第五章生物堿

1、第五章第五章 中藥制劑中各類化學(xué)成分分析中藥制劑中各類化學(xué)成分分析 第一節(jié)第一節(jié) 含生物堿（含生物堿（alkaloid）類成分的分析）類成分的分析生物堿的分布生物堿的分布 含生物堿量多的科有罌粟科、防已科、茄科、含生物堿量多的科有罌粟科、防已科、茄科、小檗科、毛茛科、蕓香科、夾竹桃科、馬錢科小檗科、毛茛科、蕓香科、夾竹桃科、馬錢科及茜草科等，及茜草科等，中藥有三尖杉、麻黃、黃連、黃中藥有三尖杉、麻黃、黃連、黃柏、烏頭、延胡索、粉防已、顛茄、洋金花、柏、烏頭、延胡索、粉防已、顛茄、洋金花、貝母、百部等。貝母、百部等。二、生物堿的理化性質(zhì)二、生物堿的理化性質(zhì)溶解度溶解度多數(shù)極性較小，屬于親脂性堿，

2、游離狀態(tài)下多數(shù)極性較小，屬于親脂性堿，游離狀態(tài)下幾乎不溶于水。成鹽后則水溶性增加，易溶幾乎不溶于水。成鹽后則水溶性增加，易溶于水及醇中于水及醇中，不溶或難溶于苯、氯仿、乙醚，不溶或難溶于苯、氯仿、乙醚等。等。生物堿和其鹽這一相反的溶解性質(zhì)可以生物堿和其鹽這一相反的溶解性質(zhì)可以用于它的提取、分離和精制。用于它的提取、分離和精制。酸堿性酸堿性生物堿結(jié)構(gòu)中含氮，多呈堿性。能與無生物堿結(jié)構(gòu)中含氮，多呈堿性。能與無機(jī)酸、有機(jī)酸成鹽機(jī)酸、有機(jī)酸成鹽N： + H+X- N：H+X-堿性強(qiáng)弱為：季胺堿性強(qiáng)弱為：季胺 叔胺叔胺 仲胺仲胺 伯胺伯胺 酰胺酰胺沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)三、含生物堿類成分中藥制劑的定性鑒別三、

3、含生物堿類成分中藥制劑的定性鑒別常用的提取溶劑系統(tǒng)常用的提取溶劑系統(tǒng) 非極性溶劑系統(tǒng)：一般先用非極性溶劑系統(tǒng)：一般先用10%的氫氧的氫氧化銨、碳酸氫鈉或氫氧化鈉堿化，使生物化銨、碳酸氫鈉或氫氧化鈉堿化，使生物鹽游離，后用氯仿或乙醚提取，缺點(diǎn)是不鹽游離，后用氯仿或乙醚提取，缺點(diǎn)是不能提出水溶性生物堿。能提出水溶性生物堿。極性溶劑系統(tǒng)：極性較大的生物堿可用極性溶劑系統(tǒng)：極性較大的生物堿可用中性甲醇、乙醇、酸水（常用中性甲醇、乙醇、酸水（常用0.1%-1%的鹽酸、硫酸等）以及緩沖液提取，的鹽酸、硫酸等）以及緩沖液提取，但提出的雜質(zhì)較多，需凈化。但提出的雜質(zhì)較多，需凈化。 混合溶劑系統(tǒng)：用不同極性的溶

4、劑按不同比混合溶劑系統(tǒng)：用不同極性的溶劑按不同比例混合，可較好地進(jìn)行提取。例混合，可較好地進(jìn)行提取。 （一）一般理化鑒別（一）一般理化鑒別（二）色譜鑒別（二）色譜鑒別1、薄層色譜法、薄層色譜法吸附劑的選擇吸附劑的選擇：硅膠本身有弱酸性，與生物堿：硅膠本身有弱酸性，與生物堿成鹽，使吸附力增強(qiáng)，若用中性展開系統(tǒng)，其成鹽，使吸附力增強(qiáng)，若用中性展開系統(tǒng)，其Rf值小，易拖尾。值小，易拖尾。一般用堿性展開系統(tǒng)或在一般用堿性展開系統(tǒng)或在中性中加少量堿性溶劑，如二乙胺、氫氧化銨中性中加少量堿性溶劑，如二乙胺、氫氧化銨或用氨水飽和（展開缸中放一小杯氨水）或制或用氨水飽和（展開缸中放一小杯氨水）或制備堿板（在硅

5、膠板中加稀堿溶液）備堿板（在硅膠板中加稀堿溶液）。堿性氧化。堿性氧化鋁因本身帶有堿性，故用中性展開劑即可使生鋁因本身帶有堿性，故用中性展開劑即可使生物堿得到很好的分離。物堿得到很好的分離。脂溶性生物堿脂溶性生物堿-用吸附薄層法，用活度較用吸附薄層法，用活度較大的吸附劑如硅膠、氧化鋁。大的吸附劑如硅膠、氧化鋁。水溶性生物堿水溶性生物堿-用硅藻土、纖維素作為支用硅藻土、纖維素作為支持劑，硅膠板也可以持劑，硅膠板也可以展開劑的選擇展開劑的選擇脂溶性生物堿采取極性小的溶劑脂溶性生物堿采取極性小的溶劑水溶性用極性大的溶劑水溶性用極性大的溶劑但一般用混合溶劑較多，單一溶劑少但一般用混合溶劑較多，單一溶劑少

6、顯色劑的選擇顯色劑的選擇某些生物堿本身有顏色，可直接于可見光某些生物堿本身有顏色，可直接于可見光下觀察。下觀察。有紫外吸收的可用紫外檢測。有紫外吸收的可用紫外檢測。但大部分生物堿無色且無熒光，則需噴顯但大部分生物堿無色且無熒光，則需噴顯色劑，色劑，最常用的顯色劑有改良碘化鉍鉀、最常用的顯色劑有改良碘化鉍鉀、碘蒸氣、氨蒸氣碘蒸氣、氨蒸氣2、紙色譜法、紙色譜法3、高效液相色譜法、高效液相色譜法4、氣相色譜法、氣相色譜法 四、含生物堿類成分中藥制劑的含量測定四、含生物堿類成分中藥制劑的含量測定（一）總生物堿的含量測定（一）總生物堿的含量測定1、化學(xué)分析法、化學(xué)分析法2、 分光光度法分光光度法（1）直

7、接測定法）直接測定法（2）離子對萃取比色法）離子對萃取比色法酸性染料比色法酸性染料比色法在一定在一定pH介質(zhì)中，生物堿介質(zhì)中，生物堿B可與氫離子可與氫離子H+結(jié)結(jié)合生成生物堿鹽的陽離子合生成生物堿鹽的陽離子BH+，而酸性染料，而酸性染料在此條件下解離為陰離子在此條件下解離為陰離子In-, ,則陰陽離子能則陰陽離子能定量定量結(jié)合生成有色化合物（離子對）。結(jié)合生成有色化合物（離子對）。再用合適的有機(jī)溶劑將該離子對提取，測定再用合適的有機(jī)溶劑將該離子對提取，測定其吸收度值，進(jìn)而對生物堿定量。其吸收度值，進(jìn)而對生物堿定量。注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)：1、選擇適當(dāng)?shù)倪x擇適當(dāng)?shù)膒H 則生物堿成鹽，則生物堿成鹽，成為

8、陽離子成為陽離子BH+而酸性染料成為陰離子而酸性染料成為陰離子In-，陰陽，陰陽離子可結(jié)合。如離子可結(jié)合。如pH太低，則水相酸性強(qiáng)，雖然生太低，則水相酸性強(qiáng)，雖然生物堿成鹽，但酸性染料亦以酸的形式存在；物堿成鹽，但酸性染料亦以酸的形式存在；pH太太高則水相堿性強(qiáng)，生物堿以游離狀態(tài)存在，酸性染高則水相堿性強(qiáng)，生物堿以游離狀態(tài)存在，酸性染料以離子形式存在。都不能使陰陽離子定量地結(jié)合。料以離子形式存在。都不能使陰陽離子定量地結(jié)合。2、酸性染料酸性染料的選擇的選擇 常用的有溴酚藍(lán)、溴甲酚常用的有溴酚藍(lán)、溴甲酚綠、溴麝香草酚藍(lán)等綠、溴麝香草酚藍(lán)等3、合適的合適的有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑 要求對生物堿與酸性染料要

9、求對生物堿與酸性染料的結(jié)合物有很好的溶解度。氯仿、二氯甲烷的結(jié)合物有很好的溶解度。氯仿、二氯甲烷P117P117苦味酸鹽法苦味酸鹽法雷氏鹽比色法雷氏鹽比色法 （三）色譜法（三）色譜法1、高效液相色譜法、高效液相色譜法離子對色譜、正相色譜、反相色譜。離子對色譜、正相色譜、反相色譜。（1 1）、流動(dòng)相方面的改進(jìn)）、流動(dòng)相方面的改進(jìn) A A：加入：加入硅醇基抑制劑硅醇基抑制劑，可在流動(dòng)相中抑制或掩，可在流動(dòng)相中抑制或掩蔽固定相表面的游離硅醇基的活性，使生物堿易蔽固定相表面的游離硅醇基的活性，使生物堿易出峰，峰形好。出峰，峰形好。最常用的有最常用的有二乙胺、三乙胺二乙胺、三乙胺；B B：加入：加入離子

10、對試劑離子對試劑，使其與生物堿生成離子對，使其與生物堿生成離子對而掩蔽其堿性基團(tuán)，從而不會與固定相表面的硅而掩蔽其堿性基團(tuán)，從而不會與固定相表面的硅醇基作用；醇基作用；常用辛烷磺酸鈉或十二烷基磺酸鈉表常用辛烷磺酸鈉或十二烷基磺酸鈉表面活性劑。面活性劑。 反相反相HPLC的改進(jìn)：的改進(jìn)：C C：也可以加入：也可以加入季銨鹽試季銨鹽試劑劑，RR3 3SioH + A RSioH + A R3 3SioH.ASioH.A硅醇基硅醇基 季銨鹽季銨鹽 復(fù)合物復(fù)合物連續(xù)添加季銨鹽時(shí)，平衡向右，因而被分連續(xù)添加季銨鹽時(shí)，平衡向右，因而被分離的生物堿和硅醇基之間的作用被阻礙，離的生物堿和硅醇基之間的作用被阻礙

11、，從而使生物堿得到很好的分離。從而使生物堿得到很好的分離。 常用有溴化四甲基胺常用有溴化四甲基胺D：在流動(dòng)相中加入一定濃度電解質(zhì)在流動(dòng)相中加入一定濃度電解質(zhì)緩沖鹽緩沖鹽，可改變流動(dòng)相離子強(qiáng)度，穩(wěn)定可改變流動(dòng)相離子強(qiáng)度，穩(wěn)定pH值及促進(jìn)離值及促進(jìn)離子對作用，從而改善峰形及分離效果。子對作用，從而改善峰形及分離效果。 通常用通常用磷酸鹽緩沖液磷酸鹽緩沖液，但操作時(shí)由于存，但操作時(shí)由于存在鹽，做過后應(yīng)充分洗柱，以免腐蝕柱子。在鹽，做過后應(yīng)充分洗柱，以免腐蝕柱子。（2）、固定相方面的改進(jìn)）、固定相方面的改進(jìn)A：選擇：選擇C鏈較短的鍵合相硅膠為固定相鏈較短的鍵合相硅膠為固定相，如，如C8比比C18好，原

12、因是由于硅烷的好，原因是由于硅烷的C鏈較短則覆鏈較短則覆蓋硅膠的表面較好，只有較少的游離硅醇基。蓋硅膠的表面較好，只有較少的游離硅醇基。B：封尾技術(shù)可使填料的鍵合更徹底，常用三封尾技術(shù)可使填料的鍵合更徹底，常用三甲基氯硅烷（甲基氯硅烷（TMCS）處理，可減少殘余羥基，）處理，可減少殘余羥基，增加單體覆蓋度。增加單體覆蓋度。（3）、增加流動(dòng)相的脂溶性）、增加流動(dòng)相的脂溶性（4）、升高柱溫）、升高柱溫2、薄層色譜法、薄層色譜法3、氣相色譜法、氣相色譜法適用于有揮發(fā)性的、遇熱不分解的生物堿適用于有揮發(fā)性的、遇熱不分解的生物堿類，如類，如麻黃堿、檳榔堿、苦參堿和顛茄類麻黃堿、檳榔堿、苦參堿和顛茄類生物

13、堿。生物堿。思考題思考題：烏頭（注烏頭（注1）的容量法測定的操作程序是：）的容量法測定的操作程序是：取樣品精密稱定，加無水乙醇溶液并放置取樣品精密稱定，加無水乙醇溶液并放置24小時(shí)，小時(shí)，過濾，減壓回收乙醇，至殘留液至小量時(shí)加過濾，減壓回收乙醇，至殘留液至小量時(shí)加2%鹽鹽酸溶液（注酸溶液（注2），移入分液漏斗中，用乙醚萃取），移入分液漏斗中，用乙醚萃取3次次（注（注3），在樣品液中滴加氨試液調(diào)），在樣品液中滴加氨試液調(diào)PH9 10（注（注4），再用乙醚），再用乙醚-氯仿（氯仿（3:1）混合液提取次（注）混合液提取次（注5），合并萃取液，蒸干，加無水乙醇溶解精密），合并萃取液，蒸干，加無水乙醇溶解精密加入硫酸液（加入硫酸液（0.01mol/l）與甲基紅指示劑滴，）與甲基紅指示劑滴，用氫氧化鈉液（用氫氧化鈉液（0.02mol/l）滴定，并