動物細胞融合和單克隆抗體(mmr)

1、1 1、定義：、定義：指用指用自然自然或或人工人工方方法使兩個或多個不同的細胞法使兩個或多個不同的細胞融合成一個細胞的過程。融合成一個細胞的過程。一、動物細胞融合一、動物細胞融合（也稱細胞雜交）（也稱細胞雜交）3.原理：原理：兩個細胞正在融合兩個細胞正在融合受精作用受精作用細胞膜的流動性細胞膜的流動性2.2.結果：結果： 形成形成具有原來兩個具有原來兩個或或多個細胞遺傳信息多個細胞遺傳信息單核的單核的雜交細胞雜交細胞4.4.誘導方式：誘導方式：物理法：物理法：離心、振動、電激離心、振動、電激化學法：化學法：聚乙二醇（聚乙二醇（PEG)PEG)生物法：生物法：滅活的滅活的病毒病毒5.5.意義：意

2、義：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交（種間、突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）屬間、科間、動植物之間）成為可能成為可能。6. 6. 應用：應用：成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段生物新品種培育等的重要手段主要用途：主要用途：制備單克隆抗體制備單克隆抗體植物體細胞雜交植物體細胞雜交和和動物細胞融合的比較動物細胞融合的比較例1下列關于動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，敘述正確的是()A誘導融合的方法完全相同B所用的技術手段完全相同C所采用的原理完全相同D都能形成雜種細胞D1.1.什么是抗體？什么是

3、抗體？2.2.抗體是由何種細胞產(chǎn)生的，如何產(chǎn)生？抗體是由何種細胞產(chǎn)生的，如何產(chǎn)生？抗體是指能與抗原發(fā)生特異性免疫反應的蛋白質(zhì)?？贵w是指能與抗原發(fā)生特異性免疫反應的蛋白質(zhì)。漿細胞（效應漿細胞（效應B B細胞）細胞） 要受到抗原刺激要受到抗原刺激3.3.傳統(tǒng)的抗體生產(chǎn)方法及缺陷是什么？如何解決？傳統(tǒng)的抗體生產(chǎn)方法及缺陷是什么？如何解決？每種免疫的每種免疫的B B細胞只分泌一種化學性質(zhì)單一、細胞只分泌一種化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體。特異性強的抗體。從從血血清清中中分分離離抗抗體體該法制備抗體的特點：該法制備抗體的特點： 產(chǎn)量低產(chǎn)量低、純度低，且抗、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。體的特異性差、

4、靈敏度低。多多種種效效應應B細細胞胞動動物物體體內(nèi)內(nèi)多多種種抗抗體體抗抗原原 怎樣獲得產(chǎn)量高、單一類型的抗體？怎樣獲得產(chǎn)量高、單一類型的抗體？一個一個B B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體淋巴細胞只分泌一種特異性抗體 骨髓瘤細胞能無限增殖骨髓瘤細胞能無限增殖雜交瘤細胞雜交瘤細胞動物細胞培養(yǎng)技術動物細胞培養(yǎng)技術設計方案：設計方案：動物細胞融合技術動物細胞融合技術單克隆單克隆 抗體抗體 要獲得要獲得既能產(chǎn)生特異性抗既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量繁殖的細胞體，又能大量繁殖的細胞單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備米爾斯坦和科勒的設想與行動米爾斯坦和科勒的設想與行動 （見書（見書P54)P54) 由由單個單個B

5、 B淋巴細胞經(jīng)過淋巴細胞經(jīng)過無性繁殖無性繁殖（克（克?。┞。纬苫蛐拖嗤募毎?，這一細，形成基因型相同的細胞群，這一細胞群所產(chǎn)生的胞群所產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一、特異性強化學性質(zhì)單一、特異性強的的抗體稱為單克隆抗體。抗體稱為單克隆抗體。 單克隆抗體單克隆抗體特異性強、靈敏度高，可大量制備特異性強、靈敏度高，可大量制備 特點：特點：米爾斯坦和科勒因此在米爾斯坦和科勒因此在19841984年獲諾貝爾獎。年獲諾貝爾獎。 單克隆抗體制備過程：單克隆抗體制備過程：篩選篩選雜交細胞雜交細胞培養(yǎng)、培養(yǎng)、 專一抗體檢測、篩選專一抗體檢測、篩選足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細胞群抗體的細胞群

6、選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基雜交瘤細胞雜交瘤細胞注射抗原注射抗原骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞B B淋巴細胞淋巴細胞單克隆抗體制備小結單克隆抗體制備小結1 1、兩種細胞的獲得：、兩種細胞的獲得： 骨髓瘤細胞：骨髓瘤細胞： B B淋巴細胞：淋巴細胞：2 2、雜交細胞具有的特點：、雜交細胞具有的特點： 3 3、單克隆制備過程有兩次篩選目的：、單克隆制備過程有兩次篩選目的： 4 4、單克隆抗體優(yōu)點：、單克隆抗體優(yōu)點：從患骨髓瘤的小鼠體內(nèi)獲得從患骨髓瘤的小鼠體內(nèi)獲得注射特定的抗原蛋白所獲得的相應注射特定的抗原蛋白所獲得的相應B B淋淋巴細胞，是已免疫的巴細胞，是已免疫的B B淋巴細胞淋巴細胞無限增殖，產(chǎn)生特異性抗體無限

7、增殖，產(chǎn)生特異性抗體第一次篩選出雜交瘤細胞第一次篩選出雜交瘤細胞第二次篩選出產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞第二次篩選出產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞特異性強、靈敏度高、可大量制備特異性強、靈敏度高、可大量制備單克隆抗體的應用單克隆抗體的應用主要有：主要有：1、臨床診斷、臨床診斷2、治療疾病和運載藥物、治療疾病和運載藥物單克隆抗體純度高、特異性強，所以能準確識別各單克隆抗體純度高、特異性強，所以能準確識別各種抗原物質(zhì)的細微差異，并跟一定的抗原發(fā)生特異性結種抗原物質(zhì)的細微差異，并跟一定的抗原發(fā)生特異性結合。因此，單克隆抗體在怎短的應用上，具有合。因此，單克隆抗體在怎短的應用上，具有準確、高準確、高效、簡易和快

8、速效、簡易和快速的優(yōu)點。的優(yōu)點。主要用于癌癥治療主要用于癌癥治療作為載體，運載抗癌藥物，形成作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物生物導導彈彈”治療腫瘤治療腫瘤單克隆抗體+抗癌藥物 例例2、下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術的方法，設計的生產(chǎn)、下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術的方法，設計的生產(chǎn)破傷風桿菌的實驗方案破傷風桿菌的實驗方案2、該方案能達到預期效果嗎？為什么？、該方案能達到預期效果嗎？為什么？4、圖中、圖中B為為_過程，常過程，常用用_作為誘導劑，該細胞作為誘導劑，該細胞繼承雙親細胞的遺傳特性，既能繼承雙親細胞的遺傳特性，既能_,又能又能_。1、該實驗方案的目的是、該實驗方案的目的是_3、A是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_,該細胞能夠產(chǎn)生該細胞能夠產(chǎn)生_5、C過程指細胞培養(yǎng)，該過程包括過程指細胞培養(yǎng)，該過程包括_培養(yǎng)和培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個階段。培養(yǎng)兩個階段。制備單克隆抗體制備單克隆抗體B細胞細胞抗體抗體細胞融合細胞融合滅活病毒滅活病毒分泌抗體分泌抗體在體外培養(yǎng)條件下無限增殖在體外培養(yǎng)條件下無限增殖原代原代傳代傳代B體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞雜交瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群足夠數(shù)量的細胞群注射到注射到小鼠