丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室診斷的現(xiàn)狀和存在問題

1、.丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室診斷的現(xiàn)狀和存在問題【摘要】 實(shí)驗(yàn)室診斷方法對丙型肝炎病毒（HCV）感染的確認(rèn)和治療的監(jiān)測起著關(guān)鍵作用。自從1989年HCV被鑒定至今近20年間，隨著分子生物學(xué)檢測技術(shù)的發(fā)展，HCV的實(shí)驗(yàn)室診斷也取得了長足進(jìn)步，但同時(shí)也有很多問題需要研究和解決。HCV抗體檢測操作簡便，耗時(shí)少，但對處于窗口期的標(biāo)本容易漏檢，且不能判別是活動(dòng)性感染還是感染已被清除。HCV RNA檢測有較高的靈敏度和特異性，定量檢測還可以用于抗病毒治療監(jiān)測；國際上，RNA檢測的發(fā)展趨勢為全自動(dòng)化。目前RNA檢測亟待解決的兩個(gè)問題是標(biāo)準(zhǔn)化和高成本問題。近五年HCV抗原檢測和抗原抗體聯(lián)合檢測試劑盒也已問世，但其靈敏

2、度尚不及RNA。HCV基因分型主要基于核酸雜交或直接測序原理，均有相應(yīng)的商品化試劑盒，但其高成本限制了在臨床實(shí)驗(yàn)室的廣泛應(yīng)用?！娟P(guān)鍵詞】 丙型肝炎病毒；實(shí)驗(yàn)室診斷Progress and Challenges in the Laboratory Diagnosis of Hepatitis C Virus WEI Lai, Yang Ruifeng. Beijing University Peoples Hospital, Beijing University Hepatology Institute【Abstract】Hepatitis C virus (HCV) is a common b

3、lood-borne pathogen that relies heavily on laboratory assays for the confirmation of infection. Anti-HCV testing is the earliest and classical method which is easy to perform but has a long window period (78 weeks with the third-generation method) compared to the nucleic acid test (NAT). NAT provide

4、s direct evidence for the presence of HCV and quantitative HCV RNA testing has been applied to monitor the antiviral response to treatment. In some developed countries NAT is also used for blood screening. Cost-effectiveness and standardization are the major challenges for NAT. In recent years HCV c

5、ore antigen assay and the combination antigen-antibody assay have been introduced in some clinical laboratories and proved to be promising in the early diagnosis of HCV, whereas they still remain less sensitive than NAT and require methodological improvement. Finally, HCV genotyping assays based on

6、sequencing or reverse hybridization can provide important prognostic information related to therapeutic response, however, it is rarely used in China due to the high cost.【Key words】 Hepatitis C virus; Diagnosis, Laboratory丙型肝炎病毒（hepatitis C virus, HCV）以血液和性傳播為主要傳播手段，發(fā)病隱匿，癥狀不典型，加之公眾對其認(rèn)知水平較低，因此病毒的傳播不

7、易控制，患者也容易因不能及時(shí)診斷而錯(cuò)過治療的最佳時(shí)機(jī)。我國丙型肝炎感染高發(fā)時(shí)間在上世紀(jì)80年代末90年代初，90年代流行病學(xué)調(diào)查顯示HCV抗體流行率約為3.2%，高于世界平均水平。經(jīng)過20年的發(fā)展，目前更多感染者出現(xiàn)了臨床表現(xiàn)，在國家傳染病報(bào)告中丙型肝炎的報(bào)告率逐漸增多，感染所帶來的嚴(yán)重后果正日益顯現(xiàn)?？刂票透窝椎膫鞑ァ⑻岣弑透窝椎闹委熜Ч枰蕾囉诩皶r(shí)、準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室診斷。1989年Choo1等首次應(yīng)用分子生物學(xué)方法篩選得到一段來源于HCV的cDNA，并檢測到了HCV抗體，次年第一代HCV抗體EIA試劑獲得FDA批準(zhǔn)并運(yùn)用到血液制品篩查中，極大降低了HCV血源性傳播的幾率，在HCV的檢測上

8、具有里程碑式的意義；之后得益于分子診斷技術(shù)的進(jìn)步，核酸檢測（nucleic acid test, NAT），包括HCV RNA定性、定量檢測應(yīng)用于臨床，大大縮短了HCV感染診斷的“窗口期”，也使抗病毒治療的監(jiān)測成為可能，特別是基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理的實(shí)時(shí)熒光PCR儀的應(yīng)用，降低了擴(kuò)增產(chǎn)物污染的可能性，簡化了實(shí)驗(yàn)操作，使得PCR檢測發(fā)生了革命性變化，分子診斷從此得到推廣普及；近幾年來，HCV抗原檢測及抗原/抗體聯(lián)合檢測試劑也相繼問世。檢測技術(shù)的進(jìn)步和新技術(shù)的出現(xiàn)提高了HCV的實(shí)驗(yàn)室診斷水平，但各個(gè)方法也存在不少問題，需要我們今后研究和解決。一、 HCV抗體檢測： 經(jīng)典，但有局限性HCV抗體檢測

9、誕生于上世紀(jì)90年代初，是最早用于HCV實(shí)驗(yàn)室診斷的方法，具有操作簡便、耗時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛運(yùn)用于血液制品的篩查選和臨床診斷。目前大部分臨床實(shí)驗(yàn)室使用第三代HCV抗體檢測試劑，采用間接酶聯(lián)免疫或微?；瘜W(xué)發(fā)光法，包被抗原除重組核心抗原外，還包括非結(jié)構(gòu)蛋白NS3，NS4和NS5。在HCV低流行率人群如無償獻(xiàn)血者中，HCV抗體假陽性問題一直比較突出。根據(jù)美國CDC的研究結(jié)果，獲FDA批準(zhǔn)的Abbott HCV 2.0 及Ortho HCV 3.0 在抗體陽性率<10%的各類人群中，假陽性率平均為35%。引起假陽性的原因很多，如重組蛋白純度不足、血清成分如類風(fēng)濕因子的干擾等等。2003年美國CD

10、C發(fā)布HCV抗體報(bào)告和實(shí)驗(yàn)室檢測導(dǎo)則, 抗HCV抗體僅僅在重復(fù)檢測S/CO3.8時(shí)才可能為真陽性，S/CO<3.8時(shí)應(yīng)該進(jìn)行重組免疫印跡（RIBA）的補(bǔ)充檢測2；而S/CO值在0.5到1.0之間的高值陰性樣品應(yīng)注意是否為假陰性3。我國HCV抗體檢測試劑自1993年面世以來，經(jīng)廣大科技工作者和生產(chǎn)單位努力，經(jīng)過國家“八五”到“十五”攻關(guān)，質(zhì)量在不斷進(jìn)步，與當(dāng)前國外主流的三代試劑相比，我國HCV抗體檢測試劑在靈敏度和特異性上與國外基本沒有差異，并且國產(chǎn)試劑在提高了對NS3抗原檢測力度的同時(shí)，保持了對核心抗原檢測的敏感性4。但相比國外產(chǎn)品，國產(chǎn)試劑有兩個(gè)特點(diǎn)：（1）陰陽性樣品的OD值差別較小，

11、不能將陰陽性分得很開，對處于臨界值附近的樣品易檢測為假陽性或假陰性，這可能與抗原純度不足或第二抗體濃度較高等因素有關(guān)；（2）不同國產(chǎn)試劑對真陽性的判定閾值S/CO各不相同，國外試劑一般為S/CO3.8判定為真陽性，而7種國產(chǎn)試劑S/CO從6.0到14.0不等5，這就要求我們不能套用美國CDC標(biāo)準(zhǔn)，要因地制宜制定自己的判定標(biāo)準(zhǔn)；也說明國產(chǎn)試劑盒之間的檢測性能有較大的異質(zhì)性。需要繼續(xù)加強(qiáng)對HCV NS3等蛋白的表達(dá)純化和抗原性研究，努力提高試劑盒生產(chǎn)工藝，在提高特異抗體檢出率的同時(shí)降低交叉反應(yīng)。RIBA是HCV抗體檢測的確認(rèn)試驗(yàn)，由于其成本效益比缺乏足夠的優(yōu)越性等原因，RIBA一直沒有在我國上市。

12、實(shí)際上，在亞太地區(qū)，由于經(jīng)濟(jì)發(fā)展的不平衡，很多國家都難以采用RIBA對HCV抗體檢測進(jìn)行確認(rèn)，甚至難以重復(fù)檢測。有鑒于此，2007年發(fā)布的亞太地區(qū)丙型肝炎專家共識指出，單次EIA檢測S/CO達(dá)到預(yù)測真陽性的水平可報(bào)告為陽性，而單次EIA檢測S/CO未達(dá)到預(yù)測真陽性的水平或接近S/CO值者應(yīng)考慮HCV RNA定性檢測和/或進(jìn)一步獲得樣本進(jìn)行HCV抗體和HCV RNA定性檢測。我國可以參考該共識進(jìn)行臨床HCV抗體的檢測和報(bào)告。同時(shí)，已有國產(chǎn)的HCV分片段抗體檢測試劑問世，對于確認(rèn)HCV抗體具有一定的價(jià)值。特別是近來已有國產(chǎn)的免疫印跡試劑，對于今后改變單一依賴HCV抗體S/CO比值報(bào)告的局面有較大的

13、幫助。相比NAT，HCV抗體檢測還有幾點(diǎn)局限性：（1）抗體產(chǎn)生是病毒感染的間接證據(jù)，不能區(qū)分是現(xiàn)癥感染還是病毒已被清除；（2）感染HCV的免疫力低下患者（如移植患者）及血液透析者血清中抗體水平很低甚至不產(chǎn)生抗體，容易漏檢；（3）相比RNA和抗原檢測，從HCV感染到抗體出現(xiàn)的“窗口期”較長，雖然第三代抗體檢測的窗口期已縮短為78周，但仍不能完全滿足臨床早期診斷和獻(xiàn)血員篩查的要求。二、 HCV RNA定量檢測：有待于進(jìn)一步的標(biāo)準(zhǔn)化HCV RNA在感染1周內(nèi)即可被檢測到，比抗體出現(xiàn)早數(shù)周時(shí)間，直觀地反映了病毒的存在，尤其在移植、HIV感染以及血液透析人群中，RNA檢測常常作為HCV感染的主要確診手段

14、。HCV RNA分定性檢測和定量檢測，定性檢測的敏感度略高于定量檢測；定量檢測根據(jù)不同的原理，又分為實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR（如Roche Cobas Monitor HCV v2.0）、分支DNA（Bayer Versant HCV RNA v3.0）、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增（TMA）及核酸序列依賴性擴(kuò)增（NASBA）等，國內(nèi)外臨床實(shí)驗(yàn)室實(shí)時(shí)熒光定量PCR的使用占主導(dǎo)地位。國際上，近5年來HCV RNA檢測有向全自動(dòng)化發(fā)展的趨勢，突出表現(xiàn)在核酸提取的自動(dòng)化目前知名的核酸自動(dòng)化提取平臺(tái)有羅氏的MagNA Pure LightCycler和Cobas AmpliPrep，生物梅里埃的NucliSens e

15、asyMAG平臺(tái)等。MagNA采用玻璃磁珠吸附分離樣本中的核酸，COBAS AmpliPrep采用生物素化的特異性寡核苷酸探針結(jié)合核酸，核酸-探針復(fù)合體與親和素化的磁珠（Dynabeads）結(jié)合和分離，NucliSens則是利用硫氰酸胍溶解蛋白釋放核酸，核酸被硅顆粒吸附而得以分離純化。相比手工提取，核酸提取的自動(dòng)化降低了手工操作的時(shí)間，特別是降低了手工操作引起的誤差及污染，提高了模板RNA的純度，有助于控制檢測結(jié)果的可重復(fù)性，適于大通量檢測。羅氏Cobas AmpliPrep/Cobas Taqman 48系統(tǒng)將自動(dòng)核酸提取平臺(tái)Cobas AmpliPrep和自動(dòng)PCR檢測平臺(tái)Cobas Ta

16、qman 48對接，可實(shí)現(xiàn)核酸提取PCR擴(kuò)增/熒光信號檢測結(jié)果分析的整體自動(dòng)化。Sandres-Sauné6等報(bào)告，全自動(dòng)化檢測與傳統(tǒng)的Roche HCV monitor v2.0相比，相關(guān)性良好（r=0.89，P<0.001），靈敏度達(dá)到15 IU/ml，線性范圍更廣（91 IU/ml 5370000IU/ml），批內(nèi)變異僅為0.3%3.3%，批間變異為1.5%6.7%?？梢灶A(yù)見，和酶免疫、化學(xué)發(fā)光免疫及電化學(xué)發(fā)光免疫檢測的全面自動(dòng)化一樣，NAT自動(dòng)化也是未來的發(fā)展趨勢；臨床檢驗(yàn)的自動(dòng)化將有力地推動(dòng)臨床檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化。不過Chevaliez7等的研究表明，Cobas Ampli

17、Prep/Cobas Taqman 48對約15%的2型和30%的4型HCV RNA測定值偏低，可能系HCV 5非編碼序列中的突變引起引物和探針結(jié)合力降低所致；血清的1/5稀釋也會(huì)造成RNA水平0.6 log10的降低，需要引起臨床實(shí)驗(yàn)室的注意。相比其他實(shí)驗(yàn)室檢測如血清學(xué)檢測，PCR依然是臨床實(shí)驗(yàn)室最不易實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化的項(xiàng)目，因其所受的影響因素最多，從實(shí)驗(yàn)室來說，標(biāo)本保存不當(dāng)、核酸提取不當(dāng)?shù)瓤稍斐杉訇幮越Y(jié)果的出現(xiàn)，而擴(kuò)增產(chǎn)物的污染和核酸提取中標(biāo)本間的交叉污染又容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果；從試劑盒上說，試劑廠家的標(biāo)準(zhǔn)來源不一，單位不統(tǒng)一（有使用copies/ml，也有使用IU/ml等），使得檢測結(jié)果缺乏可比

18、性。本世紀(jì)初，衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心開始對臨床基因擴(kuò)增檢測實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行認(rèn)證，相關(guān)技術(shù)人員通過理論和實(shí)驗(yàn)培訓(xùn)方能進(jìn)行操作，標(biāo)本的采集、運(yùn)送、處理及污染防治等問題得以規(guī)范化，使得HCV定量檢測質(zhì)量有了很大提高，但標(biāo)準(zhǔn)化問題仍然是主要問題。2006年王露楠8等按照WHO標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制方法，以WHO國際標(biāo)準(zhǔn)品（NIBSC, 編號96/790）作為溯源物質(zhì)，對經(jīng)陰性血清稀釋的陽性血清賦值，賦值后的血清凍干保存，編號為GBW (E) 090032，是國內(nèi)第一個(gè)可溯源到國際標(biāo)準(zhǔn)的用于NAT的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研發(fā)和應(yīng)用有助于控制RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄兩個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量、消除不同試劑和不同人員操作間的差異，有助于實(shí)現(xiàn)量值

19、溯源，使不同實(shí)驗(yàn)室、不同試劑的檢測結(jié)果具有可比性，是實(shí)現(xiàn)HCV RNA檢測標(biāo)準(zhǔn)化的核心9。該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)傳遞的室間質(zhì)評物已在全國使用，對臨床實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性起到了良好的促進(jìn)作用，今后需進(jìn)一步強(qiáng)化其在HCV RNA PCR室內(nèi)和室間質(zhì)量控制中的應(yīng)用。是否應(yīng)將HCV RNA檢測強(qiáng)制應(yīng)用于低危人群的篩查在亞太地區(qū)（包括我國）尚未達(dá)成共識，主要是由于NAT檢測的成本-效益的矛盾尚未很好解決，另外NAT檢測對儀器和操作的要求高，尚難滿足大規(guī)模標(biāo)本量和快速篩查的需要。為了節(jié)約成本和提高檢測通量，2002年以來，歐美發(fā)達(dá)國家和日本開始將血清/血漿混合微池(mini-pool)NAT引入血液制品的篩查。Ei

20、ras10等采用FDA推薦的Cobas AmpliScreen HCV v2.0（Roche）對西班牙5個(gè)血液中心的1,015,482份血樣（占34.1%的西班牙年總獻(xiàn)血量）進(jìn)行2248人份混合血清的RNA定量測定，檢測到3份HCVRNA陽性但抗體陰性的血樣，追蹤發(fā)現(xiàn)3位患者在5個(gè)月之內(nèi)全部出現(xiàn)HCV抗體；采用同樣的方法，美國和日本報(bào)道HCV抗體陰性的獻(xiàn)血員中RNA陽性的幾率分別為1/23萬和1/35萬。我國獻(xiàn)血人口基數(shù)大，HCV的感染率高于歐美和日本，因此用NAT篩查HCV抗體陰性的血液制品出現(xiàn)RNA陽性的數(shù)量要遠(yuǎn)大于其他國家，進(jìn)行獻(xiàn)血員NAT篩查也有更重要的意義，但目前為止尚無大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)

21、數(shù)據(jù)供參考。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，HCV抗原檢測敏感性與NAT接近，而成本和操作時(shí)間與HCV抗體檢測類似，可能會(huì)有助于這一問題的徹底解決。三、 HCV抗原檢測：取代NAT，前景廣闊但道路漫長目前HCV抗原檢測的主要為HCV核心蛋白。核心蛋白是組成HCV核衣殼的主要蛋白，含約190個(gè)氨基酸，各型HCV氨基酸序列高度保守，同源性大于95%。血清中HCV抗原含量很低，比HBsAg低23個(gè)數(shù)量級，所以對檢測試劑的敏感度和特異性要求很高。2001年，強(qiáng)生ortho公司推出了世界上首個(gè)HCV抗原檢測試劑盒Ortho Trak-C，試劑盒所使用的結(jié)合抗體和檢測抗體分別使用2對不同的鼠抗人單抗，采用抗體夾心法檢測核心抗

22、原，最新版本的Trak-C可測到1.5pg/ml的核心蛋白。由于檢測前先要對血清中的抗原-抗體復(fù)合物進(jìn)行解離并裂解病毒顆粒，所以該試劑盒檢測的是總的核心抗原。雅培的Architect HCV核心抗原檢測試劑盒則采用了微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫法，實(shí)現(xiàn)了抗原檢測的自動(dòng)化11。核心抗原含量與RNA水平正相關(guān)，窗口期僅比NAT晚0.24d，而比抗體檢測縮短58.2d，有較高的敏感性12-13?？乖瓩z測有與抗體檢測相似的優(yōu)點(diǎn)：操作簡便、耗時(shí)短、成本相對較低、對專用儀器依賴性小，同時(shí)又具備RNA檢測的優(yōu)點(diǎn)：窗口期短，能直觀反應(yīng)HCV的病毒載量，可用于抗病毒治療監(jiān)測，是很有前景的檢測項(xiàng)目。但抗原檢測亟待解決的問題是

23、提高敏感性，因?yàn)楝F(xiàn)有的抗原檢測試劑在RNA 20,000 IU/ml以下時(shí)大多為陰性，會(huì)造成一定漏診率；另外，靈敏度提高的同時(shí)亦需解決假陽性的問題，低于8.5pg/ml的樣本假陽性率為100%13，需要以“中和試驗(yàn)”作為抗原檢測確認(rèn)試驗(yàn)，制定閾值S/CO。目前商品化的HCV檢測試劑均尚未獲得美國FDA認(rèn)可。近兩年來，HCV抗原-抗體聯(lián)合檢測試劑盒也已上市，例如Bio-Rad公司的Monolisa和雅培公司的Murex HCV抗原-抗體檢測試劑盒。但上述兩種抗原/抗體聯(lián)合檢測方法的靈敏度與NAT相比均存在較大差距，Tuke PW等報(bào)道142份抗體陰性血漿中，112份RNA陽性，但是只有56份Mu

24、rex陽性，32份Monolisa陽性，其敏感性有待進(jìn)一步提高14。四、 HCV基因分型：如何向臨床推廣HCV根據(jù)序列間的差異可分為6種主要的基因型和更多的亞型（型和亞型分別以數(shù)字和小寫字母表示），中國最主要的基因型為1b（66%），其次為2a（14%），還有其他型別如南方地區(qū)的6型等。不同基因型對抗病毒治療的應(yīng)答不同，采取的治療方案也不同，對RNA定量結(jié)果也有一定的影響，因此對HCV進(jìn)行基因分型有重要的臨床意義。傳統(tǒng)的HCV血清學(xué)分型與分子生物學(xué)分型相比，只有62.1%的符合率15，今后會(huì)逐漸被后者分型所取代。目前商品化的分型試劑的檢測靶位點(diǎn)主要集中于保守的5端非編碼區(qū)，如Bayer的Tru

25、gene HCV分型試劑盒和反相線性探針檢測(LiPA)試劑盒，兩者均通過了美國FDA認(rèn)證。前者直接測序進(jìn)行分型，LiPA則是基于反相雜交原理，PCR擴(kuò)增目的基因（擴(kuò)增的DNA被生物素標(biāo)記），與硝酸纖維膜上線形區(qū)帶上的寡核苷酸探針雜交，再加入標(biāo)記有堿性磷酸酯酶的親和素，與雜交產(chǎn)物上標(biāo)記的生物素結(jié)合，加入顯色底物NBT/BCIP孵育后，顯現(xiàn)紫色或棕色的條帶，不同的條帶組合對應(yīng)不同的基因型。相比第一代產(chǎn)品，二代LiPA HCV增加了核心區(qū)序列，可準(zhǔn)確地區(qū)分1a和1b型，并可避免東南亞地區(qū)和我國南部地區(qū)較常見的6c-6l型誤分為1型16，但仍約有8%的2a型易被LiPA誤判為1a型17，這兩種型別的

26、HCV感染的治療和預(yù)后均存在較大差異。需要注意，不論是Trugene還是LiPA，均要經(jīng)過PCR擴(kuò)增，對HCV混合感染進(jìn)行分型時(shí)，不可避免會(huì)因不同型別RNA擴(kuò)增效率不一造成的劣勢擴(kuò)增毒株的漏檢。目前HCV分型試劑盒的最大的問題是價(jià)格高昂，阻礙著這項(xiàng)技術(shù)的臨床推廣和應(yīng)用。參考文獻(xiàn) Choo QL, Kuo G, Weiner AJ, et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome. Science, 1989,244:359-362.2 Alter MJ

27、, Kuhnert WL, Finelli L; Centers for Disease Control and Prevention. Guidelines for laboratory testing and result reporting of antibody to hepatitis C virus. Centers for Disease Control and Prevention. MMWR Recomm Rep. 2003, 52:1-13, 15.3 谷金蓮,祁自柏,王尊文等. 丙型肝炎病毒抗體試劑檢測結(jié)果的可信度分析. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2005, 28:580-58

28、3.4 祁自柏, 周誠, 谷金蓮等. 丙型肝炎國產(chǎn)診斷試劑與第三代進(jìn)口試劑的臨床比較研究.  中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志, 1998, 21:348-351.5 任芙蓉, 龔曉燕, 李京京,等. 獻(xiàn)血員丙型肝炎病毒抗體酶免疫法檢測試劑的S/CO值與其真陽性的相關(guān)性. 中華肝臟病雜志, 2005, 13: 255-258. 6 Sandres-Sauné K, Abravanel F, Nicot F, et al. Detection and quantitation of HCV RNA using real-time PCR after automated sample proc

29、essing. J Med Virol, 2007, 79:1821-6. 7 Chevaliez S, Bouvier-Alias M, Brillet R, et al. Overestimation and underestimation of hepatitis C virus RNA levels in a widely used real-time polymerase chain reaction-based method. Hepatology, 2007, 46:22-31.8 王露楠, 吳健民, 李金明, 等. 丙型肝炎病毒核酸檢測的國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,

30、 2006, 29:354-357.9李金明. 臨床實(shí)驗(yàn)室分子診斷的標(biāo)準(zhǔn)化. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2006, 29:483-486.10 Eiras A, Sauleda S, Planelles D, et al. HCV screening in blood donations using RT-PCR in mini-pool: the experience in Spain after routine use for 2 years. Transfusion, 2003 ,43:713-720.11 Leary TP, Gutierrez RA, Muerhoff AS, et al. A chemiluminescent, magnetic particle-based immunoassay for the detection of hepatitis C virus core antigen in human serum or plasma. J Med Virol. 2006,78:1436-1440.2 Lape