第四章免疫學檢測技術

1、免疫學檢測技術免疫學檢測技術中衛(wèi)市第一人民醫(yī)院中衛(wèi)市第一人民醫(yī)院魏玉紅魏玉紅一、一、免疫學檢驗原理免疫學檢驗原理抗原抗原- -抗體反應：指抗原與相應抗體在體內、外發(fā)抗體反應：指抗原與相應抗體在體內、外發(fā)生高度生高度特異性結合特異性結合反應。由于實驗所用的抗體存在反應。由于實驗所用的抗體存在于血清中，故又稱血清學反應（于血清中，故又稱血清學反應（serological serological reaction)reaction)應用：應用：用已知抗原檢測未知抗體；用已知抗原檢測未知抗體；用已知抗體檢測未知抗原：用已知抗體檢測未知抗原：定性或定量檢測體內各種分子；定性或定量檢測體內各種分子；用已知

2、抗體檢測半抗原物質。用已知抗體檢測半抗原物質。1.1.特異性和交叉反應特異性和交叉反應 特異性特異性：一種抗原通常僅能與：一種抗原通常僅能與由它刺激所產生的抗體結合。由它刺激所產生的抗體結合。分子基礎：分子基礎：抗原表位與抗體分抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構型的互補性子高變區(qū)之間空間構型的互補性。（一）抗原（一）抗原-抗體反應的特點抗體反應的特點交叉反應交叉反應（cross reactioncross reaction）性：若兩種抗原）性：若兩種抗原分子有一個或數個相同（或相似）的決定基，分子有一個或數個相同（或相似）的決定基，則針對一種抗原的抗血清可與另一種抗原發(fā)生則針對一種抗原的抗血清

3、可與另一種抗原發(fā)生反應。反應。 結合價：結合價： 天然抗原分子表面一般含多種抗原決定基，可與天然抗原分子表面一般含多種抗原決定基，可與多個抗體分子結合，為多個抗體分子結合，為多價多價。單體形式的抗體分。單體形式的抗體分子有兩個子有兩個FabFab段，能結合兩個相同的抗原決定基，段，能結合兩個相同的抗原決定基，為為兩價兩價。2.2.比例性比例性比例合適：比例合適： 若抗原、抗體的數量比例合適，抗體分子的兩個若抗原、抗體的數量比例合適，抗體分子的兩個FabFab段段分別與兩個抗原決定基結合，相互交叉連接成分別與兩個抗原決定基結合，相互交叉連接成網格狀復合網格狀復合體體，則反應體系中基本不存在游離的

4、抗原或抗體，此時形，則反應體系中基本不存在游離的抗原或抗體，此時形成肉眼可見的反應物（沉淀物或凝集物）。成肉眼可見的反應物（沉淀物或凝集物）。 因此，確定反應體系中抗原、抗體的最適比例十分重要。因此，確定反應體系中抗原、抗體的最適比例十分重要。前帶現象（前帶現象（prozone）和后帶現象）和后帶現象(postzone) v Ab過剩和過剩和Ag過剩過剩前帶現象（前帶現象（prozoneprozone）和后帶現象）和后帶現象(postzone(postzone) )AbAb過剩和過剩和AgAg過剩過剩網格學說網格學說（lattice theory）抗體過?？贵w過剩抗原過?？乖^剩抗體抗體比例合

5、適抗體抗體比例合適抗原抗原抗體抗體 抗原抗原- -抗體反應為分子表面的非共價結合，結抗體反應為分子表面的非共價結合，結合合雖穩(wěn)定但可逆雖穩(wěn)定但可逆。在一定條件下（如低。在一定條件下（如低pHpH、高濃、高濃度鹽、凍融等），抗原度鹽、凍融等），抗原- -抗體復合物可被解離。抗體復合物可被解離。解離后的抗原和抗體仍保持原有理化特性和生物解離后的抗原和抗體仍保持原有理化特性和生物學活性。學活性。 根據此特點，可借助親和層析法純化抗原或抗根據此特點，可借助親和層析法純化抗原或抗體。體。3.3.可逆性可逆性4.4.階段性階段性特異性結合階段：特異性結合階段：可見的反應階段：可見的反應階段：1.1.電解質

6、電解質 抗原和抗體有對應的極性基團，能相互吸附并抗原和抗體有對應的極性基團，能相互吸附并由親水性變?yōu)槭杷?。電解質的存在使抗原由親水性變?yōu)槭杷?。電解質的存在使抗原- -抗抗體復合物失去電荷而凝聚，出現可見反應，故體復合物失去電荷而凝聚，出現可見反應，故免疫學試驗中免疫學試驗中多用生理鹽水稀釋抗原或抗體多用生理鹽水稀釋抗原或抗體。（二）、（二）、抗原抗原- -抗體反應的影響因素抗體反應的影響因素2.2.酸堿度酸堿度 抗原抗體反應的最適抗原抗體反應的最適pHpH是是6-86-8。3.3.溫度溫度最適溫度為最適溫度為3737。有些例外，如冷凝集素在。有些例外，如冷凝集素在 44左右與紅細胞結合最好

7、，左右與紅細胞結合最好，2020以上反而以上反而解離。解離。 4.4.抗原和抗體的性質抗原和抗體的性質 抗體的特異性和親和力是決定抗原抗體的特異性和親和力是決定抗原- -抗體抗體反應的關鍵因素。反應的關鍵因素。 此外，抗原理化性質、抗原決定基多寡和此外，抗原理化性質、抗原決定基多寡和種類等均可影響抗原種類等均可影響抗原- -抗體反應?？贵w反應?？贵w分子上一個抗抗體分子上一個抗原結合點與對應的原結合點與對應的抗原決定基之間的抗原決定基之間的結合能力結合能力親和力親和力( (affinity) 根據抗原的性質、結合反應的現象、參與反根據抗原的性質、結合反應的現象、參與反應的成分等因素分類：應的成分

8、等因素分類： 1.凝集反應凝集反應 2.沉淀反應沉淀反應 3.補體參加的反應補體參加的反應 4.免疫標記技術免疫標記技術（三）、免疫學檢驗方法（三）、免疫學檢驗方法 反應類型反應類型實驗技術實驗技術非非標標記記凝集反應凝集反應直接凝集試驗、間接凝集試驗、間接直接凝集試驗、間接凝集試驗、間接抑制凝集試驗、協同凝集試驗抑制凝集試驗、協同凝集試驗沉淀反應沉淀反應液相內凝集試驗、凝膠內凝集試驗液相內凝集試驗、凝膠內凝集試驗補體參與的反應補體參與的反應補體溶血試驗、補體結合試驗補體溶血試驗、補體結合試驗中和反應中和反應病毒中和試驗、毒素中和試驗病毒中和試驗、毒素中和試驗標標記記標記免疫反應標記免疫反應熒

9、光免疫技術熒光免疫技術放射免疫技術放射免疫技術酶免疫技術酶免疫技術發(fā)光免疫技術發(fā)光免疫技術金免疫技術金免疫技術 顆粒性抗原（細菌或細胞等）與相應抗體結合，顆粒性抗原（細菌或細胞等）與相應抗體結合，在一定條件下，出現肉眼可見的凝集物，稱為凝集在一定條件下，出現肉眼可見的凝集物，稱為凝集反應反應(agglutination)(agglutination) 。用于凝集反應中的抗原稱用于凝集反應中的抗原稱凝集原凝集原(agglutinogen(agglutinogen) )。用于凝集反應中的抗體稱用于凝集反應中的抗體稱凝集素（凝集素（agglutinin)agglutinin)。 凝集反應（凝集反應（

10、Agglutination TestsAgglutination Tests）直接凝集（直接凝集（direct agglutination) ： 細菌或紅細胞與相應抗體直接反應，可出現細菌或細菌或紅細胞與相應抗體直接反應，可出現細菌或紅細胞凝集現象。紅細胞凝集現象。2 2間接凝集間接凝集（indirect or passive agglutination) ： 檢測針檢測針 對可溶性對可溶性AgAg的的AbAb3 3間接凝集抑制試驗間接凝集抑制試驗 (direct agglutination inhibition test)4. 4. 協同凝集試驗協同凝集試驗（co-agglutination

11、 test） 載體為金葡菌，其細胞壁蛋白載體為金葡菌，其細胞壁蛋白A A與與IgGIgG 的的FcFc結合，用結合，用于細菌、病毒的快速檢測。于細菌、病毒的快速檢測。妊娠免疫診斷試驗妊娠免疫診斷試驗 v孕婦尿中，絨毛膜促性腺激素（孕婦尿中，絨毛膜促性腺激素（HCGHCG）含量明顯增）含量明顯增高。（高。（HCGHCG是可溶性抗原是可溶性抗原 ）v反之，非孕婦尿中反之，非孕婦尿中HCGHCG含量甚微，不足以消耗掉抗含量甚微，不足以消耗掉抗HCGHCG抗體?？贵w。 HCGHCG檢測為間接凝集試驗的應用檢測為間接凝集試驗的應用Definition:Definition:可溶性抗原可溶性抗原（血清蛋白

12、、外毒素、（血清蛋白、外毒素、細菌濾液等）與相應抗體結合，在一定條件下，細菌濾液等）與相應抗體結合，在一定條件下，形成出現肉眼可見的沉淀物的現象稱為沉淀反應。形成出現肉眼可見的沉淀物的現象稱為沉淀反應。沉淀反應（沉淀反應（Precipitation Tests）用于沉淀反應中的抗原稱用于沉淀反應中的抗原稱沉淀原沉淀原(precipitonogen(precipitonogen) )。用于沉淀反應中的抗體稱用于沉淀反應中的抗體稱沉淀素沉淀素（precipitin) precipitin) 。 v大多沉淀反應多用半固體瓊脂凝膠作為介質大多沉淀反應多用半固體瓊脂凝膠作為介質進行進行瓊脂擴散瓊脂擴散或

13、或免疫擴散免疫擴散，即可溶性抗原與，即可溶性抗原與抗體在凝膠中擴散，在比例合適處相遇即形抗體在凝膠中擴散，在比例合適處相遇即形成可見的白色沉淀。成可見的白色沉淀。1 1單向免疫擴散單向免疫擴散(single immunodiffusion(single immunodiffusion) )2 2雙向免疫擴散雙向免疫擴散(double immunodiffusion(double immunodiffusion) )沉淀反應沉淀反應單向免疫擴散單向免疫擴散(Single Immunodiffusion(Single Immunodiffusion) )v是將一定量已知抗體混于是將一定量已知抗體混

14、于瓊脂凝膠中制瓊脂板，在瓊脂凝膠中制瓊脂板，在適當位置打孔后將抗原加適當位置打孔后將抗原加入孔中擴散?？乖跀U散入孔中擴散?？乖跀U散過程中與凝膠中的抗體相過程中與凝膠中的抗體相遇，形成以抗原孔為中心遇，形成以抗原孔為中心的的沉淀環(huán)沉淀環(huán)，環(huán)的直徑與抗，環(huán)的直徑與抗原含量成正比相關。本法原含量成正比相關。本法常用于測定血清常用于測定血清IgGIgG、IgMIgM、IgAIgA 和和 C C 3 3等的含量。等的含量。含抗體的凝膠含抗體的凝膠沉淀環(huán)沉淀環(huán)雙向免疫擴散雙向免疫擴散 （Double ImmunodiffusionDouble Immunodiffusion) )v是將抗原與抗體分別加

15、入是將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠的小孔中，二者瓊脂凝膠的小孔中，二者自由向周圍擴散并相遇，自由向周圍擴散并相遇，在比例合適處形成在比例合適處形成沉淀線沉淀線。如果反應體系中含兩種以如果反應體系中含兩種以上的抗原抗體系統(tǒng)，則小上的抗原抗體系統(tǒng)，則小孔間可出現兩條以上的沉孔間可出現兩條以上的沉淀線。本法常用于抗原或淀線。本法常用于抗原或抗體的定性抗體的定性 、組成和兩、組成和兩種抗原相關性分析的檢測。種抗原相關性分析的檢測。補體結合試驗補體結合試驗（Complement Fixation test, CFT)Complement Fixation test, CFT)補體結合試驗補體結合試驗(co

16、mplement fixation test，CFT ) 將免疫溶血作為指示系統(tǒng)，用以檢測另一反將免疫溶血作為指示系統(tǒng)，用以檢測另一反應應 系統(tǒng)中抗原或抗體的傳統(tǒng)方法。系統(tǒng)中抗原或抗體的傳統(tǒng)方法。試驗原理試驗原理作用原理：作用原理：利用補體的溶細胞作用進行各種利用補體的溶細胞作用進行各種物理狀態(tài)的抗原抗體測定物理狀態(tài)的抗原抗體測定5種成分，種成分，3個系統(tǒng)個系統(tǒng) 反應系統(tǒng)（溶菌系統(tǒng)）：反應系統(tǒng)（溶菌系統(tǒng)）：已知已知抗原抗原（或抗體）（或抗體） 與待測與待測抗體抗體（或抗原）（或抗原） 補體補體系統(tǒng)：系統(tǒng)： 指示系統(tǒng)（溶血系統(tǒng)）：指示系統(tǒng)（溶血系統(tǒng)）：SRBC與相應與相應溶血素溶血素。試驗時常將

17、其預先結合，成為致敏綿羊紅細胞試驗時常將其預先結合，成為致敏綿羊紅細胞（sensitized sheep red blood cell,SRBCS）。溶溶菌菌系系統(tǒng)統(tǒng)反應分兩步進行反應分兩步進行 第一步第一步: :反應系統(tǒng)與補體的作用反應系統(tǒng)與補體的作用 第二步第二步: :指示系統(tǒng)利用剩余補體的反應指示系統(tǒng)利用剩余補體的反應不溶血為補體結合試驗陽性，而溶血為試驗陰性不溶血為補體結合試驗陽性，而溶血為試驗陰性已知抗原加入血清（檢測抗體）已知抗原加入血清（檢測抗體）加入標準量補體加入標準量補體加入包被抗體的紅細胞加入包被抗體的紅細胞檢測紅細胞溶解情況檢測紅細胞溶解情況AgPatientsserum

18、 AbNo AbAg 用熒光素、酶、放射性核素或化學發(fā)光物質等用熒光素、酶、放射性核素或化學發(fā)光物質等標記抗體或抗原，進行抗原標記抗體或抗原，進行抗原- -抗體反應的檢測，是抗體反應的檢測，是目前應用最為廣泛的免疫學檢測技術。標記物與目前應用最為廣泛的免疫學檢測技術。標記物與抗體或抗原連接后并不改變抗原抗體的免疫特性，抗體或抗原連接后并不改變抗原抗體的免疫特性，具有靈敏度高、快速、可定性、定量、定位等優(yōu)具有靈敏度高、快速、可定性、定量、定位等優(yōu)點。點。免疫標記技術免疫標記技術（ImmunolabellingImmunolabelling technique technique） 用熒光素與抗體

19、連接成用熒光素與抗體連接成熒光抗體熒光抗體，再與待，再與待檢標本中抗原反應，置檢標本中抗原反應，置熒光顯微鏡熒光顯微鏡下觀察，抗下觀察，抗原原- -抗體復合物散發(fā)熒光，借此對抗原進行定抗體復合物散發(fā)熒光，借此對抗原進行定性或定位。性或定位。 1免疫熒光法免疫熒光法(immunofluorescence, IF)（1 1）直接熒光法：）直接熒光法：熒光素直接標記抗體，對標本熒光素直接標記抗體，對標本進行檢測。該法優(yōu)點是特異性高，缺點是檢查任進行檢測。該法優(yōu)點是特異性高，缺點是檢查任一抗原均須制備相應熒光抗體。一抗原均須制備相應熒光抗體。（2 2）間接熒光法：）間接熒光法：用一抗與標本中抗原結合，

20、再用一抗與標本中抗原結合，再用熒光素標記的二抗進行檢測。該法優(yōu)點是敏感用熒光素標記的二抗進行檢測。該法優(yōu)點是敏感度比直接法高，制備一種熒光素標記的二抗即可度比直接法高，制備一種熒光素標記的二抗即可用于多種抗原的檢測用于多種抗原的檢測, ,但非特異性反應亦增強。但非特異性反應亦增強。免疫熒光法分類免疫熒光法分類免疫熒光法圖示免疫熒光法圖示 此法將抗原此法將抗原- -抗體反應的特異性與抗體反應的特異性與酶催化作用酶催化作用的高效性相結合，借助酶作用于底物的顯色反應的高效性相結合，借助酶作用于底物的顯色反應判定結果。應用酶標測定儀測定光密度（判定結果。應用酶標測定儀測定光密度（ODOD）值）值可反映

21、抗原含量，靈敏度達可反映抗原含量，靈敏度達ngng/ml/ml甚至甚至pg/mlpg/ml水平。水平。常見的標記物為：辣根過氧化物酶（常見的標記物為：辣根過氧化物酶（HRPHRP）和堿）和堿性磷酸酶（性磷酸酶（APAP） 酶免疫測定酶免疫測定(enzyme immunoassay, EIA)常用的方法如下：常用的方法如下：（1 1）酶聯免疫吸附試驗）酶聯免疫吸附試驗 (enzyme linked (enzyme linked immunosorbentimmunosorbent assay assay，ELISA) ELISA) 是酶免疫測定中應用最廣的技術，用于是酶免疫測定中應用最廣的技術，

22、用于測定測定可溶性抗原或抗體。可溶性抗原或抗體。優(yōu)點：靈優(yōu)點：靈敏度高、操作簡便、穩(wěn)定性強，可敏度高、操作簡便、穩(wěn)定性強，可自動化檢測，從而被廣泛用于檢測多種病原自動化檢測，從而被廣泛用于檢測多種病原體抗原或抗體、血液及其他體液中微量蛋白體抗原或抗體、血液及其他體液中微量蛋白成分、細胞因子等。成分、細胞因子等。 分類：（1 1）放射免疫分析法）放射免疫分析法(radioimmunoassay, RIA)(radioimmunoassay, RIA)（2 2）免疫放射分析法（）免疫放射分析法（immunoradiometricimmunoradiometric assay, assay, IRM

23、A IRMA） 3放射免疫技術放射免疫技術 乃用放射性核素標記抗原或抗體進行免疫學乃用放射性核素標記抗原或抗體進行免疫學檢測。該法兼有放射性核素的高靈敏度和抗原檢測。該法兼有放射性核素的高靈敏度和抗原- -抗體反應的特異性，檢測靈敏度達抗體反應的特異性，檢測靈敏度達pgpg水平。常用水平。常用于標記的放射性核素為于標記的放射性核素為125125I I和和131131I I，分為液相和固，分為液相和固相兩種方法。相兩種方法。 該法常用于測定該法常用于測定微量物質微量物質，如胰島素、生長，如胰島素、生長激素、甲狀腺素、孕酮等激素，嗎啡、地高辛、激素、甲狀腺素、孕酮等激素，嗎啡、地高辛、IgEIgE

24、等。等。 放射免疫分析法放射免疫分析法(radioimmunoassay, RIA) 屬于非競爭性放射性配體結合分析技術。他與屬于非競爭性放射性配體結合分析技術。他與RIARIA為代表的競爭性放射性配體分析技術的區(qū)別主為代表的競爭性放射性配體分析技術的區(qū)別主要有兩點：一，放射性核素標記的是抗體而不是抗要有兩點：一，放射性核素標記的是抗體而不是抗原，其二是采用過量抗體而不是限量抗體。原，其二是采用過量抗體而不是限量抗體。RIMARIMA與與RIARIA相比較，提高了檢測的靈敏度并使檢測范圍增相比較，提高了檢測的靈敏度并使檢測范圍增寬，特異性和精確度進一步提高。寬，特異性和精確度進一步提高。 免疫

25、放射分析法免疫放射分析法（immunoradiometricimmunoradiometric assay, IRMA assay, IRMA） 免疫放射分析法有以下特點：免疫放射分析法有以下特點：1.1.以標記抗體作為示蹤劑以標記抗體作為示蹤劑2.2.反應動力學：因標記抗體是過量的，且反應是非競爭性反應動力學：因標記抗體是過量的，且反應是非競爭性 的，抗原抗體是全量反應，故反應速度比的，抗原抗體是全量反應，故反應速度比RIARIA快?？臁?.3.靈敏度明顯高于放射免疫分析，約為放射免疫分析的靈敏度明顯高于放射免疫分析，約為放射免疫分析的1010100100倍。倍。4.4.標準曲線工作范圍寬。

26、標準曲線工作范圍寬。5.5.特異性高。特異性高。6.6.穩(wěn)定性好。穩(wěn)定性好。金標記免疫技術金標記免疫技術 膠體金標記技術膠體金標記技術 (Immunogold(Immunogold labeling labeling technique) technique) 是以膠體金作為示蹤標記物，應是以膠體金作為示蹤標記物，應用于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術。用于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術。免疫膠乳試驗應用免疫膠乳試驗應用膠乳凝集試驗膠乳凝集試驗原理：原理： 膠乳凝集試驗是一種間接凝集試驗，它是以聚膠乳凝集試驗是一種間接凝集試驗，它是以聚苯乙烯膠乳微粒作為惰性載體。膠乳為人工合成的苯乙烯膠

27、乳微粒作為惰性載體。膠乳為人工合成的載體，因此其性能比生物來源的紅細胞穩(wěn)定，均一載體，因此其性能比生物來源的紅細胞穩(wěn)定，均一性好。但膠乳與蛋白質的結合能力以及凝集性能不性好。但膠乳與蛋白質的結合能力以及凝集性能不如紅細胞，因此作為間接凝集試驗，膠乳試驗的敏如紅細胞，因此作為間接凝集試驗，膠乳試驗的敏感度不及血凝試驗。感度不及血凝試驗。 膠乳凝集試驗膠乳凝集試驗方法：v傳統(tǒng)的膠乳凝集試驗分試管法與玻片法。v試管法先將受檢標本在試管中以緩沖液作倍比稀釋，然后加入致敏的膠乳試劑，反應后觀察膠乳凝集結果。v玻片法操作簡便，1滴受檢標本和1滴致敏的膠乳試劑在玻片上混勻后，連續(xù)搖動23min即可觀察結果。

28、出現大顆粒凝集的為陽性反應，保持均勻乳液狀為陰性反應。 抗鏈球菌溶血素抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）原理：原理： 膠乳凝集試驗原理相同，在受檢者膠乳凝集試驗原理相同，在受檢者血清中，加入溶血素血清中，加入溶血素“O”,O”,出現凝集顆粒，出現凝集顆粒，即為陽性。即為陽性。參考值：參考值： ASO250U/LASO250U/L臨床意義：臨床意義：1.ASO1.ASO測定對于診斷測定對于診斷A A族鏈球菌感染很有價值，其存在族鏈球菌感染很有價值，其存在及含量可反映感染的嚴重程度。及含量可反映感染的嚴重程度。2.2.風濕熱、急性腎小球腎炎、結節(jié)性紅斑、猩紅熱、風濕熱、急性腎小球腎炎、結節(jié)性紅斑、猩紅

29、熱、急性扁桃體炎等急性扁桃體炎等ASOASO明顯升高。明顯升高。3.3.少數肝炎、結締組織病、結核病及多發(fā)性骨髓瘤病少數肝炎、結締組織病、結核病及多發(fā)性骨髓瘤病人亦可使人亦可使ASOASO增高。增高。 4.4.當效價當效價250U/L250U/L時，才被認為有診斷價值。時，才被認為有診斷價值。 抗鏈球菌溶血素抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）類風濕因子（類風濕因子（rheumatoid factor,RF） 類風濕性關節(jié)炎（類風濕性關節(jié)炎（RA）是由自身抗體免是由自身抗體免疫復合物引起的自身免疫性疾病。疫復合物引起的自身免疫性疾病。 類風濕因子是由于感染因子（細菌、病類風濕因子是由于感染因子（細菌

30、、病毒等）引起體內產生的以變性毒等）引起體內產生的以變性IgG為抗原的為抗原的一種抗體，故又稱抗抗體。一種抗體，故又稱抗抗體。 原理：原理： 將變性將變性IgGIgG包被于聚苯乙烯膠乳顆粒上，這種包被于聚苯乙烯膠乳顆粒上，這種致敏膠乳在與待測血清中的致敏膠乳在與待測血清中的RFRF相遇時，即發(fā)生肉眼相遇時，即發(fā)生肉眼可見的凝集?？梢姷哪?。參考值：參考值： 正常人正常人1 1：2020稀釋血清為陰性。稀釋血清為陰性。 類風濕因子（類風濕因子（rheumatoid factor,RF） 臨床意義：臨床意義：1.1.約約90%90%類風濕性關節(jié)炎（類風濕性關節(jié)炎（RARA）患者的）患者的RFRF呈

31、陽呈陽性。性。 2.2.某些自身免疫病，如冷球蛋白血癥、進行性某些自身免疫病，如冷球蛋白血癥、進行性全身性硬化癥、干燥綜合征、全身性硬化癥、干燥綜合征、SLESLE等。等。 3.3.一些其他疾病如血管炎、一些其他疾病如血管炎、肝病肝病、慢性感染也、慢性感染也可出現可出現RFRF。 類風濕因子（類風濕因子（rheumatoid factor,RF） 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）原理：原理：v使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。免疫活性。 v使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標

32、抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性?；钚浴結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a物，產物的量與標本中受檢物質的量直變?yōu)橛猩a物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關接相關 。ELISA主要有以下幾種類型：主要有以下幾種類型：1.1.雙抗體夾心法測抗原（常用）雙抗體夾心法測抗原（常用）2.2.雙抗原夾心法測抗體雙抗原夾心法測抗體3.3.間接法測抗體（常用）間接法測抗體（常用）4.4.競爭法測抗原競

33、爭法測抗原5.5.競爭法測抗體競爭法測抗體6.6.捕獲包被法測抗體捕獲包被法測抗體7.7.親和素親和素- -生物素生物素 ELISAELISA法法包被特異性抗體包被特異性抗體加入待測樣品加入待測樣品加酶標特異性抗體加酶標特異性抗體底物顯色底物顯色洗滌孵育洗滌孵育雙抗體夾心法測抗原v待測抗原須有兩個可以與抗體結合的部位，其一端與包被于固相載體上的抗體結合，另一端與酶標記的特異性抗體結合。v此法適用于檢驗各種二價或二價以上的大分子抗原，如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。不能用于分子量小于5000的半抗原或小分子單價抗原的測定。雙抗原夾心法測抗體雙抗原夾心法測抗體v反應模式與雙抗體夾心法類

34、似。v用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。v此法中受檢標本不需稀釋，可直接用于測定。v乙肝標志物中HBsAb的檢測常采用本法。關鍵在于根據抗原結構的不同制備酶標抗原。 間接法測抗體間接法測抗體間接法是檢測抗體最常用的方法。原理：利用酶標記的抗體檢測已與固相結合的 受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟： （1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相 抗原，洗滌。 （2）加稀釋的受檢樣本，其中的特異抗體與固 相抗原結合，形成固相抗原抗體復合物，孵育洗滌。（3）加酶標抗體：與固相復合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地標記上酶，孵育洗滌。 （4）加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。

35、 間接法的特點間接法的特點v本法主要用于對病原體抗體的檢測而進行傳染本法主要用于對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。病的診斷。v間接法的優(yōu)點是只要變換包被抗原就可利用同間接法的優(yōu)點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗體檢測相應抗體。一酶標抗體檢測相應抗體。v間接法成功的關鍵在于抗原的純度。特別應注間接法成功的關鍵在于抗原的純度。特別應注意除去能與一般健康人血清發(fā)生反應的雜質。意除去能與一般健康人血清發(fā)生反應的雜質。若抗原中含有無關蛋白，也會因竟爭吸附而影若抗原中含有無關蛋白，也會因竟爭吸附而影響包被效果。響包被效果。競爭法測抗原競爭法測抗原 操作步驟操作步驟 ：（1）將特異抗體與固相載體連接

36、，形成固相抗）將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗 體洗滌。體洗滌。（2）待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的）待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的 混合溶液，使之與固相抗體反應，孵育洗混合溶液，使之與固相抗體反應，孵育洗 滌。滌。 （3）加底物顯色：參考管中由于結合的酶標抗原）加底物顯色：參考管中由于結合的酶標抗原 最多，故顏色最深。待測管顏色越淡，表示標最多，故顏色最深。待測管顏色越淡，表示標 本中抗原含量越多。參考管顏色深度與待測管本中抗原含量越多。參考管顏色深度與待測管 顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。競爭法測抗體競爭法測抗體v當抗原材料中的干擾

37、物質不易除去，或不易得當抗原材料中的干擾物質不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。體。v標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多，結合在固相上抗原結合。標本中抗體量越多，結合在固相上的酶標抗體愈少，因此陽性反應呈色淺于陰性的酶標抗體愈少，因此陽性反應呈色淺于陰性反應。反應。 捕獲包被法測抗體捕獲包被法測抗體v樣品中針對某些抗原的特異性樣品中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性常和特異性IgG同時存在，后者會干擾同時存在，后者會干擾IgM抗體的測定?？贵w的測定。因此測

38、定因此測定IgM抗本多用捕獲法?？贡径嘤貌东@法。v先將所有樣品先將所有樣品IgM（包括特異性（包括特異性IgM和非特異和非特異性性IgM）固定在固相上，在去除）固定在固相上，在去除IgG后再測定后再測定特異性特異性IgM。 操作步驟： （1）將抗）將抗IgM抗體抗體連接連接在固相載體上，形成固相抗在固相載體上，形成固相抗 IgM，洗滌。，洗滌。 （2）加入稀釋的待測標本：孵育后樣品中的）加入稀釋的待測標本：孵育后樣品中的IgM抗體被、抗體被、 固相抗體捕獲，洗滌。固相抗體捕獲，洗滌。 （3）加入特異性抗原試劑：其僅與固相上的特異性）加入特異性抗原試劑：其僅與固相上的特異性IgM 結合，洗滌。結

39、合，洗滌。 （4）加入針對抗原的酶標抗體：使之與結合在固相上）加入針對抗原的酶標抗體：使之與結合在固相上 的抗原反應結合，洗滌。的抗原反應結合，洗滌。 （5）加底物顯色：如有顏色顯示，則表示標本中存在、）加底物顯色：如有顏色顯示，則表示標本中存在、 特異性特異性IgM抗體，是為陽性反應抗體，是為陽性反應。 親和素親和素-生物素生物素-ELISA法法v親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結合。v生物素（biotin）又稱維生素H，存在于蛋黃中。可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產物。v親和素與生物素的結合，雖不屬免疫反應，但特異

40、性強，親和力大，形成一種極為穩(wěn)定的復合體。v把親和素和生物素與ELISA偶聯起來，就可大大提高ELISA的敏感度。 乙型肝炎血清學檢驗臨床意義乙型肝炎血清學檢驗臨床意義 乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒（乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒（HBVHBV）引起的、以肝臟炎性病變?yōu)橹鳎⒖梢鸲嘁鸬?、以肝臟炎性病變?yōu)橹?，并可引起多器官損害的一種疾病。乙肝廣泛流行于世界器官損害的一種疾病。乙肝廣泛流行于世界各國，主要侵犯兒童及青壯年，少數患者可各國，主要侵犯兒童及青壯年，少數患者可轉化為肝硬化或肝癌。轉化為肝硬化或肝癌。傳播途徑：傳播途徑：血液傳播、性接觸傳播和母嬰傳播血液傳播、性接觸傳播和母嬰傳播vHBV的抗

41、原有的抗原有3種：表面抗原（種：表面抗原（HBsAg）、核心抗）、核心抗原（原（HBcAg）和）和e抗原（抗原（HBeAg）。表面抗原大量）。表面抗原大量存在于感染者血液中，是存在于感染者血液中，是HBV感染以及檢測的主要感染以及檢測的主要標志。標志。v核心抗原是乙肝病毒核心顆粒的唯一結構蛋白。由核心抗原是乙肝病毒核心顆粒的唯一結構蛋白。由于它存在于于它存在于Dane顆粒核心結構表面，被表面抗原顆粒核心結構表面，被表面抗原覆蓋，故不易在血循環(huán)中檢出?？纱碳C體產生抗覆蓋，故不易在血循環(huán)中檢出。可刺激機體產生抗-HBc。ve抗原為可溶性蛋白質，在病理上認為是抗原為可溶性蛋白質，在病理上認為是HB

42、V復制復制以具有強感染性的一個指標?？挂跃哂袕姼腥拘缘囊粋€指標?？?HBe的出現，是預的出現，是預后良好的征象。后良好的征象。HBsAg抗抗-HBsHBeAg抗抗HBe抗抗-HBc臨床意義臨床意義過去和現在均未感染過去和現在均未感染HBV 曾感染曾感染HBV，急性感染恢復，急性感染恢復期期 過去和現在均已感染過過去和現在均已感染過HBV 預防注射疫苗預防注射疫苗 既往感染；急性既往感染；急性HBV感染恢感染恢復期復期 既往感染；急性既往感染；急性HBV感染已感染已恢復恢復 急性急性HBV感染；慢性感染；慢性HBsAg攜帶者攜帶者 HBsAg抗抗-HBsHBeAg抗抗HBe抗抗-HBc臨床意義臨

43、床意義急性急性HBV感染趨向恢復；慢性感染趨向恢復；慢性HBsAg 攜帶者攜帶者，傳染性弱；，傳染性弱；長期持續(xù)易長期持續(xù)易癌變癌變 急性或急性或慢性乙肝慢性乙肝，傳染性極強，傳染性極強 急性急性HBV感染早期，感染早期，HBsAg攜帶者攜帶者 急性急性HBV感染早期，傳染性強感染早期，傳染性強 急性感染中期急性感染中期 急性感染趨向恢復；慢性急性感染趨向恢復；慢性攜帶攜帶者者 急性感染趨向恢復急性感染趨向恢復 急性感染趨向恢復急性感染趨向恢復 艾滋病實驗室檢驗艾滋病實驗室檢驗 艾滋病是一種危害性極大的傳染病，由艾滋病是一種危害性極大的傳染病，由感染艾滋病病毒（感染艾滋病病毒（HIVHIV病毒

44、）引起。病毒）引起。HIVHIV是一是一種能攻擊人體免疫系統(tǒng)的病毒。它把人體免種能攻擊人體免疫系統(tǒng)的病毒。它把人體免疫系統(tǒng)中最重要的疫系統(tǒng)中最重要的T T淋巴細胞作為主要攻擊目淋巴細胞作為主要攻擊目標，大量破壞該細胞，使人體喪失免疫功能，標，大量破壞該細胞，使人體喪失免疫功能， HIVHIV在人體內的潛伏期平均為在人體內的潛伏期平均為8 89 9年年 。艾滋病從感染到發(fā)病的一般過程艾滋病從感染到發(fā)病的一般過程感染分期感染分期臨床分期臨床分期維持時間維持時間感染標志物感染標志物傳染性傳染性原發(fā)感染原發(fā)感染潛伏期潛伏期潛伏期潛伏期2-42-4周周 抗體陰性抗體陰性 (窗口期窗口期)傳染傳染危險性高

45、危險性高原發(fā)感染原發(fā)感染癥狀期癥狀期急性急性HIV感染感染1-21-2周周 傳染傳染危險性高危險性高慢性感染慢性感染潛伏期潛伏期無癥狀無癥狀HIV感染感染2 21515年年( (平均平均 8-10 8-10 年年) )抗體陽性抗體陽性有傳染性有傳染性臨床臨床發(fā)病期發(fā)病期艾滋病艾滋病0 03 3年年( (平均平均 1-21-2 年年) )抗體陽性抗體陽性抗原陽性抗原陽性傳染性強傳染性強檢驗標志物檢驗標志物檢驗目的檢驗目的檢檢 驗驗 方方 法法HIV(1+2) HIV(1+2) 抗體抗體篩查試驗篩查試驗金標法、硒標法金標法、硒標法 快速診斷試驗快速診斷試驗明膠顆粒凝集試驗明膠顆粒凝集試驗(PA)(

46、PA) 微孔板法微孔板法酶聯免疫試驗酶聯免疫試驗（ELISAELISA） 第三代：雙抗原夾心法第三代：雙抗原夾心法 第四代：增加檢測第四代：增加檢測P24P24抗原抗原確證試驗確證試驗免疫印跡法免疫印跡法(WB)(WB) 手工手工/ /儀器儀器HIV抗體篩查試驗抗體篩查試驗明膠顆粒凝集試驗明膠顆粒凝集試驗的操作和結果判斷的操作和結果判斷5 5 450/630nm450/630nm下測定下測定ODOD值值混勻，加蓋，混勻，加蓋，3737溫育溫育 洗板洗板3 3 加入底物加入底物第二次特異性結合第二次特異性結合4 4 加入終止液加入終止液1 1 加入樣品加入樣品 洗板洗板2 2 加入酶標記物加入酶

47、標記物 加蓋，加蓋，3737溫育溫育加蓋，加蓋，3737溫育溫育第一次特異性結合第一次特異性結合酶聯免疫分析酶聯免疫分析 ELISAELISA（雙抗原夾心、兩步法）（雙抗原夾心、兩步法）HIV抗體檢測結果處理規(guī)范抗體檢測結果處理規(guī)范檢測方法檢測方法檢測結果檢測結果檢驗報告檢驗報告處理處理篩查試驗篩查試驗陰性陰性HIVHIV抗體陰性抗體陰性陰性告知陰性告知陽性陽性HIVHIV抗體待復查抗體待復查上送確證上送確證確證試驗確證試驗陰性陰性HIVHIV抗體陰性（抗體陰性（- -）陰性告知陰性告知陽性陽性HIVHIV抗體陽性（抗體陽性（+ +）陽性告知，個案調查陽性告知，個案調查不確定不確定HIVHIV

48、抗體不確定（抗體不確定（）告知，告知，3 3個月后復查共個月后復查共2 2次次樣品初篩檢測初篩檢測陽性反應陰性反應篩查試劑復查復查原有試劑加另一種篩選試劑均陽性反應一陰一陽均陰性反應送確認實驗室確認報告陰性HIV抗體確證試驗抗體確證試驗 Western Blot 免疫印跡法免疫印跡法全自動免疫印跡儀全自動免疫印跡儀腫瘤標志物檢測的臨床應用腫瘤標志物檢測的臨床應用腫瘤標志物的定義腫瘤標志物的定義 腫瘤標志物腫瘤標志物（tumor marker，TM）是是指在腫瘤的發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細胞指在腫瘤的發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細胞本身所產生的或者是由機體對腫瘤細胞反應本身所產生的或者是由機體對腫瘤

49、細胞反應而產生的，反映腫瘤存在和生長的一類物質，而產生的，反映腫瘤存在和生長的一類物質，包括蛋白質、激素、酶（同工酶）、多胺等。包括蛋白質、激素、酶（同工酶）、多胺等?？稍谀[瘤患者血液或體液中檢測到腫瘤標志可在腫瘤患者血液或體液中檢測到腫瘤標志物。物。腫瘤標志物的分類腫瘤標志物的分類癌胚抗原類標志物癌胚抗原類標志物 糖類抗原標記物糖類抗原標記物酶類標志物酶類標志物激素類標志物激素類標志物蛋白類標志物蛋白類標志物胚胎抗原類標志物胚胎抗原類標志物1 1、甲胎蛋白、甲胎蛋白AFPAFP 胎兒發(fā)育早期，由肝臟和卵黃囊合成的胎兒發(fā)育早期，由肝臟和卵黃囊合成的一種血清糖蛋白，電泳時位于白蛋白和一種血清糖蛋

50、白，電泳時位于白蛋白和1 1球球蛋白之間，胎兒出生后不久即逐漸消失。成蛋白之間，胎兒出生后不久即逐漸消失。成人血清中含量甚微。人血清中含量甚微。 臨床意義臨床意義（1）原發(fā)性肝細胞癌患者血清中）原發(fā)性肝細胞癌患者血清中AFP濃度明顯升高，約濃度明顯升高，約77.1%的患者的患者AFP300ng/mL，但也有，但也有18%的病人的病人AFP并不并不升高。升高。（2）良性肝病，如病毒性肝炎、肝硬化患者）良性肝病，如病毒性肝炎、肝硬化患者AFP濃度有不同濃度有不同程度的升高，但其水平通常低于程度的升高，但其水平通常低于100ng/mL。 其升高原因主要是由于受損傷的肝細胞再生而形成幼稚其升高原因主要

51、是由于受損傷的肝細胞再生而形成幼稚化細胞，幼稚化的肝細胞具有產生化細胞，幼稚化的肝細胞具有產生AFP的能力。但隨著受損的能力。但隨著受損肝細胞的修復，肝細胞的修復，AFP逐漸恢復正常。逐漸恢復正常。（3）生殖腺胚胎性腫瘤患者血清中）生殖腺胚胎性腫瘤患者血清中AFP濃度可見升高。濃度可見升高。（4）婦女妊娠）婦女妊娠3個月后，血清個月后，血清AFP濃度開始升高，濃度開始升高，78個月時個月時達到高峰，一般在達到高峰，一般在400g/L以下，分娩后以下，分娩后3周恢復正常。若周恢復正常。若孕婦血清中孕婦血清中AFP異常升高，應考慮胎兒神經管缺損畸形的可異常升高，應考慮胎兒神經管缺損畸形的可能性。能

52、性。2 2、癌胚抗原、癌胚抗原CEACEA 是一種可溶性糖蛋白，胚胎期主要存在于胎兒是一種可溶性糖蛋白，胚胎期主要存在于胎兒的胃腸管、胰腺和肝臟。胃腸道惡性腫瘤時可見血的胃腸管、胰腺和肝臟。胃腸道惡性腫瘤時可見血清清CEACEA升高，在乳腺癌、肺癌及其他惡性腫瘤中也升高，在乳腺癌、肺癌及其他惡性腫瘤中也可出現表達，并分泌于體液中?？沙霈F表達，并分泌于體液中。 （1）血清）血清CEA升高主要見于結腸癌、直腸癌、胰腺癌、胃癌、升高主要見于結腸癌、直腸癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌，其他惡性腫瘤也有不同程度的陽性率。肝癌、肺癌、乳腺癌，其他惡性腫瘤也有不同程度的陽性率。（2）隨著臨床應用的發(fā)展

53、，）隨著臨床應用的發(fā)展，CEA變得越來越廣譜。主要用于變得越來越廣譜。主要用于連續(xù)的隨訪檢測，可用于惡性腫瘤手術后的療效觀察及預后連續(xù)的隨訪檢測，可用于惡性腫瘤手術后的療效觀察及預后判斷，也可用于對化療病人的療效觀察。判斷，也可用于對化療病人的療效觀察。（3）某些良性疾病，如直腸息肉、結腸炎、肝硬化、肝炎和）某些良性疾病，如直腸息肉、結腸炎、肝硬化、肝炎和肺部疾病也有不同程度的升高，但陽性率較低。肺部疾病也有不同程度的升高，但陽性率較低。（4）98%的非吸煙者的非吸煙者CEA5ng/mL 臨床意義臨床意義1、糖類抗原糖類抗原12-512-5（CA12-5CA12-5）v是卵巢癌和子宮內膜癌的腫

54、瘤標志物是卵巢癌和子宮內膜癌的腫瘤標志物v分子量為分子量為20萬的糖蛋白萬的糖蛋白v可被單克隆抗體可被單克隆抗體OC125所識別所識別v在卵巢腫瘤上皮和在卵巢腫瘤上皮和Mullerian副腎管來副腎管來 源的源的病理和正常組織中表達，其生物學功能不明。病理和正常組織中表達，其生物學功能不明。 （1）卵巢癌病人血清中）卵巢癌病人血清中CA125水平明顯升高。手術和化療后水平明顯升高。手術和化療后期水平很快下降。當復發(fā)時，在臨床確診前幾個月便可呈現期水平很快下降。當復發(fā)時，在臨床確診前幾個月便可呈現CA125增高，尤其卵巢癌轉移患者的血清增高，尤其卵巢癌轉移患者的血清CA125更明顯高更明顯高于正

55、常參考值。于正常參考值。（2）其他非卵巢惡性腫瘤也有一定陽性率，如乳腺癌）其他非卵巢惡性腫瘤也有一定陽性率，如乳腺癌40%，胰腺癌胰腺癌50%，胃癌，胃癌47%，肺癌，肺癌41.4%，結腸直腸癌，結腸直腸癌34.2%，其他婦科腫瘤其他婦科腫瘤43%。（3）非惡性腫瘤，如子宮內膜異位癥、盆腔炎、卵巢囊腫、）非惡性腫瘤，如子宮內膜異位癥、盆腔炎、卵巢囊腫、胰腺炎、肝炎、肝硬化等疾病也有不同程度升高，但陽性率胰腺炎、肝炎、肝硬化等疾病也有不同程度升高，但陽性率較低，診斷時應注意鑒別。較低，診斷時應注意鑒別。（4）在許多良性和惡性胸腹水中發(fā)現有）在許多良性和惡性胸腹水中發(fā)現有CA125升高，羊水中升高

56、，羊水中也能檢出較高濃度的也能檢出較高濃度的CA125。（5）早期妊娠的頭）早期妊娠的頭3個月內，也有個月內，也有CA125升高的可能。升高的可能。 臨床意義臨床意義2 2、 糖類抗原糖類抗原1515-3-3（- - CA15-3CA15-3是乳腺癌的最重要的特異性標志是乳腺癌的最重要的特異性標志物。物。30%-50%30%-50%的乳腺癌患者的的乳腺癌患者的CA15-3CA15-3明顯升高，明顯升高，是乳腺癌患者診斷和監(jiān)測術后復發(fā)、觀察療是乳腺癌患者診斷和監(jiān)測術后復發(fā)、觀察療效的最佳指標。效的最佳指標。（1）乳腺癌患者常有）乳腺癌患者常有CA15-3升高，但在乳腺癌的初升高，但在乳腺癌的初期

57、敏感性較低，約為期敏感性較低，約為60%，轉移性乳腺癌陽性率可，轉移性乳腺癌陽性率可達達80%。CA15-3可以作為原發(fā)性乳腺癌的輔助診斷可以作為原發(fā)性乳腺癌的輔助診斷指標，也可以作為手術后隨訪，監(jiān)測腫瘤復發(fā)、轉指標，也可以作為手術后隨訪，監(jiān)測腫瘤復發(fā)、轉移的指標。移的指標。（2）其他惡性腫瘤，如肺癌、腎癌、結腸癌、胰腺）其他惡性腫瘤，如肺癌、腎癌、結腸癌、胰腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、原發(fā)性肝癌等也有不同程癌、卵巢癌、子宮頸癌、原發(fā)性肝癌等也有不同程度的陽性率。度的陽性率。（3）肝臟、胃腸道、肺、乳腺、卵巢等非惡性腫瘤）肝臟、胃腸道、肺、乳腺、卵巢等非惡性腫瘤疾病，陽性率一般低于疾病，陽性率一般

58、低于10%。 臨床意義臨床意義3 3、糖類抗原、糖類抗原19-919-9（CA19-9CA19-9） CA19-9是胰腺、胃、膽囊和腸癌的標記物。是胰腺、胃、膽囊和腸癌的標記物。（1）胰腺癌、膽囊癌、膽管壺腹癌患者血清）胰腺癌、膽囊癌、膽管壺腹癌患者血清CA19-9水平明顯升高，尤其是胰腺癌晚期病人，血清水平明顯升高，尤其是胰腺癌晚期病人，血清CA19-9濃度可達濃度可達40萬萬U/mL，陽性率約為，陽性率約為74.9%，是重要的輔助診斷指標。是重要的輔助診斷指標。（2）胃癌陽性率約為）胃癌陽性率約為50%，結腸癌陽性率約為，結腸癌陽性率約為60%，肝癌陽性率約為肝癌陽性率約為64.6%。（3

59、）急性胰腺炎、膽囊炎、膽汁淤積性膽管炎、肝）急性胰腺炎、膽囊炎、膽汁淤積性膽管炎、肝硬化、肝炎等疾病，硬化、肝炎等疾病，CA19-9也有不同程度的升高，也有不同程度的升高，應注意鑒別。應注意鑒別。 臨床意義臨床意義酶類腫瘤標志物酶類腫瘤標志物前列腺特異性抗原（前列腺特異性抗原（PSAPSA）vPSA是前列腺的特異性標記物是前列腺的特異性標記物 屬于器官特異性抗原，不具備腫瘤特異性屬于器官特異性抗原，不具備腫瘤特異性v PSA屬于酶類腫瘤標記物，具有糜蛋白酶樣和胰蛋屬于酶類腫瘤標記物，具有糜蛋白酶樣和胰蛋 酶的活性酶的活性v PSA在正常男性含量小于在正常男性含量小于4 g/L 參考值：參考值：

60、 血清血清t-PSA4.0ug/L （ELISA） f-PSA0.2（1）PSA是前列腺癌標志物。隨著年齡的增大，血清是前列腺癌標志物。隨著年齡的增大，血清PSA會會逐漸增加。逐漸增加。（2）前列腺肥大、前列腺炎、腎脹和泌尿生殖系統(tǒng)的疾病患）前列腺肥大、前列腺炎、腎脹和泌尿生殖系統(tǒng)的疾病患者，也可見者，也可見t-PSA和和f-PSA水平輕度升高，必須結合其他檢水平輕度升高，必須結合其他檢查進行鑒別。查進行鑒別。（3）單獨使用）單獨使用t-PSA和和f-PSA升高來診斷前列腺癌時很難排除升高來診斷前列腺癌時很難排除前列腺肥大對前列腺癌診斷的影響，特別是當前列腺肥大對前列腺癌診斷的影響，特別是當t