DNA的粗提取和鑒定學(xué)案

1、DNA勺粗提取與鑒定素養(yǎng)目標(biāo)：1、說出DNA勺物理和化學(xué)性質(zhì)2、概述DNAffl提取和鑒定的原理(重點(diǎn))3、嘗試對(duì)動(dòng)物或植物組織的DN/ffl行粗提取并對(duì)其進(jìn)行鑒定。(重、難點(diǎn))讀教材填空一、提取DNA的思路及原理基本思路提取生物大分子的基本思路是選用一定的選用一定的物理或化學(xué)方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子。對(duì)丁DNA的粗提取而言，就是要利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除。實(shí)驗(yàn)原理分離原理：DNAft蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，利用這一特點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)柠}溶液就能使DNA充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者相反，以達(dá)到分離

2、的目的。(1) 提純?cè)恚篋NM溶丁，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則可溶丁灑精。 能水解蛋白質(zhì)，但對(duì)DN礎(chǔ)有影響。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60-80的高溫，而DNA在80以上才會(huì)變性。 能夠瓦解細(xì)胞膜，但對(duì)DNAS：有影響。(2) 鑒定原理：4-、沸水浴DN舟二苯胺>藍(lán)色。二、DNA的粗提取與鑒定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法步驟實(shí)驗(yàn)材料的選取：選用DNA含量相對(duì)較高的生物組織。(1) 破碎細(xì)胞，獲取含DNA勺濾液：動(dòng)物細(xì)胞的破碎一一以雞血為例：在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸僻水,同時(shí)用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可。植物細(xì)胞的破碎一一以洋蔥為例：先將洋蔥切碎，然后加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分地?cái)嚢韬脱心?過濾

3、后收集研磨液。(2) 去除萬案一r萬案一r"力殺二利用DNA0M、同濃度的溶液中溶解度的小同，通過控制NaCl溶液的濃度去除雜質(zhì)直接在濾液中加入嫩肉粉,反應(yīng)1015min,嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能夠分解蛋白質(zhì)將濾液放在60-75的包溫水浴箱中保溫1015min,注息嚴(yán)格控制溫度范圍(3) DNA的進(jìn)一步提純：利用DNA不溶丁這一原理，可從溶液中析出較純凈的DNA此時(shí)DNA勺狀態(tài)為白色絲狀物。DNA的鑒定：將呈白色絲狀物的DNA溶解丁5mL物質(zhì)的量濃度為2mol/L溶液中,再加入4mL的試劑，沸水中加熱5min,冷卻后觀察溶液的顏色，注意操作提示以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，每100mL血液中需要

4、加入3g檸檬酸鈉,防止血液。加入洗滌劑后，動(dòng)作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量的J1，不利丁后續(xù)步驟的操作。加入灑精和用玻璃棒攪拌時(shí)，動(dòng)作要輕緩，以免加劇DN原勺斷裂，導(dǎo)致DNM子不能形成。鑒定DNAffl的染色劑二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用,否則會(huì)影響鑒定的效果。課堂探究探討1：如何通過控制NaCl溶液的濃度使DN雌鹽溶液中溶解或析出？2mol/LNaCl除去不溶的雜質(zhì)-0.14mol/L析出DNA濾溶液中的雜質(zhì)-2mol/LNaCl溶解DNA探討2：DNAffi蛋白質(zhì)在灑精中的溶解性有何特點(diǎn)？根據(jù)該特點(diǎn)如何將DNAW蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離？DNM溶丁灑精，蛋白質(zhì)溶丁灑精探討3:可否選用哺乳動(dòng)物成熟紅細(xì)胞作

5、實(shí)驗(yàn)材料，為什么？不可以，哺乳動(dòng)物成熟紅細(xì)胞無細(xì)胞核和眾多細(xì)胞器，無DNA探討4:提取DNA寸，要加入洗滌劑和食鹽并充分研磨，作用分別是什么？探討5:為什么反復(fù)地溶解與析出DNA?知識(shí)升華1.DNAfi提取的原理溶解規(guī)律2mol/LNaCl溶液0.14mol/LNaCl溶液DNA溶解析出蛋白質(zhì)NaCl溶液濃度從2mol/L降低的過程中，蛋白質(zhì)溶解度逐漸增大部分發(fā)生鹽析沉淀溶解總結(jié) DNAW蛋白質(zhì)g他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同。在NaCl溶液濃度彳氐于0.14mol/L時(shí)，DNA勺溶解度隨NaCl溶液濃度的增加而逐漸降低；在0.14mol/L時(shí)，DNA容解度最小；當(dāng)NaCl溶液濃度

6、繼續(xù)增加時(shí)，DNA勺溶解度乂逐漸增大 選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使DNAfe分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者相反，以達(dá)到分離目的2.利用耐受性提取DNA項(xiàng)目DNA蛋白質(zhì)蛋白酶沒影響水解局溫80C以上才會(huì)變性6080C會(huì)變性洗滌劑沒影響瓦解細(xì)胞膜3.DNA勺粗提取與鑒定的實(shí)驗(yàn)過程步驟操作方法原理一、制備雞血細(xì)胞液取0.3g/mL的檸檬酸鈉溶液10mL,與100mL新鮮的雞血混勻，然后靜置一天或離心機(jī)離心約23min,除去上活液防止血液凝固，使血細(xì)胞與血漿分離二、提取細(xì)胞核物質(zhì)取20mL蒸僻水與510mL的雞血細(xì)胞液混合并充分?jǐn)嚢?，然后?4層紗布過濾，取濾液丁燒杯中使細(xì)胞過度吸水而破裂三、溶解DNA取2mo

7、l/L的NaCl溶液40mL與上述濾液混合后，用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌1min,然后過濾DNAS高濃度NaCl溶液中溶解度較大四、析出DNA并過濾在一走范圍內(nèi)DNA勺溶解度隨NaCl溶液濃度的降低而降低沿?zé)瓋?nèi)壁慢慢加入烝僻水并輕輕攪拌，至白色絲狀黏稠物不再增加時(shí)停止加水，然后用多層紗布過濾五、DNA的再溶解用鑲子火取紗布上的黏稠物放入20mL濃度為2mol/L的NaCl溶液中，攪拌至完全溶解，然后用物層紗布過濾，取其濾液放入小燒杯中DNAS高濃度NaCl溶液中溶解度較大六、提取較純凈的DNA取體積分?jǐn)?shù)為95%勺冷卻灑精溶液50mL,與濾液混合攪拌，待出現(xiàn)絲狀物時(shí)用玻璃棒將其卷起DNM溶丁灑精，

8、出現(xiàn)沉淀七、DNA的鑒定取兩支20mL的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液5mL,將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑，混合均勻后，將試管置丁沸水中加熱5min，等試管冷卻后，觀察并且比較兩支試管中溶液顏色的變化DNAS二苯胺（沸水浴）會(huì)被染成藍(lán)色實(shí)驗(yàn)過程中各操作的目的實(shí)驗(yàn)中兩次加入蒸僻水的目的不同在第二步中，目的是使雞血細(xì)胞吸水漲破，加蒸僻水后必須充分?jǐn)嚢?，不?yīng)少丁5min,使血細(xì)胞充分吸水漲破。在第四步中，目的是為了稀釋NaCl溶液，使DN礎(chǔ)漸析出。 實(shí)驗(yàn)中三次加入NaCl溶液的目的在第三步中，加入NaCl溶液后必須充分?jǐn)嚢瑁铀偃旧|(zhì)中DNA與蛋白質(zhì)的分離，使DNA0E分游離并溶解在NaCl溶液中。 在第五步中，加入NaCl溶液的目的是使DNA容解。4. 在第七步（即DN麻定環(huán)節(jié)）中，加入NaCl溶液的目的是溶解DNA實(shí)驗(yàn)中三次過濾的比較比較項(xiàng)目第一次過濾第二次過濾第三次過濾過濾前加入物質(zhì)蒸僻水NaCl蒸僻水加入物質(zhì)后NaCl溶液濃度（m