流式細(xì)胞儀原理及應(yīng)用(HIV)課件

1、第一頁，共五十三頁。 白細(xì)胞（CD45)淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞(CD14/15)粒細(xì)胞(CD15)B cell（CD19等）NK cell（CD16/56) T cell (CD3)嗜酸性粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞中性粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞Th cell(CD4)Tc cell(CD8)第二頁，共五十三頁。SHA- LF4N 13E for Jerel細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞;分泌(fnm)穿孔素、IFN、TNF等。特點：MHC-1類分子限制、直接接觸、反復(fù)殺傷自然殺傷細(xì)胞（NK)：抗體依賴(yli)細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用、淋巴因子介導(dǎo)細(xì)胞毒作用、抗體依賴的細(xì)胞(xbo)介導(dǎo)的細(xì)胞(xbo)毒作

2、用補體系統(tǒng)的活化（經(jīng)典、凝集素、替代途徑）。作用（溶胞作用、吞噬條理作用、趨化性、 炎癥反應(yīng)等）中和抗原：形成免疫復(fù)合物，被吞噬細(xì)胞清除（條理作用）、毒素中和作用、感染中和作用淋巴因子依賴的細(xì)胞毒作用第三頁，共五十三頁。 免疫應(yīng)答：細(xì)胞(xbo)免疫體液免疫Th細(xì)胞作用：Th1分泌IL-2、INF等，前者可誘導(dǎo)Th、Tc分裂增值； Th2分泌IL-4、IL-5,可使B細(xì)胞活化，產(chǎn)生抗體B細(xì)胞完全活化需要Th幫助 第四頁，共五十三頁。第五頁，共五十三頁。FACSCount流式細(xì)胞儀FACSCalibur流式細(xì)胞儀第六頁，共五十三頁。第七頁，共五十三頁。第八頁，共五十三頁。第九頁，共五十三頁。第十

3、頁，共五十三頁。第十一頁，共五十三頁。Injector Tip熒光信號及前向角、側(cè)向角散射光聚焦的激光光束鞘液第十二頁，共五十三頁。第十三頁，共五十三頁。檢測(jin c)信號 散射光信號FSC: 前向角散射光SSC: 側(cè)向(c xin)角散射光(90度散射光) 熒光信號熒光染料光學(xué)濾片第十四頁，共五十三頁。檢測(jin c)信號第十五頁，共五十三頁。FALS SensorLaser前向角散射光信號(xnho) 第十六頁，共五十三頁。前向角散射光信號(xnho)第十七頁，共五十三頁。第十八頁，共五十三頁。FALS Sensor90LS SensorLaser側(cè)向(c xin)角散射光信號第十九

4、頁，共五十三頁。側(cè)向(c xin)角散射光信號第二十頁，共五十三頁。第二十一頁，共五十三頁。Right Angle Light Detector Cell ComplexitySSCForward Light Detector Cell Surface Area FSCIncident Light Source第二十二頁，共五十三頁。第二十三頁，共五十三頁。第二十四頁，共五十三頁。第二十五頁，共五十三頁。460 500 540460 500 540460 500 540 長通 短通 帶通第二十六頁，共五十三頁。第二十七頁，共五十三頁。第二十八頁，共五十三頁。第二十九頁，共五十三頁。第三十頁，共

5、五十三頁。第三十一頁，共五十三頁。第三十二頁，共五十三頁。Wavelength (nm)40045050055060065070010008006004002000PEFITCPerCP750第三十三頁，共五十三頁。650nm700nmFL3650 and Above500nm600nmFL1530/30FL2585/42Relative IntensityFITCPEPerCPWavelength (nm)550nm第三十四頁，共五十三頁。第三十五頁，共五十三頁。單平臺單平臺(pngti)絕對計數(shù)絕對計數(shù)管中預(yù)先管中預(yù)先(yxin)加有準(zhǔn)確定量的加有準(zhǔn)確定量的Beads流式細(xì)胞儀獲取數(shù)據(jù)后，

6、由各目標(biāo)群的含量，可流式細(xì)胞儀獲取數(shù)據(jù)后，由各目標(biāo)群的含量，可以計算出相對含量以計算出相對含量%由各目標(biāo)群與由各目標(biāo)群與Beads的相對量計算，得到該細(xì)胞的相對量計算，得到該細(xì)胞群的絕對含量群的絕對含量計算公式：計算公式： 細(xì)胞獲取數(shù)細(xì)胞獲取數(shù)Beads總量總量細(xì)胞細(xì)胞/ L= Beads獲取數(shù)獲取數(shù) 樣本量樣本量注：注：Beads總量見總量見TruCOUNT管外包裝管外包裝MultiSET系統(tǒng)中，樣本量為系統(tǒng)中，樣本量為50 L第三十六頁，共五十三頁。單平臺絕對單平臺絕對(judu)計數(shù)計數(shù)使用使用(shyng)TriTEST或或MultiTEST試劑，在試劑，在TruCOUNT管中完成全血

7、的淋巴細(xì)胞絕對計數(shù)管中完成全血的淋巴細(xì)胞絕對計數(shù)TruCOUNT管中預(yù)先加有準(zhǔn)確定量的管中預(yù)先加有準(zhǔn)確定量的Beads，每批，每批TruCOUNT管的管的Beads含量一致含量一致由各目標(biāo)群與由各目標(biāo)群與Beads的相對量計算，得到該細(xì)胞群的的相對量計算，得到該細(xì)胞群的絕對含量絕對含量使用直接熒光標(biāo)記抗體組合，一步處理外周血使用直接熒光標(biāo)記抗體組合，一步處理外周血使用免洗技術(shù)，溶血后直接上機檢測標(biāo)本使用免洗技術(shù)，溶血后直接上機檢測標(biāo)本操作簡便，省時省力，計數(shù)結(jié)果重復(fù)性好操作簡便，省時省力，計數(shù)結(jié)果重復(fù)性好第三十七頁，共五十三頁。淋巴細(xì)胞分析淋巴細(xì)胞分析(fnx)使用使用(shyng)特異的單克

8、隆抗體，進(jìn)行多色分析，同時特異的單克隆抗體，進(jìn)行多色分析，同時分析淋巴細(xì)胞上多種抗原的表達(dá)，可以將淋巴細(xì)胞分析淋巴細(xì)胞上多種抗原的表達(dá)，可以將淋巴細(xì)胞亞群區(qū)分開，進(jìn)行定量分析亞群區(qū)分開，進(jìn)行定量分析淋巴細(xì)胞分析淋巴細(xì)胞分析TriTEST：三色試劑：三色試劑CD4/CD8/CD3，CD3/CD4/CD45MultiTEST ：四色試劑：四色試劑CD3/CD8/CD45/CD4TruCOUNT：單平臺絕對計數(shù)管：單平臺絕對計數(shù)管報告報告Th,Ts,Th/Ts百分含量百分含量%與絕對含量與絕對含量cells/uL第三十八頁，共五十三頁。TriTEST CD4/CD8/CD3T Lymph Event

9、sCD3+CD4+ %T LymphCD3+CD8+ %T LymphCD3+ CD4+CD8+%T LymphT H/S RatioBead EventsCD3+ Abs CntCD3+CD4+ Abs CntCD3+CD8+ Abs CntCD3+CD4+CD8+ Abs Cnt第三十九頁，共五十三頁。第四十頁，共五十三頁。MultiTEST CD3/CD15+56/CD45/CD19第四十一頁，共五十三頁。第四十二頁，共五十三頁。FSC或SSC沒有通過：原因：1.由于儀器的管路沒有清洗干凈2.使用的鞘液雜質(zhì)太多(換鞘液）BD公司專用(zhunyng)鞘液3.校準(zhǔn)品失效4.儀器故障措施：1

10、. 用蒸餾水高速運行儀器10分鐘30分鐘2. 過濾鞘液3. 使用新的校準(zhǔn)品4. 致電BD工程師第四十三頁，共五十三頁。第四十四頁，共五十三頁。第四十五頁，共五十三頁。第四十六頁，共五十三頁。第四十七頁，共五十三頁。第四十八頁，共五十三頁。第四十九頁，共五十三頁。第五十頁，共五十三頁。聯(lián)系方式技術(shù)支持：趙陽陽郵箱(yuxing)：sunny_電話件工程師：李晨電話國技術(shù)維修服務(wù)電話：4008199900-2第五十一頁，共五十三頁。第五十二頁，共五十三頁。流式細(xì)胞儀原理及應(yīng)用(HIV)內(nèi)容(nirng)總結(jié)碧迪醫(yī)療器械（上海）有限公司。在激光束正前方的檢測器, 為前向散射光檢測器。與激光束垂直方向的檢測器為側(cè)向檢測器, 也稱為(