酵母RNA的分離及組分鑒定_第1頁(yè)
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1、酵母核糖核酸的分離及組分鑒定一、目的：了解核酸的組分，并掌握鑒定核酸組分的方法。二、原理：酵母核酸中RNA含量較多。RNA可溶于堿性溶液，在 堿提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀， 由此即得到RNA的粗制品。 核糖核酸含有核糖、嘌呤堿、嘧啶堿和磷酸各組分。加硫酸煮沸可使其水解，從水解液中可以測(cè)出上述組分的存在。三、器材四、試劑和材料 將2mL 10三氯化鐵溶液（用FeCl3·6H2O配制）加入 到400 mL濃鹽酸中。 9苔黑酚乙醇溶液 10 mL ：溶解6g苔黑酚于100 mL 95乙醇中（可在冰箱中保存1個(gè)月）。10定磷試劑 50 mL ：（1）17硫酸溶液 將17

2、mL濃硫酸（比重1.84）緩緩加入到83 mL水中。（2）2.5鉬酸銨溶液 將2.5g鉬酸銨溶于100 mL水中。（3）10抗壞血酸溶液10g 抗壞血酸溶于100 mL水中，貯棕色瓶保存。溶液呈淡黃色時(shí)可用，如呈深黃或棕色則失效，需純化抗壞血酸。臨用時(shí)將上述3種溶液與水按如下比例混合。17硫酸溶液2.5鉬酸銨溶液10抗壞血酸溶液水=1112（VV）。11酵母粉 200 g五、操作將15g酵母懸浮于90 mL 0.04 molL氫氧化鈉溶液 中，并在乳缽中研磨均勻。將懸浮液轉(zhuǎn)移至150毫升錐形瓶 中。在沸水浴上加熱30分鐘后，冷卻。離心（3000 rmin）15分鐘，將上清液緩緩傾入30 mL酸

3、性乙醇溶液中。注意要一邊攪拌一邊緩緩傾入。待核糖核酸沉淀完全后，離心（3000 rmin）3分鐘。棄去清液。用95乙醇洗滌沉淀兩次，乙醚洗滌沉淀一次后，再用乙醚將沉淀轉(zhuǎn)移至布氏漏斗中抽濾。沉淀可在空氣中干燥。取200 mg提取的核酸，加入1.5 molL硫酸溶液10 mL，在沸水浴中加熱10分鐘制成水解液并進(jìn)行組分的鑒定。1嘌呤堿 取水解液1mL加入過量濃氨水，然后加入約1mL0.1molL硝酸銀溶液，觀察有無嘌呤堿的銀化合物沉淀。2核糖 取1支試管加入水解液1mL、三氯化鐵濃鹽 酸溶液2 mL和苔黑酚乙醇溶液0.2mL。放沸水浴中10分鐘。注意溶液是否變成綠色，說明核糖的存在。3磷酸取 1支試管，加入水解液1mL和定磷試劑1mL。在水浴中加熱，觀察溶液是否變成藍(lán)色

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