JIS_Z_2801中文

1、JIS_Z_2801：2000_Antimicrobial_products_-_Test_for_antimicrobial概 要本規(guī)格是在工業(yè)標準化的基礎上，經過日本工業(yè)標準調查會的審查，由通商產業(yè)大臣制定的日本工業(yè)規(guī)格。日本工業(yè)標準-抗菌加工產品-抗菌試驗方法，抗菌效果序文：與生活相關的新功能加工產品座談會記錄：平成10年12月在所謂的抗菌加工指示書上表示，本規(guī)格是為了對抗菌加工產品抗菌效果的評價方法規(guī)范化而制定的日本工業(yè)規(guī)格。但是，本規(guī)格只是對抗菌加工產品及其重要的抗菌效果及試驗方法做的規(guī)定，對其安全性，抗菌效果的持續(xù)性等等請參照“抗菌加工產品指示書”。1、試用范圍本規(guī)格是針對抗菌加工

2、產品(含中間產品)表面細菌的抗菌性試驗方法及抗菌效果的規(guī)定。2、參考文件下列標準和條款通過本標準的引用成為本標準，版本更新的標準適用本標準。JIS K0950 塑料殺菌碟JIS K0970 按鈕式液體用微量體積計JIS K3800 二級的生物安全裝置JIS K8101 乙醇（99.5）（試劑）JIS K8150 鹽酸JIS K8180 鹽酸（試劑）JIS K8263 瓊脂（試劑）JIS K8576 氫氧化鈉（試劑）JIS K9007 磷酸二氫鉀JIS K9017 磷酸二鉀JIS K9012紡織產品的抗菌性實驗方法JLS R3505 玻璃材質的體積計3、定義本標準使用了如下定義和術語A）抗菌 抑

3、制產品表面細菌繁殖B）殺菌 抗菌的最終效果Page 1 / Total 8JIS_Z_2801：2000_Antimicrobial_products_-_Test_for_antimicrobialC）抗菌產品 進行抗菌加工的產品D）抗菌活性值 加工產品和未加工產品進行細菌接種培養(yǎng)后的細菌數進行對比后的差值參考 JIS L1902 抗菌活性值評估與判定E）抗菌效果 從抗菌活性值判斷抗菌加工產品的效果4、抗菌效果抗菌加工產品的抗菌效果，根據本規(guī)格的試驗方法得出，抗菌活性值為2.0以上。另外，根據當事人之間的協(xié)定，2.0上下的數值均可以。5、試驗方法5.1 纖維產品的試驗方法 紡織品的試驗方法，

4、同JIS L1902的規(guī)定8（定量試驗）5.2 塑料制品等的試驗方法本試驗方法適用于塑料制品，金屬制品，陶瓷制品等纖維制品以外的制品。根據制品的用途，形狀等紡織品的試驗方法5.1測試方法也可以用。5.2.1 試驗用的細菌 試驗用的細菌種類，根據如下所示，進行各項試驗A)黃色葡萄球菌B)大腸菌使用菌種如表1所示。使用表1所示保存部門以外分售的菌株的情況下，分售部門為國際微生物株保存聯盟（WFCC:WORLD FEDERATION OF CULTURE COLLECTION）或者日本微生物株保存聯盟（JSCC:JAPAN SOCIETY OF CULTURE COLLECTION）加盟的部門，并且

5、和表1同一系列的菌株。表1 試驗用細菌的菌株細菌的種類菌株的保存號碼保存菌株的部門黃色葡萄球菌ATCC6538PFDA209PIFO12732美國菌種收藏協(xié)會食物和藥劑管理部門發(fā)酵研究所大腸桿菌ATCC8739IFO3972美國菌種收藏協(xié)會發(fā)酵研究所5.2.2 藥品、材料及器具本規(guī)格所試用的藥品，材料及器具沒有特別的規(guī)定，如下所示均可乙醇（C2H5OH） JIS K8101規(guī)定的1級以上的物品濃縮牛肉 微生物試驗用的物品蛋白胨 微生物試驗用的物品氯化鈉（NaCl） JIS K8150規(guī)定的特級物品精制水 適合第13修正日本藥局方的基準的物品Page 2 / Total 8JIS_Z_2801：

6、2000_Antimicrobial_products_-_Test_for_antimicrobial瓊脂 JIS K8263規(guī)定的特級以上的物品酵母膏 微生物試驗用的物品胰化蛋白胨 微生物試驗用的物品葡萄糖 微生物試驗用的物品酪素胨 微生物試驗用的物品大豆胨 微生物試驗用的物品蛋黃素非離子表面活性劑磷酸二氫鉀磷酸二鉀氫氧化鈉鹽酸棉花塞白金圈 尖端大約一個4mm的環(huán)點消毒器 使保持溫度在160至180高壓滅菌器 能保持120和103KPa 的壓力安全裝置 性能按照或等價于JIS K 3800凈化臺吸管 精確度能達到或等價于JIS K 0970或JIS R 3505A 級培養(yǎng)器 保持溫度

7、77;1陪替氏培養(yǎng)皿 內徑90mm的玻璃器皿或是按JIS K 0950中指定規(guī)定規(guī)格NO.90A/90B兜包袋 微生物測試兜包 微生物測試薄膜 不能影響微生物生長和吸水、厚度不定，但可以粘著使用。5.2.3 殺菌方法A）干熱殺菌將殺菌對象放入160180的干熱殺菌器，保持3060分鐘（1）。注1干熱殺菌完成后，殺菌的綿塞，包裝物等被水浸濕時，器具不可再用。B）高壓蒸汽殺菌將水倒入高壓殺菌器，把殺菌物放在鐵絲網上，蓋上高壓殺菌器的蓋子，加熱，溫度達到121（壓力相當103KPa）后保持1520分鐘。加熱停止，自然冷卻到100以下后，打Page 3 / Total 8JIS_Z_2801：2000

8、_Antimicrobial_products_-_Test_for_antimicrobial開排氣，排去蒸汽，打開蓋子，取出殺菌后的物品，必要的情況下，用干凈的鉗子夾到安全的櫥柜內冷卻。高壓殺菌器要防止受到污染，加工藥劑的污染，為了保持干凈，有必要的情況下可以放到中性洗劑中洗凈，再用水充分清洗。C）火焰殺菌將殺菌物放到氣體或者酒精的火焰中，如果是使用試管的話，放置2-3秒。D）準備測試器具試驗試管、燒瓶等玻璃用具，用強堿或者中性洗劑仔細清洗，再用水充分清洗后干燥，加熱殺菌，或者高壓蒸汽殺菌。5.2.4 其它培養(yǎng)基培養(yǎng)基等使用如下所示組合。另外，如果是同一組合的話，可以使用市場上銷售的產品。

9、a）細菌懸濁液用營養(yǎng)肉湯準備精制水或者離子交換水1000ml，肉的提煉物3.0g，蛋白胨10.0g，氯化鈉5.0g，放入燒瓶里混合，充分溶解后，用氫氧化鈉或者鹽酸溶液進行調整PH值，使PH值在7.07.2之間 (25)，必要的情況下，可以注入試管內，塞上綿栓，進行高壓蒸汽殺菌。調至完成后，不馬上使用的放到5-10的溫度下保存。不能使用調至超過一個月以上的細菌懸濁液用營養(yǎng)肉湯。b)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基準備精制水或者離子交換水1000ml，肉的提煉物5.0g，蛋白胨10.0g，氯化鈉5.0g，瓊脂粉15.0g，放入燒瓶里混合，放到沸騰的水浴中加熱至全部溶解后，用氫氧化鈉或者鹽酸溶液進行調整PH值，使PH

10、值在7.07.2之間(25)，塞上綿栓，進行高壓蒸汽殺菌。調至完成后，不馬上使用的放到5-10的溫度下保存。不能使用調至超過一個月以上的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。c) 平板計數瓊脂/標準瓊脂培養(yǎng)基準備精制水或者離子交換水1000ml，酵母提煉物2.5g，蛋白胨5.0g,葡萄糖1.0g，瓊脂粉15.0g，放入燒瓶里混合，放到沸騰的水浴中加熱至全部溶解后，用氫氧化鈉或者鹽酸溶液進行調整PH值，使PH值在7.07.2之間(25)，塞上綿栓，進行高壓蒸汽殺菌。調至完成后，不馬上使用的放到5-10的溫度下保存。不能使用調至超過一個月以上的標準瓊脂培養(yǎng)基。d)斜面培養(yǎng)基重新把溶解后的b)的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基6-10ml

11、注入試管內，塞上綿栓高壓蒸汽殺菌。殺菌完成后，把試管放在干凈的室內保持15°傾斜，讓試管內的物質凝固。調至后，不馬上使用的放到5-10的溫度下保存。沒有加入濃縮水溶解的，先溶解，等凝固再使用。不能使用調至超過一個月以上的斜面培養(yǎng)基。e) SCDLP 肉湯準備精制水或者離子交換水1000ml，酪素胨17.0g，大豆胨3.0g,氯化鈉5.0g，磷酸氫氧二化鈉2.5g，葡萄糖2.5g，卵磷脂1.0g，放入燒瓶內混合，充分溶解后，添加非離子表面活性劑7.0g并溶解。用氫氧化鈉或者鹽酸溶液進行調整PH值，使PH值在7.07.2Page 4 / Total 8JIS_Z_2801：2000_An

12、timicrobial_products_-_Test_for_antimicrobial之間(25)，必要的情況下，注入試管或者三角錐瓶中，塞上綿栓進行高壓蒸汽殺菌。調制后，不馬上使用的放到5-10的溫度下保存。不可使用調至超過一個月的SCDLP（液體培養(yǎng)基）。f)磷酸緩沖液準備磷酸二氫鉀34.0g放到燒瓶內，添加精制水或者離子交換水500ml進行混合，充分溶解后，用氫氧化鈉或者鹽酸溶液進行調整PH值，使PH值在7.07.2之間(25)。進而，添加精制水或者離子交換水使之達到1000ml。必要的情況下，注入試管或者三角錐瓶中，塞上綿栓進行高壓蒸汽殺菌。不可使用調至超過一個月的磷酸緩沖液培養(yǎng)基

13、。g) 磷酸鹽緩沖生理鹽水溶液用生理鹽水（0.85%氯化鈉溶液）800倍的量稀釋磷酸溶液，必要的情況下，注入試管或者三角錐瓶中，塞上綿栓進行高壓蒸汽殺菌。不可使用調至超過一個月的磷酸鹽緩沖液。5.2.5 菌種準備移植無菌的測試菌種，有必要時使用安全裝置。一方面持斜面培養(yǎng)基和儲存的菌種準備移植，另一方面持白金圈的手把，用這只手拔出棉塞，然后用火焰對測試管口和白金圈進行消毒，用白金圈的頂端粘濃縮水到新的斜面培養(yǎng)基上并冷卻它，用白金圈從培養(yǎng)基表面挖部分菌種并鋪平在新的斜面培養(yǎng)基上，鋪成條狀。并對管口用火焰進行再次消毒，塞住棉塞保持原狀。消毒白金圈，在35+/-1下接種培養(yǎng)24-48小時，后儲存在5-

14、10環(huán)境下，一個月內進行移植，培養(yǎng)基的的轉移不能超過10次，從最初的菌種管理部門獲得計算。此外，當最后一次移植起超過一個月或是更多，以下移植不能被使用。圖1 細菌移轉備注2：如圖1所示，用白金圈的尖端插入濃縮水中，后分散菌種，使用白金圈拉一條斜直線到上部，再次插入白金圈到濃縮水中拉Z字形到上部。備注：菌種的保存符合相關協(xié)會規(guī)定。菌種獲取的機構必須是國際菌種保藏中心（WFCC）的成員或日本菌種保藏協(xié)會（JSCC）的成員。5.2.6測試菌種無菌處理，注意器械、人員、工作環(huán)境的無菌處理，必要的情況下使用無菌箱。A）細菌培養(yǎng)使用白金圈從原菌種移植到斜面培養(yǎng)基，在35+/-1培養(yǎng)16-24小時，然后從此

15、接Page 5 / Total 8JIS_Z_2801：2000_Antimicrobial_products_-_Test_for_antimicrobial種體使用白金圈接種到另一個斜面培養(yǎng)基，在35+/-1下培養(yǎng)16-20小時。B）準備測試片把被測試片切成標準5cm2厚度（3）為1cm的正方形，準備6片沒有處理的測試片（5）和3片抗菌測試片（4），如果未處理過的測試片不好準備，可以使用5.2.2的薄膜替代，避免測試片間的相互污染，盡量從產品本身切取測試片，如因產品形狀問題不能準備，可以采用相同的加工工藝方法生成測試片。備注3 如果被測試產品測試片不好準備，測試片尺寸沒有特別規(guī)定，只要能被

16、薄膜覆蓋4001600mm2即可。備注4 測試片從沒有處理過和產品中切除。備注5 6個未處理的測試片中，使用3個測試片接種后馬上測試活性細胞數值，另外3個計算接種24小時后的活細胞數。C） 測試片清洗用紗布或脫脂棉粘上酒精擦拭2-3次，充分干燥。如果經過處理后測試表面變軟、表層分開，如果影響實驗結果，樣片清洗會導致軟化、表面涂層溶解及溶出，應該避免清洗，或用沒有清洗的測試片，也可用其它適合的方式清潔。D）測試接種體準備用精制水稀釋細菌懸濁液用營養(yǎng)肉湯，調整PH值為6.87.2之間，用高壓蒸汽殺菌，使用量為1/500NB（營養(yǎng)肉湯）取約1/500量的預培養(yǎng)菌種在平面均勻疏散，并在顯微鏡下觀測數量

17、。或者用其它方法，適當稀釋1/500的營養(yǎng)肉湯讓細菌數量是2.5*105細胞每毫升，使用這種溶液當做接種體。如果接種體沒有馬上使用，在0保存并在4小時內使用。E）測試接種體的接種在接種過程中，將各個試驗片分別放入滅菌的平皿中，實驗測試面朝上（6）。然后將0.4 毫升的試驗菌液滴到每個試驗片上（7），再用薄膜（8）覆蓋，壓平以使菌液散開然后蓋上蓋子，注意不能讓試菌液溢出薄膜。如圖2圖2 滴接種體到測試表面并用薄膜履蓋備注6 測試表面是指抗菌產品表面，不能用橫截面。備注7 測試片接種體的量根據測試接種表面的面積不同分開使用不同的比率接種體，即Page 6 / Total 8JIS_Z_2801：2

18、000_Antimicrobial_products_-_Test_for_antimicrobial使測試片是標準片， 測試片很濕,像陶瓷,瓷磚, 瓷釉, s玻璃,也許少許傾斜, 這個接種體就會溢出薄膜。在這種情況下，接種體的量就可以減少到1/4的標準量。如果接種體被減少，被接種在每個測試片上的細胞數量為1.0-4.0*105類似于標準的測試片。這種情況測試接種體量不能按照D）的規(guī)定，但是可以從被接種體的接種量計算。備注8 薄膜的標準尺寸為正方形40 mm ±2 mm。如果測試片不是標準的尺寸，調整使薄膜能覆蓋到測試片內的2.5mm。不行，調整薄膜的尺寸不小400mm2 。再次，因

19、測試產品的不平整形狀等問題不能很好讓薄膜吸附在上面，如因測試產品會親水或吸水問題這個過程可以考慮不用薄膜。f)測試片的接種體培養(yǎng)三個未處理的測試片和三個抗菌測試片在無菌器皿中進行24小時 ±1小時的接種體培養(yǎng)，溫度為35 ±1C相對溫度為不少于90%下進行。參考信息：抗菌產品的抗菌有效性從抗菌產品在一定的測試條件下測試中獲得的抗菌活性值來評估，但是特定條件溫度也要考慮抗菌產品的實際使用環(huán)境條件。g) 菌洗液洗脫（9）1) 三個未經過處理的測試片在接種接種體后馬上用菌洗液洗脫，用薄膜蓋住并用已滅菌的鑷子把測試片放置于已滅菌的兜帶中，注意不要讓接種體溢出，用吸管加入10ml的S

20、CDLP營養(yǎng)肉湯，用手或抽取器充分按摩履蓋物和測試片，立刻著手計算在洗脫液中的活細胞數量。2）接種體培養(yǎng)后的測試片同1）的方法進行洗脫，并計算出活細胞數量。備注9 洗出來的細菌，如果有其它更好的方法也可以使用，如果因為產品特性或是尺寸等原因用10ml的SCKLP肉湯不能洗脫，可以增加洗脫量。h) 瓊脂平皿培養(yǎng)法活細胞數計算用吸管取1ml的洗脫液，把它放置在有9ml的磷酸鹽緩沖液中，充分混合，然后從這個測試管中用新的吸管吸取1ml測試液到另外一個9ml磷酸鹽緩沖液中充分混合，重復這個動作，準備稀釋成10倍的溶液。分配1ml的洗液和各種稀釋液到無菌平皿中，在每個平皿中加入15-20ml平板計數瓊脂

21、加熱到 46-48 并充分混合，平皿加上蓋子，放入標準室溫環(huán)境中，凝固后把培養(yǎng)基翻過來，在室溫35±1的情況下培養(yǎng)40至48小時。經過培養(yǎng)后，計算稀釋平皿中的細菌落數，是否有30到300菌落數出現，如果用1ml的洗脫液洗脫在平板瓊脂中細菌數少于30，然后計算這個盤子的細菌數量。如果在這個平板瓊脂中沒有任何菌種生成，記錄為< 1，進一步，如果細菌的數量沒有和稀釋率成相反的比例，就要考慮抗菌劑對菌種培養(yǎng)形成的影響。然后決定使用滅活劑或稀釋物不影響菌種形成的抗菌劑方法來計算活細胞數量。參考：菌落數其它方法，參考微生物試験法（平板培養(yǎng)法（貼膜法）日本藥學會編制衛(wèi)生試驗法注解2000）；污染指標菌1細菌數食品衛(wèi)生指針微生物局監(jiān)制5.2.7 活菌數的計算活菌數的計算：N（C×D×V）其中 N：每個樣片活菌數；Page 7 / Total 8JIS_Z_2