泡桐叢枝病植原體保存體系建立技術(shù)規(guī)程

1、泡桐叢枝病植原體保存體系建立技術(shù)規(guī) 程 編制說(shuō)明1、任務(wù)來(lái)源泡桐叢枝病植原體保存體系建立技術(shù)規(guī)程 ，由河南省 質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 下達(dá) 2016 年第二批河南省地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂 計(jì)劃的通知（豫質(zhì)監(jiān)標(biāo)發(fā) 2016 122 號(hào)文），列入 2016 年 第二批河南省地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂計(jì)劃，計(jì)劃項(xiàng)目序號(hào)是110 。2、工作簡(jiǎn)況泡桐叢枝病植原體保存體系建立技術(shù)規(guī)程 ，委托單位： 河南省林業(yè)廳科技處， 承擔(dān)單位： 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)， 河南省林業(yè) 科學(xué)研究院。 主要起草人： 范國(guó)強(qiáng)、 翟曉巧、 趙振利、 鄧敏捷、 董焱鵬、曹喜兵、李永生；參加起草人：馬向陽(yáng)、張變莉、馬 永亮、趙利新、牛蘇燕、劉玟杉。范國(guó)強(qiáng)全面負(fù)責(zé)技術(shù)規(guī)程

2、任 務(wù)的落實(shí)及關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題的解決， 翟曉巧和趙振利負(fù)責(zé)技術(shù)規(guī) 程的泡桐叢枝病植原體的培養(yǎng)和規(guī)程的撰寫。 鄧敏捷、董焱鵬、 曹喜兵、 李永生負(fù)責(zé)泡桐叢枝病植原體的鑒定。 馬向陽(yáng)、 張變 莉、馬永亮、 趙利新主要參與泡桐叢枝病植原體的培養(yǎng)。 牛蘇 燕、劉玟杉主要參與泡桐叢枝病植原體的保存工作。 主要實(shí)施 地點(diǎn)：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)泡桐研究所。泡桐是我國(guó)重要的速生用材樹(shù)種之一， 在改善我國(guó)生態(tài)環(huán) 境和提高人民生活水平等方面具有重要的作用。 然而， 由植原 體感染引起的泡桐叢枝病 ,能導(dǎo)致泡桐幼樹(shù)過(guò)早死亡，大樹(shù)生 長(zhǎng)緩慢、 蓄積量降低。 目前該病幾乎發(fā)生在我國(guó)所有的泡桐栽 培區(qū)。據(jù)報(bào)道， 由于泡桐叢枝病的危害

3、， 每年造成的直接經(jīng)濟(jì) 損失超過(guò)億元。 該病害不僅造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失， 而且也嚴(yán)重 影響人們種植泡桐的積極性。自土居養(yǎng)二（ 1967 ）發(fā)現(xiàn)泡桐叢枝病的病原菌 植原體 以來(lái)，國(guó)內(nèi)外科技工作者雖然對(duì)泡桐叢枝病發(fā)病的機(jī)制及防治 方法進(jìn)行了大量的研究工作， 并初步明確了引起該病病原菌的 傳播方式、發(fā)生途徑和發(fā)病過(guò)程中的生理生化變化及防治方 法，但由于泡桐植原體無(wú)法體外培養(yǎng)， 嚴(yán)重制約了泡桐叢枝病 的研究。 克服植原體不能體外培養(yǎng)的研究瓶頸， 打破常規(guī)， 創(chuàng) 新思路， 另辟蹊徑才有可能有實(shí)效的推動(dòng)泡桐叢枝病研究。河南農(nóng)業(yè)大學(xué)泡桐研究團(tuán)隊(duì)自 1994 年以來(lái)一直致力于泡桐叢枝 病的研究。在研究中發(fā)現(xiàn)由于

4、大田里患叢枝病泡桐樹(shù)體高大且 生長(zhǎng)狀態(tài)一致性差， 在患病機(jī)制和藥物防治研究中帶來(lái)很多不 變，影響實(shí)驗(yàn)的開(kāi)展。 在探索研究中發(fā)現(xiàn)建立泡桐叢枝病植株 的無(wú)菌快速培養(yǎng)體系， 通過(guò)植原體檢測(cè)， 確保培養(yǎng)的是含有泡 桐叢枝病植原體的組織培養(yǎng)苗。 利用培養(yǎng)生長(zhǎng)狀態(tài)一致的泡桐 叢枝病組織培養(yǎng)苗開(kāi)展各種研究， 取得的成效顯著， 研究成果 曾獲得 2010 年國(guó)家科技進(jìn)步二等獎(jiǎng)。 隨著現(xiàn)代分子技術(shù)的進(jìn) 一步發(fā)展，在泡桐 miRNA 、LncRNA 、CircRNA 、蛋白質(zhì)和次 生代謝物，并對(duì)相關(guān)基因進(jìn)行了克隆及功能驗(yàn)證中也正在發(fā)揮 重要的作用。植原體病害已經(jīng)在 1000 多種植物上被發(fā)現(xiàn)，將 泡桐叢枝病植原體

5、保存技術(shù)進(jìn)行規(guī)范話總結(jié)， 為泡桐叢枝病研 究和其他植原體病害研究都具有指導(dǎo)意義。3、編制原則本標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)我省泡桐叢枝病生產(chǎn)上發(fā)生嚴(yán)重和開(kāi)展泡桐 叢枝病研究的實(shí)際需要制定的。 其規(guī)范了泡桐叢枝病保存過(guò)程 中的技術(shù)操作， 在叢枝病植原體研究中具有很強(qiáng)的規(guī)范指導(dǎo)和 借鑒意義，有利于推動(dòng)危害我省的植原體病害在抗病機(jī)理和防 治藥物方面的進(jìn)一步深入研究。 本標(biāo)準(zhǔn)僅就泡桐植原體保存過(guò) 程中培養(yǎng)技術(shù)和鑒定技術(shù)提出了規(guī)定。 標(biāo)準(zhǔn)適用于河南省泡桐 叢枝病植原體的保存和研究。4、標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容本標(biāo)準(zhǔn)制定了泡桐叢枝病植原體苗組培快繁技術(shù)的術(shù)語(yǔ)和 定義、 泡桐叢枝病植原體的培養(yǎng)、 鑒定、 保存和檔案管理等內(nèi) 容。包括泡

6、桐叢枝病苗芽的誘導(dǎo)、根的誘導(dǎo)，繼代培養(yǎng)，植原 體的鑒定和檔案管理。泡桐叢枝病植原體的培養(yǎng)中芽的誘導(dǎo)與根的誘導(dǎo)程序是泡 桐研究團(tuán)隊(duì)經(jīng)過(guò)反復(fù)篩選和驗(yàn)證建立的高效組織培養(yǎng)繁殖體 系，經(jīng)過(guò)近十年的應(yīng)用， 該方法在泡桐叢枝病研究中發(fā)揮了重 要的作用。研究成果發(fā)表在多家國(guó)內(nèi)外研究期刊上。泡桐叢枝病苗植原體的鑒定采用的 16S rRNA 巢式 PCR 檢測(cè)檢測(cè)，該方法是當(dāng)前泡桐叢枝病植原體檢測(cè)最常用的方法，運(yùn)用該方法開(kāi)展的研究成果，得到國(guó)內(nèi)外同行的認(rèn)可。 泡桐叢枝病植原體的保存中泡桐叢枝病植原體苗的繼代培養(yǎng) 和鑒定方法也是經(jīng)過(guò)多年反復(fù)驗(yàn)證的，結(jié)果穩(wěn)定。5、采用國(guó)內(nèi)、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)情況目前泡桐叢枝病植原體保存還沒(méi)有明確的國(guó)際和國(guó)內(nèi)標(biāo) 準(zhǔn)。在泡桐植原體鑒定中采用了國(guó)內(nèi)外植原體研究中鑒定方 法。6、與有關(guān)現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān) 系本標(biāo)準(zhǔn)符合現(xiàn)行國(guó)家法律、法規(guī)之規(guī)定。目前還沒(méi)有強(qiáng)制 性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。7、重大分歧意