ELISA中常見問題及解決方法

1、ELIS釁常見問題及解決方法ELISA式驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我公司將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。下面分析Elisa式驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法1選擇試劑選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。2加樣可能原因：a.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；b.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）；C.加完標(biāo)本

2、再加酶試劑時酶液濺出孔外。解決辦法：a.標(biāo)本為血清：最好將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合570T,放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8C冰箱中，若要貯存，則置于-20匕的低溫冰箱內(nèi)。b.加樣后及時放入孵箱。c.加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。d.如果采用人俄其他全自動加樣，最好選擇FAM或其他后處理儀器加酶試劑。e.標(biāo)本較多時，請分批操作。3孵育可能原因：a.孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底；b.孵育時間人為延長，

3、導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹底。解決辦法：a.貼封片或加蓋；b.按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。4洗板可能原因：a.采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。b.采用半自動洗板機(jī)洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。c.反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。解決辦法：a.保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后最好在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；b.合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。5顯色可能原因：a.顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；b.加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法：a.顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用；b.加樣時保持顯色劑不外流；c.A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。6終止可能原因：如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。7讀板如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸；盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才