大黃中蒽醌類成分的提取分離和鑒定實驗報告

1、大黃中蒽醌類成分的提取、分離和鑒定一、 實驗?zāi)康模?）熟悉蒽醌類成分的提取分離方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技術(shù)（3）學(xué)習(xí)蒽醌類化合物鑒定方法二、 實驗器材材料及試劑：大黃粗粉、濃硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、濃鹽酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通濾紙、薄層層析硅膠板（2.5 cm×10 cm）、廣泛PH試紙、剪刀、鉛筆、尺子、點樣毛細(xì)管、樣品管等。儀器：500mL圓底燒瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、燒杯、滴管、層析缸（廣口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽濾瓶、水浴鍋、集熱式磁力攪拌器、磁子、循環(huán)水式多用真空泵、鐵架臺等。三、 實驗原理大黃為蓼科植物

2、,味苦,性寒,具有瀉熱通腸、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)等功效。其主要成分為為蒽醌化合物，含量約為3%5%，大部分與葡萄糖結(jié)合苷，游離苷元有大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚等。其中，大黃酸具有羧基，酸性最強(qiáng)；大黃素具有-酚羥基，酸性第二；蘆薈大黃素連有羥甲基，酸性第三；大黃素甲醚和和大黃酚的酸性最弱。根據(jù)以上化合物的酸度差異，可用堿性強(qiáng)弱不同的溶液進(jìn)行梯度萃取分離。大黃酸 R1=H R2=COOH大黃素 R1=CH3 R2=OH蘆薈大黃素 R1=CH2OH R2=H大黃素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3大黃酚 R1=CH3 R2=H四、 實驗內(nèi)容大黃素的提取、分離流程圖大黃粗粉10g 2

3、0%H2SO4 150 ml 加熱1h, 抽濾、干燥 濾餅 150ml乙醚回流提取1 h 乙醚層 5%NaHCO3萃取 水層（紫紅色） 乙醚層 HCl 5%Na2CO3大黃酸沉淀（粗品）水層（紅色） 乙醚層 HCl 0.25% NaOH 大黃素沉淀（粗品） 水層（紅色） 蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚沉淀（混合物） 具體操作步驟1. 游離蒽醌的提?。?）酸水解：稱取大黃粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加熱1小時，放冷，抽濾，濾餅用NaOH溶液洗至近中性（pH約為6），于70干燥后，研碎，置250mL圓底燒瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小時（調(diào)45，回流即可），得到乙

4、醚提取液。（2）蒽醌類成分的提取：乙醚提取液經(jīng)薄層層析檢查有大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醚和大黃酚。薄層板為硅膠CMC粘合板，展開劑為石油醚（6090）：乙酸乙酯（7：3）近水平或直立展開，在可見光下，可看到四個斑點。其中最上面黃色斑點為大黃酚和大黃素甲醚的混合物,在此條件下,不能分開,其余3個斑點依Rf值（由大到?。┑捻樞蚴谴簏S素（橙色斑點）、蘆薈大黃素（黃色斑點）、大黃酸（黃色斑點），記錄圖譜并計算Rf值。2. PH梯度萃取分離（1）將乙醚提取液加入250mL分液漏斗中（使用前先檢漏），以35 mL 5 % NaHCO3水溶液萃取三次，乙醚層經(jīng)薄層層析檢查（展開劑同上），指示已提盡

5、大黃酸后，合并三次NaHCO3萃取液，用濃鹽酸酸化至PH 2-3左右，析出大黃酸沉淀。（注意：加酸時應(yīng)緩慢加入，以防酸液溢出，如出現(xiàn)分層現(xiàn)象，需將上層乙醚蒸去才能析出固體）。抽濾后，刮下顆粒并稱重。（2）經(jīng)5% NaHCO3水溶液萃取后的乙醚層，繼以35 mL 5 % Na2CO3水溶液萃取三次，乙醚層經(jīng)薄層檢查（展開劑同上），指示已提盡大黃素后，合并三次Na2CO3萃取液，用濃鹽酸酸化至PH2-3左右，析出大黃素沉淀。（酸化時注意操作同前）。抽濾后，刮下顆粒并稱重。（3）經(jīng)5% Na2CO3水溶液萃取過后乙醚層以35 mL 0.25% NaOH水溶液萃取四次，乙醚層經(jīng)薄層檢查（展開

6、劑同上），指示已提盡后，合并三次 NaOH萃取液，用濃鹽酸酸化至PH2-3左右，析出蘆薈大黃素、大黃酚和大黃素甲醚沉淀混合物。（酸化時注意操作同前）。抽濾后，刮下顆粒并稱重。3. 樣品鑒定(1) 堿液試驗 分別取各蒽醌結(jié)晶數(shù)毫克置于樣品管中，加2%氫氧化鈉溶液1ml，觀察顏色變化。凡有互為鄰位或?qū)ξ涣u基的蒽醌呈藍(lán)紫至藍(lán)色，其它羥基蒽醌呈紅色。五、 注意事項：（1）游離蒽醌的提取要控制溫度，回流不宜太劇烈。（2）pH梯度萃取分離時，以保證提取充分，可以用薄層色譜作監(jiān)測。（3）注意堿液濃度及萃取時的靜置時間對實驗結(jié)果的影響。六、 數(shù)據(jù)記錄、結(jié)果討論與分析：Rf大黃素=3.60/5=0.7

7、2Rf蘆薈大黃素=2.05/5=0.41Rf大黃酸=1.45/5=0.295cmm1.45cmm2.05cm3.60cm1、大黃酸沉淀2、大黃素沉淀3、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚沉淀混合物0.9mg3.2mg2.9mg分別取各上述沉淀（蒽醌結(jié)晶）數(shù)毫克置于樣品管中，加2%氫氧化鈉溶液1ml后，觀察到各樣品管中溶液均呈紅色、但第1根管中顏色略淡。七、 思考題1、 簡述大黃中5種游離羥基蒽醌化合物的酸性與結(jié)構(gòu)的關(guān)系。答：A大黃酸 R1=H R2=COOHB大黃素 R1=CH3 R2=OHC蘆薈大黃素 R1=CH2OH R2=HD大黃素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3E大黃酚 R1=CH3 R

8、2=H酸性：A>B>C>ED2.pH梯度萃取法的原理是什么？如何利用該方法分離大黃中的5種游離羥基蒽醌化合物？答：pH梯度萃取法的原理是由于溶劑系統(tǒng)pH變化而改變了它們的存在狀態(tài)（游離型或解離型），從而改變了他們在溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)。由于各羥基蒽醌結(jié)構(gòu)上的不同所表現(xiàn)的酸性不同，用pH梯度萃取法分離他們；大黃酚和大黃素甲醚酸性相近，利用其極性的差異，用柱色譜分離之。3.結(jié)合本實驗，思考設(shè)計實驗方案所需因素？答：游離蒽醌的提取要控制溫度，回流不宜太劇烈。要注意堿液濃度及萃取時的靜置時間對實驗結(jié)果的影響。八、 參考文獻(xiàn)（1） 吳立軍主編，天然藥物化學(xué)實驗指導(dǎo)北京；人民衛(wèi)生出版社，2011（2）康廷國主編，中成藥薄層色譜鑒別.北京：人民出版社，