大腸菌群及大腸桿菌測定FDA與ISO對比

1、大腸菌群及大腸桿菌測定（FDA與ISO對比）錄入時間:2009/8/129:21:53來源：食品伙伴網(wǎng)大腸菌群的定義大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽抱桿菌。大腸菌群不是細菌學(xué)上的分類命名，而是根據(jù)衛(wèi)生學(xué)方面的要求，提出的與糞便污染有關(guān)的細菌，即作為食品、水體等是否受過人畜糞便污染的指示菌，這些細菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致。根據(jù)進一步的生化試驗，可將這群細菌再分為大腸艾希氏菌（俗稱大腸桿菌）、弗氏檸檬酸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和陰溝腸桿菌等。大腸桿菌的定義大腸桿菌（也稱大腸埃希氏菌），分類于腸桿菌科，歸屬于埃希氏菌屬。大腸桿菌指革蘭氏陰性無芽抱桿菌、乳糖發(fā)酵

2、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、IMViC試驗（靛基質(zhì)、MRV-P、檸檬酸鹽試驗）為+-或-+-的細困。與人類有關(guān)的大腸桿菌統(tǒng)稱為致瀉性大腸桿菌，包括五種：腸毒素性大腸桿菌（ETEC、致病性大腸桿菌（EPEC、出血性大腸桿菌（EHEC、侵襲性大腸桿菌（EIEC）、黏附性大腸桿菌（EAEC。衛(wèi)生學(xué)意義大腸菌群和大腸桿菌是評價衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)，作為食品中的糞便污染指標(biāo)。食品中檢出大腸菌群，表明該食品有糞便污染，既可能有腸道致病菌存在，因而也就有可能通過污染的食品引起腸道傳染病的流行。大腸菌群數(shù)的高低，表明了糞便污染的程度，也反映了對人體健康危害性的大小。大腸桿菌在外界存活時間與一些主要腸道致病菌接近，它的出現(xiàn)預(yù)示著某

3、些腸道病原菌的存在，因此該菌是國際上公認的衛(wèi)生監(jiān)測指示菌。近年來，有些國家在執(zhí)行HACCPt理中，將大腸桿菌檢測作為微生物污染狀況的監(jiān)測指標(biāo)和HACC殯施效果的評估指標(biāo)。大腸桿菌的生物學(xué)特性基本形態(tài):此菌為兩端鈍圓的短小桿菌，一般約0.5-0.8gm*1.0-3.0am,多單獨存在或成雙，但不呈長鏈排列。約50%勺菌株有周生鞭毛，但多數(shù)只有1-4根，一般不超過10根，故菌體動力弱。多數(shù)菌株有菌毛，有的有莢膜或微莢膜，不形成芽抱，對普通堿性染料著色良好，革蘭氏染色陰性。培養(yǎng)特性：大腸桿菌合成代謝能力強，在含無機鹽、鏤鹽、葡萄糖的普通培養(yǎng)基上生長良好。最適生長溫度為37C,在42-44C條件下仍能

4、生長，生長溫度范圍15-46C。大腸菌群及大腸桿菌測定MPNt檢驗流程（FDABAM1、檢樣50g+450ml稀釋液2、適當(dāng)十倍稀釋樣品3、選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液，每個稀釋度接種三管LST肉湯（每管9mlLST肉湯并加有導(dǎo)管），每管接種1mL在35c下，培養(yǎng)24+2h48+2h。4、（1）沒有產(chǎn)氣管-報告陰性（2）有產(chǎn)氣管：接種BGLB肉湯管-查MPNg報告結(jié)果（大腸菌群）接種EC肉湯在44.5±0.5（水浴培養(yǎng)）24+2h48+2h。-產(chǎn)氣管接種EM抨板（35C、1824h）,從EM抨板上挑取5個可疑菌轉(zhuǎn)接到PCAM面，進行革蘭氏染色、IMVC生化鑒定、接種LST復(fù)檢

5、產(chǎn)氣-查MPNg報告結(jié)果（大腸菌群）。大腸菌群測定一一MPhfe檢驗幾點說明MP湍索表：MPN檢索表只給了三個稀釋度，如改用不同的稀釋度，則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低或增加10倍。初發(fā)酵和證實試驗：1）兩步法進行了兩次乳糖發(fā)酵試驗。初發(fā)酵和證實實驗所用培養(yǎng)基不同，但都是為了證實培養(yǎng)物是否符合大腸菌群的定義，即“在37c分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣”。2）初發(fā)酵陽性管，不能肯定就是大腸菌群細菌，經(jīng)過證實試驗后，有時可能成為陰性。有數(shù)據(jù)表明,食品中大腸菌群檢驗步驟的符合率，初發(fā)酵與證實試驗相差較大。因此，在實際檢測工作中，證實試驗是必需的。產(chǎn)氣量與倒管：在乳糖發(fā)酵試驗工作中，經(jīng)?？梢钥吹皆诎l(fā)酵倒管內(nèi)極微少的氣泡（有時

6、比小米粒還?。?，有時可以遇到在初發(fā)酵時產(chǎn)酸或沿管壁有緩緩上浮的小氣泡。實驗表明，大腸菌群的產(chǎn)氣量，多者可以使發(fā)酵倒管全部充滿氣體，少者可以產(chǎn)生比小米粒還小的氣泡。如果對產(chǎn)酸但未產(chǎn)氣的乳糖發(fā)酵如有疑問時，可以用手輕輕打動試管，如有氣泡沿管壁上浮，即應(yīng)考慮可能有氣體產(chǎn)生，而應(yīng)作進一步試驗。大腸桿菌測定一一EM盟擇性分離鑒別EM抨板典型大腸桿菌菌落特征：中心黑色或紫紅色，有或無綠色金屬光澤大腸桿菌測定一一EM璉擇性分離鑒別EMB1一種弱選擇性培養(yǎng)基，一些球菌也可在該培養(yǎng)基上生長；l高壓滅菌可使得美藍還原從而使培養(yǎng)基的顏色呈不均一橘黃色，輕輕搖動培養(yǎng)基可以恢復(fù)原有的正常紫色，傾注平板前應(yīng)先搖勻；大腸桿菌在該培養(yǎng)基上并不一定總是呈現(xiàn)綠色的金屬光澤；該培養(yǎng)基受可見光易使其中的成分氧化，儲存及培養(yǎng)細菌時都應(yīng)在避光條件。大腸桿菌測定一一革蘭氏染色基本步驟：將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染液，染1min,水洗