抗氧化物活性測(cè)定方法總結(jié)

1、抗氧化物活性測(cè)定方法（傾向于考慮DPPH法和ORAC法）1 .FRAP法:鐵離子還原抗氧化能力測(cè)定法1FRAP（ferricionreducingantioxidantpower）方法，在低pH值的溶液中，F(xiàn)e3+-TPTz（Fe3+-三叱噬三嗪）被抗氧化劑還原成有色的Fe2+-TPTZ0反應(yīng)的結(jié)果常以Fe2+當(dāng)量或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的抗氧化能力表示。該法快速簡(jiǎn)便、易于操作、重復(fù)性好，但FRAP反應(yīng)屬于電子轉(zhuǎn)移（SET）反應(yīng)，因此FRAP方法不能夠測(cè)定氫轉(zhuǎn)移反應(yīng)（HAT）起作用的物質(zhì)。而且該法實(shí)際測(cè)定的是待測(cè)生物活性物質(zhì)將Fe3+還原為Fe2+的能力，因此沒有抗氧化能力的生物學(xué)相關(guān)性。2 .TEAC法（

2、troloxequivalentantioxidantcapacity）ABTS（2,2'-amino-di（2-ethyl-benzothiazolinesulphonicacid-6）ammoniumsalt,2,2氨基-二（3-乙基-苯并曝哇咻磺酸-6）錢鹽）與過氧化物酶和氫過氧化物在一起形成ABTS+陽(yáng)離子自由基。在抗氧化劑存在時(shí)，這種自由基混合物的光吸收值下降，下降程度取決于抗氧化劑的抗氧化能力，測(cè)得的結(jié)果以TEAC表示，即被測(cè)抗氧化劑消除ABTS+的能力（吸光度大小的變化）與標(biāo)準(zhǔn)抗氧化劑trolox（VE的水溶性類似物"青除ABTS+的能力的比值。TEAC法十分簡(jiǎn)

3、單，適用于大量樣品的分析檢測(cè)。但是，ABTS+并非生理自由基，缺乏生理相關(guān)性，而且與FRAP方法相似，ABTS+與不同抗氧化劑問的氧化反應(yīng)時(shí)間不同，因此，只能定性不能定量評(píng)價(jià)樣品的抗氧化能力。3 .DPPH法23（2,2-diphenyt-l-picrylhydrazylradicalscavengingcapacity）DPPH（二苯代苦味肥基自由基）法是較常用的方法之一。DPPH是一種穩(wěn)定的以氮為中心的自由基，其醇溶液呈深紫色，在517nm處有一吸收峰。當(dāng)反應(yīng)系統(tǒng)中存在自由基消除劑時(shí)，它可以和DPPH的單電子配對(duì)而使517nm處的吸收峰漸漸消退。而且，這種顏色變淺的程度與配對(duì)電子數(shù)成化學(xué)計(jì)

4、量關(guān)系。因此，根據(jù)吸光度的變化可測(cè)得抗氧化劑的活性。通過計(jì)算DPPH自由基剩余一半時(shí)所需抗氧化劑的濃度（EC50）以及時(shí)間（TEC50）反應(yīng)抗氧化物的活性。DPPH法快速、簡(jiǎn)單，僅需要一臺(tái)紫外分光光度計(jì)就可以測(cè)定，但DPPH方法存在的不足是，當(dāng)被測(cè)物與DPPH紫外吸收有重疊時(shí)，將會(huì)影響測(cè)定結(jié)果，比如類胡蘿卜素。止匕外，由于空間位阻決定反應(yīng)的傾向，小分子化合物由于更易接近自由基而擁有相對(duì)較高的抗氧化能力。此外該方法線性范圍也相對(duì)較窄，而且所有還原劑都能夠?qū)PPH起作用，因此結(jié)果并不能完全代表抗氧化能力4.ORAC法：氧化自由基吸收能力測(cè)定ORAC（oxygenradicalabsorbance

5、capac讓妮測(cè)定氧化自由基吸收能力，氧化自由基吸收能力又稱為抗氧化能力。以SodiumFluorescein（SF）作為熒光指示物質(zhì)，以AAPH（2,2'-偶氮二（2-甲基丙基咪）二鹽酸鹽）作為自由基來源，以抗氧化標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)Trolox作為定量標(biāo)準(zhǔn)。SF受到自由基攻擊，在一定波長(zhǎng)下熒光度不斷衰減，采用熒光分析儀測(cè)定其熒光強(qiáng)度衰減變化可計(jì)算樣品的自由基消除能力。ORAC方法可以提供的自由基與生命現(xiàn)象中的自由基具有高度一致性，ORAC作用原理是一種經(jīng)典的通過抑制氫轉(zhuǎn)移反應(yīng)過程終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。ORAC法測(cè)定的是抗氧化劑抑制體系中活性自由基引起的氧化還原反應(yīng)的能力.ORAC分析方法是一種新

6、的、獨(dú)特的評(píng)價(jià)各種物質(zhì)抗氧化活性的方法，受到美國(guó)農(nóng)業(yè)部（USDA）、美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生院（NIH）、美國(guó)宇航局（NASA）及美國(guó)哈佛大學(xué)（HarvardUniversity）等眾多科技研究機(jī)構(gòu)的認(rèn)可。美國(guó)官方分析化學(xué)師協(xié)會(huì)（AOAC）已將其批準(zhǔn)為國(guó)際AOAC標(biāo)準(zhǔn)方法。同時(shí)在產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、銷售的工業(yè)領(lǐng)域中，作為衡量產(chǎn)品抗氧化能力的標(biāo)準(zhǔn)分析方法已受到業(yè)內(nèi)的廣泛認(rèn)同，并成為各進(jìn)出口企業(yè)實(shí)行國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)量控制的依據(jù)。ORAC法操作方法簡(jiǎn)便，適用于高通量篩選和進(jìn)行常規(guī)質(zhì)量控制。主要的不足之處是所需儀器較為昂貴，而且實(shí)驗(yàn)對(duì)溫度和熒光標(biāo)記物較為敏感，增加了實(shí)驗(yàn)的操作難度。5 .TRAP法：總自由基清除抗氧化能力

7、法TRAP（totalperoxylradical-trappingantioxidantparameterassay）T法以ABTS（2,2'-聯(lián)氨-雙（3-乙基苯并曝哇咻-6-磺酸）二胺鹽）作為顯色劑，在過氧化氫引發(fā)劑AAPH（2,2'-偶氮二（2-甲基丙基咪）二鹽酸鹽）的作用下，可定量生成ABTS自由基，其反應(yīng)混合液呈藍(lán)色，在734nm出存在強(qiáng)吸收。抗氧化物質(zhì)與自由基作用后會(huì)使反應(yīng)混合液顏色變淺，在734nm出的吸收度變小，利用比色法可測(cè)定自由基消除情況，評(píng)價(jià)抗氧化能力。以維生素C作為標(biāo)準(zhǔn)參照物，可定量測(cè)定總抗氧化值，及TRAP值。TRAP法經(jīng)常用來測(cè)定血漿或血清的總抗氧

8、化能力，因?yàn)門RAP法用于測(cè)量非酶抗氧化物質(zhì)，比如谷胱甘肽，維生素C,維生素E,B-胡蘿卜素。不足之處是反應(yīng)終點(diǎn)各異，各個(gè)實(shí)驗(yàn)室缺乏可比性。6 .TOSC法：總氧自由基消除能力檢測(cè)法TOSC(totaloxyradicalscavengingcapadty)勺原理是，ABAP產(chǎn)生的自由基與KMBA(a-keto-丫-methiolbutyricacid)作用可氧化產(chǎn)生乙烯，抗氧化劑的存在可與KMBA競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合自由基，從而減少乙烯的產(chǎn)量，最后通過乙烯的減少程度來衡量抗氧化能力的強(qiáng)弱。TOSC法以氣相色譜或液相色譜為檢測(cè)手段，優(yōu)勢(shì)是較全的反應(yīng)機(jī)體的中抗氧化能力。TOSC方法簡(jiǎn)便，靈敏，能夠定量分析其

9、抗氧化能力，然而它需要使用氣相色譜儀器，也不適合高通量篩選，并且和TRAP法相似，抗氧化物質(zhì)的濃度與其乙烯的抑制程度沒有呈現(xiàn)很好的線性關(guān)系，因而很難對(duì)樣品進(jìn)行合理的比較。7 .F-C法F-C(Folin-Ciocalteu)方法的原理是，F(xiàn)olin-Ciocalteu試劑中的鴇鋁酸可以和多酚化合物反應(yīng)生成藍(lán)色化合物，顏色深淺跟多酚含量呈正相關(guān)，因此可以通過比色法對(duì)多酚總量進(jìn)行定量，結(jié)果以五倍子酸作為標(biāo)準(zhǔn)參考物。F-C法一直被作為一種衡量天然產(chǎn)物中總的酚類含量的方法，此法簡(jiǎn)單、敏感、精確，然而因?yàn)槭潜壬ǎ厝皇艿揭恍┪镔|(zhì)的干擾，如糖類、抗壞血酸、有機(jī)酸等，這些物質(zhì)會(huì)提高酚類的總含量。1杜芹芹、張旭等，人參與附子、黃連配伍的HPLC-ESI-MSff究及抗氧