2022年小鼠白細(xì)胞介素2IL-2試劑盒使用方法

1、小鼠白細(xì)胞介素2IL-2試劑盒使用方法檢測(cè)范圍： 96T30 ng/L -1200 ng/L使用目的：本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞介素2IL-2含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠白細(xì)胞介素2IL-2水平。用純化的小鼠白細(xì)胞介素2IL-2抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次參加白細(xì)胞介素2IL-2，再與HRP標(biāo)記的白細(xì)胞介素2IL-2抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細(xì)胞介素2IL-2呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450

2、nm波長下測(cè)定吸光度OD值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠白細(xì)胞介素2IL-2濃度。 試劑盒組成 130倍濃縮洗滌液20ml1瓶7終止液6ml1瓶2酶標(biāo)試劑6ml1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品2400ng/L0.5ml1瓶3酶標(biāo)包被板12孔8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml1瓶4樣品稀釋液6ml1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml1瓶11封板膜2張 6顯色劑B液6ml1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求 1標(biāo)本采集后盡早進(jìn)展提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)展，提取后應(yīng)盡快進(jìn)展實(shí)驗(yàn)。假設(shè)不能馬上進(jìn)展試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20保存，但應(yīng)防止反復(fù)凍融2不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的HRP活性。操作步驟1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：

3、本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照以下圖表在小試管中進(jìn)展稀釋。1200 ng/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的原倍標(biāo)準(zhǔn)品參加150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液600 ng/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品參加150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液300 ng/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品參加150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150 ng/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品參加150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液75 ng/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品參加150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2. 加樣：分別設(shè)空白孔空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作一樣、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50l，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測(cè)樣品10l

4、樣品最終稀釋度為5倍。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置37溫育30分鐘。 4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6. 加酶：每孔參加酶標(biāo)試劑50l，空白孔除外。 7. 溫育：操作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先參加顯色劑A50l，再參加顯色劑B50l，輕輕震蕩混勻，37避光顯色15分鐘.10. 終止：每孔加終止液50l，終止反響此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度OD值。

5、 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)展。操作程序總結(jié)：計(jì)算 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。 考前須知1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘前方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以防止試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)

6、，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)n倍后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)n5。5 封板膜只限一次性使用，以防止穿插污染。6底物請(qǐng)避光保存。7嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)展，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期1試劑盒保存：；2-8。2有效期：6個(gè)月內(nèi)容總結(jié)1小鼠白細(xì)胞介素2IL-2試劑盒使用方法檢測(cè)范圍： 96T30 ng/L -1