免疫血清的制備實驗報告

1、實驗報告實驗名稱多克隆抗體的制備一（抗血清制備）實驗日期院系專業(yè)班級姓名學(xué)號一、實驗?zāi)康牧私饷庖叩脑?，掌握免疫方法和抗血清的制備技術(shù)。二、實驗器材試劑 ：酒精棉球、 NDV 滅活油乳劑疫苗、麻醉劑器材 ：兔籠、注射器、剃毛剪、手術(shù)刀、止血鉗、手術(shù)剪（組織剪、眼科剪）動脈導(dǎo)管、紗布、棉線、細線、培養(yǎng)箱、冰箱、結(jié)扎細線、離心機、溫箱、動脈夾、眼科剪、三、實驗原理1.機體的特異性免疫反應(yīng)是指機體受抗原物質(zhì)刺激后產(chǎn)體液免疫和細胞免疫的過程。一種抗原能否引發(fā)抗體反應(yīng)，一方面取決于抗原分子表面有無特異性的化學(xué)結(jié)構(gòu)抗原決定簇，另一方面取決于機體有無相應(yīng)的免疫活性細胞。2.將具有免疫原性的物質(zhì)注入健康動物體

2、內(nèi)后，抗原可刺激機體相應(yīng)B 細胞增殖、分化形成漿細胞并分泌特異性抗體。抗原進入機體經(jīng)過一定的潛伏期，抗體效價逐步上升， 達到高峰后，能維持一短暫的時期，以后又逐漸下降， 但當?shù)诙谓佑|相同的抗原時，抗體的上升較前次為快，高峰時的效價也比前次為高。抗體持續(xù)的時間也較長，此也稱為再次反應(yīng)。待動物血清中存在大量抗體時，采集動物血液，分離析出血清，便得到所需的抗血清（免疫血清或抗體）。3.由于抗原性物質(zhì)通常具有多個抗原決定簇，可以刺激機體產(chǎn)生多種抗體形成細胞克隆，合成和分泌各種抗原決定簇的抗體， 免疫血清中實際上是含有多種抗體的混合物， 所以這種免疫法獲得的免疫血清又稱為多克隆抗體。4.多克隆抗體的制

3、備是一個復(fù)雜的過程，為了獲得特異性強，效價高的抗血清，除了抗原的因素外， 還需注意動物品系的選擇、抗原注射的濃度、劑量、次數(shù)、間隔時間及注射途徑等。對于免疫原性較弱的可溶性抗原（如蛋白質(zhì)類抗原）要加入佐劑，以增強免疫性。四、實驗過程及步驟1.免疫接種1）取一只健康大白兔固定在兔籠中2）酒精消毒大白兔皮膚后，通過皮下或皮內(nèi)注射方式接種大白兔，共計注射8-10 個位置，每一處約 0.1ml 。3）為提高免疫血清效價，通常需要進行2-3 次加強免疫，每次免疫間隔10-15 天。然后再接免疫結(jié)束后的血清采集過程。4）注射完畢，將大白兔從兔臺取下，放回飼養(yǎng)籠。2.頸動脈放血1）取一只接種過的大白兔固定于

4、兔籠，耳緣靜脈注射合適劑量的麻醉劑麻醉。將麻醉后的大白兔固定于兔臺，用棉線固定四肢，細線固定門牙于鐵柱，使頸部完全暴露。2）用剃毛剪貼著皮膚減去頸部的毛，手術(shù)刀在頸部中央切開皮膚約3-4cm，紗布吸去多余的血液。用止血鉗提拉住兩邊的皮毛，組織剪將切口擴大至層，用止血鉗擴大開口使之與皮膚一致，游離出頸動脈約7-8cm。分別剪開黏膜層、肌肉2-3cm。3）用結(jié)扎細線2 根穿過頸動脈，遠心端結(jié)扎，近心端備用。動脈夾夾住頸動脈近心端，用眼科鑷手柄處將頸動脈抬起， 然后用眼科剪斜向近心端剪開血管， 插入動脈導(dǎo)管， 兩端分別用預(yù)留的結(jié)扎細線固定，打開動脈夾取血至錐形瓶后密封。3.獲得免疫血清1）將采集的動

5、脈血放到37溫箱中，靜置1 小時。2）在 4冰箱內(nèi)放置6-8 小時，待血清析出。3）將析出的血清轉(zhuǎn)移至50ml 離心管。離心管配平后，在4，以 2000rpm 轉(zhuǎn)速離心5min。4）待血清析出后，用移液器將其轉(zhuǎn)移至離心管中離心，離心結(jié)束后，上層血清即為免疫血清，用移液器將其轉(zhuǎn)移到離心管中，放置于-20冰箱凍存?zhèn)溆?。五、實驗總結(jié)1.多克隆抗體的制備很復(fù)雜，一般要多次間隔免疫，以便產(chǎn)生更多抗體。還需注意動物品系的選擇、抗原注射的濃度、劑量、次數(shù)、間隔時間及注射途徑等。2.在暴露頸動脈的手術(shù)過程中，應(yīng)保持切口在正中位置，因此固定大白兔時就要注意。為了減少出血量，因此皮膚、 黏膜、 肌肉要一層層剪開同時用止血鉗擴開， 在肌肉層最好用手指撕開，以免剪刀豐富的血管造成過量出血。3. 放 37 度溫箱溫浴，是為了讓血液內(nèi)纖維蛋白原收縮，降低血清和紅