(gè)視野內(nèi)TAMf口MCB量，其均值為TAM口MCh數(shù)；以北京中杉生物公司提供的陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以LPBS夜替代一抗作為陰性對(duì)照。統(tǒng)計(jì)學(xué)處置所得數(shù)據(jù)采納統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處置，數(shù)據(jù)的比較采納X2查驗(yàn)或t查驗(yàn)、F查驗(yàn)及Fisher&

11、#39;s精準(zhǔn)概率法，查驗(yàn)水準(zhǔn)a=。2結(jié)果51例胃癌IL8mRNAMCP1mRN母口MIP1認(rèn)mRN碳達(dá)陽(yáng)性病例別離為29例）、28例）和30例）,TAM和乂曲數(shù)均值別離為士個(gè)/Hp和士個(gè)/Hp。高、中分化及I+11期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度T1+T2患者IL8mRNAMCP1mRNAMIP1認(rèn)mRN郊日性表達(dá)率及TAMff口M3h數(shù)明顯低于低、未分化及m+IV期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度T3+T4者（P<，見表1。IL8mRNAMCP1%mRNA和MIP10cmRNA陽(yáng)性表達(dá)患者TAMMC計(jì)數(shù)明顯高于表達(dá)陰性者（P<,見表2。秦啟翻等.胃癌組織中化學(xué)趨化因子mRNA1

12、達(dá)與TAMM印數(shù)的相關(guān)性研究表1不同臨床、病理特點(diǎn)胃癌患者IL8mRNAMCP1mRNA口MIP1民mRNA勺陽(yáng)性表達(dá)及TAMMC+數(shù)表23種超化因子不同表達(dá)者TAMff口MC#數(shù)的比較3討論腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移擴(kuò)散至區(qū)域淋巴結(jié)的分子機(jī)制尚未明了。愈來愈多的證聽說明，腫瘤轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的、持續(xù)的、多時(shí)期的進(jìn)程，并表現(xiàn)出高度的特異性、非隨機(jī)性和器官選擇性，能夠轉(zhuǎn)移到特定器官的惡性腫瘤細(xì)胞均具有多種機(jī)制增進(jìn)它們侵襲組織，增強(qiáng)其生長(zhǎng)繁衍能力。趨化因子是一種能夠結(jié)合至靶細(xì)胞上特異性G蛋白耦聯(lián)受體的化學(xué)誘導(dǎo)因子，其參與調(diào)劑生理性和病理性白細(xì)胞的遷移7。IL八、MCP1和MIP10c均為具有重要生理作用的化學(xué)趨化

13、因子，當(dāng)它們與其相應(yīng)受體或配體結(jié)合后具有增進(jìn)血管生成、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及基質(zhì)蛋白酶生成等作用1。最近幾年研究發(fā)覺許多惡性腫瘤可合成和分泌IL八、MCP1和MIP1%等趨化因子，而其相應(yīng)來源的正常細(xì)胞或良性腫瘤無此自分泌作用，且陽(yáng)性表達(dá)的患者血清趨化因子含量也明顯升高。進(jìn)一步研究發(fā)覺，IL八、MCP1和MIP1%及其mRNAg達(dá)與惡性腫瘤進(jìn)展、血管生成、轉(zhuǎn)移發(fā)生、侵襲能力及其預(yù)后緊密相關(guān)，陽(yáng)性表達(dá)者進(jìn)展快、血管生成密度高、易發(fā)生轉(zhuǎn)移、侵襲能力強(qiáng)及預(yù)后差，其機(jī)制可能為腫瘤細(xì)胞分泌的趨化因子與相應(yīng)受體結(jié)合后能增進(jìn)基質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、腫瘤血管生成、癌基質(zhì)蛋白降解及阻礙癌細(xì)胞生物學(xué)行為等有關(guān)，但其確切機(jī)制仍需

14、進(jìn)一步研究2。本組資料發(fā)覺，部份胃癌可合成和分泌IL8mRNAMCP1mRNA口MIP1%mRNAt高、中分化及I+11期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度T1+T2患者IL8mRNAMCPImRNAMIP1%mRN4日性表達(dá)率及TAM和M曲數(shù)明顯低于低、未分化及m+IV期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度T3+T4者，提示3種趨化因子mRNA1達(dá)水平與胃癌進(jìn)展、轉(zhuǎn)移、侵襲能力及預(yù)后緊密相關(guān)。巨噬細(xì)胞是單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)內(nèi)某個(gè)時(shí)期的分化類型，是腫瘤間質(zhì)中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)的一個(gè)關(guān)鍵成份，單核巨噬細(xì)胞在癌間質(zhì)內(nèi)通常分化為TAM與腫瘤血管生成關(guān)系緊密2,3。文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)TA帳與腫瘤血管生成有關(guān)外，其癌基質(zhì)內(nèi)浸潤(rùn)的數(shù)量與惡性腫瘤進(jìn)展

15、、轉(zhuǎn)移及預(yù)后也存在緊密關(guān)系，TAW數(shù)高者進(jìn)展快、易發(fā)生轉(zhuǎn)移及預(yù)后差，TAM可作為惡性腫瘤預(yù)后評(píng)估的客觀指標(biāo)2,3。M件源于骨髓造血干細(xì)胞，常沿血管或淋巴管散布，其胞質(zhì)內(nèi)充滿異染顆粒。MCX合成和分泌40余種生物活性物質(zhì)，這些生物活性物質(zhì)不僅能直接引發(fā)反映，還可間接誘導(dǎo)臨近細(xì)胞釋放一些其他介質(zhì)，進(jìn)一步擴(kuò)展組織反映。近幾年有學(xué)者采納異染特殊染色或色胺酶免疫組化法研究了良、惡性腫瘤組織中MCB量轉(zhuǎn)變及其生物學(xué)意義，發(fā)覺MCU數(shù)與惡性腫瘤生物學(xué)行為、轉(zhuǎn)移發(fā)生及其預(yù)后緊密相關(guān)，MC計(jì)數(shù)高者多惡性度高、血管生成密度高、易發(fā)生轉(zhuǎn)移、侵襲能力強(qiáng)和預(yù)后差46。本組資料研究結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)較一致，提示TAMff口M

16、CHT數(shù)可能是反映胃癌進(jìn)展、生物學(xué)行為和預(yù)后的重要生物學(xué)指標(biāo)。Pellegriuo等1研究發(fā)覺化學(xué)趨化因子與多種炎性細(xì)胞癌間質(zhì)浸潤(rùn)和遷移呈緊密正相關(guān)，本組研究結(jié)果顯示IL8mRNAMCPImRNAf口MIP1%mRNAH性表達(dá)胃癌TAMMC計(jì)數(shù)明顯高于其相應(yīng)的陰性病例，說明胃癌組織中自分泌的IL八、MCP1和MIP1%具有誘導(dǎo)TAMff口MCtj癌基質(zhì)中浸潤(rùn)和遷移作用，具機(jī)制與3種趨化因子生物學(xué)作用有關(guān)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1PellegriuoA,YaccaA,ScavelliC,etandtumorsJ.RecentiprogMed,2002,99(1):642654.2 ChenJJ,YaoPL

17、,YuanA,etal.Upregultionoftumorinterleukin8expressionbyinfiltratingmacrophages:itscorrelationwithtumorangiogenesisandpatientsurvivalinnonsmallcelllungcancerJ.ClinCancerRes,2003,9(2):729737.3 GuoSJ,LinDM,LiJ,etal.TumorassociatedmarcrophagesandCD3zetaexpressionoftumorinfiltratinglymphocytesinhumanesophagealsquamouscellcarcinomaJ.DisEsophageus,2007,20(2):107116.4 AydinO,DusmezD,CinelL,etal.Immunohistologicalanalysisofmastcellnumberintheintratumoralandperitumoralregionsofprostatecarcinoma.ComparedtobenignprostatichyperplasisJ.PatholResPract,2002,198(3):267274.5 MolinD,EdstromA