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文檔簡介
1、實驗項目實驗項目 血糖的測定(血糖的測定(72-1)3學時學時 【臨床意義】【臨床意義】 正常成人空腹靜脈血糖含量正常成人空腹靜脈血糖含量為為3.896.11mmol/L??崭寡???崭寡歉哂诟哂?.11 mmol/L稱為臨界高血糖,稱為臨界高血糖,高于高于7.57.5mmol/L稱為高血糖,稱為高血糖,高于高于8.8910.0mmol/L出現(xiàn)糖尿出現(xiàn)糖尿現(xiàn)象??崭寡堑陀诂F(xiàn)象??崭寡堑陀?.0mmol/L稱稱為低血糖。為低血糖?!緦嶒災康摹俊緦嶒災康摹?掌握血糖測定的原理、操掌握血糖測定的原理、操作方法和臨床意義。作方法和臨床意義。 【實驗原理】【實驗原理】(1 1)葡萄糖)葡萄糖+ +
2、H2O + + O2 葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶 葡萄糖酸葡萄糖酸+ + H2O2 (2 2)H2O2 + + 氨基安替比林氨基安替比林 + + 酚酚 過氧化物酶過氧化物酶 紅色醌類化合物紅色醌類化合物 + + H2O (3 3)用)用72-1型分光光度計測出紅色化合物的吸光度,型分光光度計測出紅色化合物的吸光度, 再用公式求出葡萄糖含量。再用公式求出葡萄糖含量。 【實驗器材】【實驗器材】 試管、水浴箱、洗耳球、試管、水浴箱、洗耳球、五檔微量移液器、五檔微量移液器、刻度吸量刻度吸量管管(5ml)、)、72-1型分光光型分光光度計度計?!緦嶒炂鞑摹俊緦嶒炂鞑摹课鍣n微量移液器五檔微量移液器NoIma
3、ge使用方法:使用方法:1.1.將將吸嘴套在移液器頭上吸嘴套在移液器頭上輕輕轉(zhuǎn)動,以保證密封。輕輕轉(zhuǎn)動,以保證密封。2.2.使用前應先將移液器使用前應先將移液器吸液和排液幾次吸液和排液幾次,潤洗吸嘴潤洗吸嘴和保持和保持 腔內(nèi)外氣壓一致。腔內(nèi)外氣壓一致。3.3.選擇量程選擇量程。4.4.垂直地握住移液器,將按鈕按到第一停止點,然后把垂直地握住移液器,將按鈕按到第一停止點,然后把吸吸嘴浸入到嘴浸入到液液面下面下2 23mm3mm,再緩慢放松按鈕,使之復位,等,再緩慢放松按鈕,使之復位,等待待1 12 2秒后,從液體中取出,并避免碰撞任何物體。秒后,從液體中取出,并避免碰撞任何物體。5.5.將吸液嘴
4、移至加樣容器壁上,緩慢地把按鈕按到第一停將吸液嘴移至加樣容器壁上,緩慢地把按鈕按到第一停止點,等待止點,等待1 12 2秒,再把按鈕全部按下去,秒,再把按鈕全部按下去,排排盡盡液液體后,吸液體后,吸液嘴應沿容器壁上滑動取出,再放松按鈕,使之復位,即完成。嘴應沿容器壁上滑動取出,再放松按鈕,使之復位,即完成。6.6.最后,最后,打掉用過的吸液嘴,調(diào)回最大量程打掉用過的吸液嘴,調(diào)回最大量程,儀器放置好保存。,儀器放置好保存?!緦嶒炂鞑摹俊緦嶒炂鞑摹?2-172-1型分光光度計型分光光度計工作原理工作原理物質(zhì)對光的吸收具有選擇性,不同的物質(zhì)都有物質(zhì)對光的吸收具有選擇性,不同的物質(zhì)都有各自的吸收波長。
5、在一定波長下,某物質(zhì)的溶各自的吸收波長。在一定波長下,某物質(zhì)的溶液對光的吸收強弱(液對光的吸收強弱(吸光度吸光度A)與)與溶液的濃度溶液的濃度C和和液層的厚度液層的厚度L的乘積成正比,即遵循朗伯的乘積成正比,即遵循朗伯-比比爾定律:爾定律: A=KCL (K為吸收系數(shù),對同一物質(zhì)來說為一常數(shù)為吸收系數(shù),對同一物質(zhì)來說為一常數(shù))使用方法:使用方法:1.檢查檢查 :指針位于:指針位于“0”。 2.打開電源,打開比色皿暗箱蓋,打開電源,打開比色皿暗箱蓋,預熱預熱20分鐘分鐘。3.加樣:加樣:夾毛面,擦干夾毛面,擦干。 4.放置好比色皿放置好比色皿,選擇波長、調(diào)靈敏度。,選擇波長、調(diào)靈敏度。5.反復反
6、復調(diào)調(diào)0、調(diào)、調(diào)100至穩(wěn)定至穩(wěn)定。 6.合蓋,合蓋,讀數(shù),記錄,取樣,清洗,關閉儀器讀數(shù),記錄,取樣,清洗,關閉儀器。(1 1)血清)血清(2 2)G標準液:標準液:5.55 mmol/L(3 3)酶試劑)酶試劑 (4)酚試劑酚試劑 【實驗試劑】【實驗試劑】【實驗內(nèi)容和操作過程】【實驗內(nèi)容和操作過程】 1. 加樣【取加樣【取2支干凈試管,分別支干凈試管,分別標明標明測定測定(T)、標準()、標準(S)】,然后按表加入試劑:)】,然后按表加入試劑: 加入物加入物 測定管測定管T 標準管標準管S 血清血清(m ml l) 10 G標準應用液標準應用液(m ml l) 10酶試劑酶試劑(ml) 0
7、.75 0.75 酚試劑酚試劑(ml) 0.75 0.75 2. 2.將樣品混勻后,置于將樣品混勻后,置于37水浴箱水浴箱中水浴中水浴15min。 3.3.用分光光度計在波長用分光光度計在波長505nm(光(光徑徑1cm),), 以空白管調(diào)零以空白管調(diào)零O100,分,分別讀取其余兩管吸光度值,即記錄測定別讀取其余兩管吸光度值,即記錄測定管管T、標準管標準管S的吸光度值(的吸光度值(AT、AS ) 。 1.1.記錄測定管記錄測定管T、標準管標準管S的的吸光度值。吸光度值。AT、AS【實驗結(jié)果】【實驗結(jié)果】 CG標準液標準液 5.55 mmol/L AT ASCT血糖血糖 = = CG標準液標準液
8、. .計算公式:計算公式:(濃度(濃度C單位單位mmol/L) 【結(jié)果分析】【結(jié)果分析】 經(jīng)過計算得到的血糖濃度為經(jīng)過計算得到的血糖濃度為多多少少,是否在人體血糖濃度的正常范,是否在人體血糖濃度的正常范圍內(nèi)(圍內(nèi)(空腹血糖濃度為空腹血糖濃度為3.893.896.11mmol/L6.11mmol/L),),若在說明什么,若若在說明什么,若不在有說明什么。不在有說明什么。血糖測定有哪些臨床意義。血糖測定有哪些臨床意義。【作業(yè)】【作業(yè)】 1. 1.加樣時,看準試管標示(加樣時,看準試管標示(T、S)再加再加試劑。試劑。 2.2.加試劑時,看準用量(加試劑時,看準用量(l、ml)再取。)再取。 3.3.分光光度計測定吸光度值(分光光度計測定吸光度值(AT、AS)時,要做記錄時
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