高效液相色譜紫外光檢測(cè)法測(cè)定食品中羅丹明B的含量

1、高效液相色譜-紫外光檢測(cè)法測(cè)定食品中羅丹明B的含量王勇，武娜(濟(jì)寧出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東濟(jì)寧272025摘要目的建立食品中羅丹明B的高效液相色譜-紫外光檢測(cè)法。方法將樣品中的羅丹明B用丙酮、正己烷提取，經(jīng)過(guò)氧化鋁固相萃取柱凈化濃縮后，利用高效液相色譜紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器檢測(cè)其含量。結(jié)果羅丹明B在0.0052.000mg/kg濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.99998;方法的定量檢測(cè)限為0.005mg/kg,且平均回收率高。結(jié)論該方法適用于食品中羅丹明B的測(cè)定，并具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。關(guān)鍵詞食品；高效液相色譜-紫外光檢測(cè)法；羅丹明B;檢測(cè)中圖分類號(hào)S123文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

2、文章編號(hào)0517-6611(201215-08723-03DeteiminationofRliodamineBinFoodbyHPLC-UVMethodWANGYongetal(JinmgEntiy-exitLispectionandQuarantmeBureau,Jming,Shandong272025AbstractObjectiveTheamiwastoestablishamethodfbithedeterminationofRliodamineBinfoodbyHPLC-UV.MethodRliodamineBwasextiactedwithacetone/hexanefiomfood

3、samples.Afteiconcentiatedandpurifiedbyaluminacaitndge,theRliodanuiieBcontentinthefoodwasdetermmedbyusinghighpeifbimanceliquidchiomatogiaphywithultravioletvisibledetector.ResultWithintheconcentrationrangeof0.005-2.OOOmg/kg,thepeakareaofRliodamineBpresentsgoodlinealrelationwiththeconcentrationwithther

4、elatedcoefficientof0.99998.Thedetectionluiutofthemethodis0.005mg/kg,andwithhighaveragexecoveiyrate.ConclusionItisafastandaccuratemeth-odtodetectRliodamineBinfoodwithhighsensitivity.KeywordsFood;HPLC-5,;RliodanuiieB;Detection作者簡(jiǎn)介王勇（1977-，男，山東淄博人，工程師，碩士，從事食品質(zhì)量安全檢測(cè)研究，E-mail:sduwyo收稿日期2012-01-31羅丹明B又稱玫瑰

5、紅B或堿性玫瑰精，俗稱“花粉紅”，是一種具有鮮桃紅色的人工合成染料。其在溶液中有強(qiáng)烈的熒光，常用作細(xì)胞熒光染色劑，及用于有色玻璃、礦業(yè)和鋼鐵等行業(yè)1o羅丹明B曾經(jīng)用作食品添加劑，但后來(lái)試驗(yàn)證明羅丹明B會(huì)導(dǎo)致皮下組織生肉瘤，屬致癌物質(zhì)，現(xiàn)已不允許用于食品染色2目前，食品中羅丹明B的檢測(cè)主要采用液相色譜熒光檢測(cè)器法3,該方法采用凝膠凈化系統(tǒng)進(jìn)行前處理，采用液相色譜熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，而一般實(shí)驗(yàn)室無(wú)凝膠凈化儀器，同時(shí)使用熒光檢測(cè)器檢測(cè)時(shí)易產(chǎn)生干擾，如背景熒光和猝滅效應(yīng)等。雖然這些干擾在液相分析中不常遇到，但在進(jìn)行定量分析時(shí)，有必要驗(yàn)證這些干擾是否存在，以及對(duì)樣品測(cè)定的影響程度。為此，筆者采用高效液相

6、色譜-紫外光檢測(cè)法測(cè)定食品中的羅丹明B,前處理采用有機(jī)溶劑提取，過(guò)氧化鋁固相萃取柱凈化，用甲醇洗脫濃縮定容；儀器檢測(cè)使用紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器，以期得到快速、準(zhǔn)確、靈敏度高的羅丹明B檢測(cè)方法。1材料與方法1.1材料主要試劑。正己烷（色譜級(jí)；丙酮（色譜級(jí)；甲醇（色譜級(jí)；中性氧化鋁（優(yōu)級(jí)純；羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品（純度95.0%。1.1.2主要儀器。1100高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司，配置紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器；JZ-II高速勻漿均質(zhì)器（天津四方；3-18K離心機(jī)（SIGMA;BUCHIR15旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士。1.2方法1.2.1液相色譜條件。色譜柱:C18,4.6imn-150.0mm5jim;進(jìn)樣:5pl;流

7、動(dòng)相:75%甲醇水溶液；流速:1ml/mm;檢測(cè)器:紫外何見(jiàn)光（UV/VIS檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng):550mn。1.2.2羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備。準(zhǔn)確稱取0.1050g羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品溶解于少量水，轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶，定容，得濃度為lOOOmg/kg的羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。1.2.3層析液的活化。稱取100g中性氧化鋁在105h烘2h,放入干燥器冷卻后加入2ml蒸鐳水活化，放置12h后使用。1.2.4測(cè)定方法。分別向液相色譜儀注入等體積的標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣液，按照“1.2.1”的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，記錄色譜峰面積，并與相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)峰面積進(jìn)行比較，外標(biāo)法定量。1.2.5樣品的提取和純化。1 . 2 . 5

8、. 1辣椒油。稱取辣椒油2g,加入201111含5%丙酮的正己烷，振搖10mm,靜置或過(guò)濾分離出上層清液，殘?jiān)尤?0ml含20%丙酮的正己烷重復(fù)提取。合并2次提取液濃縮，然后用81111正己烷溶解殘?jiān)?，用滴管將溶解液加入氧化鋁柱中（氧化鋁柱預(yù)先用10ml正己烷凈化，保證上完樣的氧化鋁柱中下部仍為白色；然后用20ml正己烷淋洗氧化鋁柱，油性物質(zhì)及其他雜質(zhì)可大部分被洗出。待洗柱的流出液基本呈無(wú)色時(shí)，用10ml甲醇洗脫收集濃縮，用甲醇十水定容后，上高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。其他食品。稱取使用了紅辣椒油（粉調(diào)味的食品（如火鍋底料等2g,用20ml含5%丙酮的正己烷振搖提取，殘?jiān)尤?01

9、111含20%丙酮的正己烷重復(fù)提取，合并2次提取液濃縮。因其含有水分，可根據(jù)水分的多少加入適量無(wú)水硫酸鈉脫水，然后用81111正己烷溶解殘?jiān)?，用滴管將溶解液加入氧化鋁柱中（氧化鋁柱預(yù)先用10ml正己烷凈化，保證上完樣的氧化鋁柱中下部仍為白色；然后用101111正己烷淋洗氧化鋁柱，油性物質(zhì)及其他雜質(zhì)可大部分被洗出。待洗柱的流出液基本呈無(wú)色時(shí)，用10ml甲醇洗脫收集濃縮，用甲醇十水定容后，上高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。2結(jié)果與分析ChinaAllrightsreserved.Publishing1louse.ki.nel1994-20124.562N羅丹明BAcademicJournalElectro

10、nic0.30r0.250.20MOK2.1前處理?xiàng)l件的優(yōu)化結(jié)果2.1.1多余水分的去除。由試驗(yàn)可知，采用丙酮、正己烷提取含油脂較多的辣椒油等，可通過(guò)液-液分配除去樣品中的脂溶性色素等干擾成分，無(wú)需進(jìn)行除水處理。而對(duì)于含水較多的樣品，用丙酮、正己烷提取后，可加入適量的無(wú)水硫酸鈉以去除其中的水分。2.1.2淋洗液用量。經(jīng)多次試驗(yàn)，一般樣品用10ml正己烷淋洗即可滿足樣品基質(zhì)干凈、無(wú)干擾且回收率高的要求，但對(duì)含油脂較多的辣椒油樣品，為凈化氧化鋁柱中含量較高的油脂，淋洗時(shí)需用20ml正己烷。2.1.3洗脫液用量。分別對(duì)采用10ml甲醇洗脫、4562i羅丹明bChinaAllrightsreserve

11、d.Publishing1louse.1994-2012AcademicJournalElectronic0.30r0.250.2(1mOH10ml甲醇洗脫后再用5ml甲醇進(jìn)行二次洗脫的樣液進(jìn)行測(cè)定發(fā)現(xiàn)，第2種洗脫樣液中未發(fā)現(xiàn)有羅丹明B,而大量水溶性色素等干擾成分仍保留在氧化鋁萃取柱上，樣品上機(jī)測(cè)定基質(zhì)干凈，無(wú)干擾峰，因此洗脫液用10ml甲醇即可。2種方法洗脫后檢測(cè)到的色譜如圖1s2所示ChinaAllrightsreserved.Publishing1louse.http7/1994-2012AcademicJournalElectronic0.30r0.250.20m0J54.562羅丹明

12、RChinaAllrightsreserved.PublishingIlouse.1994-2012AcademicJournalElectronic0.30r62N羅丹明Bo圖110ml甲醇洗脫后的洗脫液色譜ChinaAllrightsreserved.PublishingHouse.ki.nel1994-2012AcademicJournalElectronic45620.30fjI羅丹明B。小0.20mI圖210ml甲醇洗脫后再用5ml甲醇進(jìn)行二次洗脫的洗脫液色譜2.2色譜條件的優(yōu)化結(jié)果試驗(yàn)了不同比例的甲醇和水及甲醇和乙酸錢作為流動(dòng)相的效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用甲醇和水作為流

13、動(dòng)相，與甲醇和乙酸錢作為流動(dòng)相相比，其響應(yīng)值并沒(méi)有顯著增強(qiáng)（圖3、4 o考慮到鹽類物質(zhì)對(duì)色譜柱的影響，所以選擇用甲醇3水=75衣5（V/V作為流動(dòng)相。2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍以進(jìn)樣濃度（x為橫坐標(biāo)，峰面積（y為縱坐標(biāo)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程與線性范圍，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在0.0052.000mg/kg濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，線性方程y=35.82531X-0.132385,相關(guān)系數(shù)流動(dòng)相為甲醇和水的羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖4流動(dòng)相為甲醇和乙酸鐵的羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品色譜為0.99998（圖5O圖5標(biāo)準(zhǔn)曲線5 .4方法的回收率與精密度分別測(cè)定了在5、10、50jig/kg加標(biāo)水平時(shí)羅丹明B的回收率，

14、結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，該方法有較高的準(zhǔn)確度和可靠性。表1辣椒油與火鍋底料中羅丹明B的加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6加標(biāo)量Ng/kg辣椒油平均回收率%RSD/%火鍋底料平均回收率%RSD/%580.91.381.41.21087.41.088.60.850樣品的測(cè)定結(jié)果利用該方法對(duì)100多種樣品進(jìn)行提取、凈化，利用高效液相色譜紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)1例樣品檢出羅丹明B。未檢出樣品色譜及辣椒油陽(yáng)性樣品色譜分別見(jiàn)圖6、7。3結(jié)論(1由試驗(yàn)得知，羅丹明B在0.0052.OOOmg/kg濃度范0.02f0.010123456789時(shí)間Hmin未檢出樣品色譜圖7辣椒油陽(yáng)性樣品色譜

15、圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.99998;方法的定量檢測(cè)限為0.OO5mg/kg,且平均回收率高。(2樣品先經(jīng)過(guò)有機(jī)溶劑提取、氧化鋁固相萃取柱吸附凈化等處理過(guò)程，再用高效液相色譜紫外可見(jiàn)光法進(jìn)行測(cè)定的檢測(cè)方法，具有前處理簡(jiǎn)便、凈化效果良好，準(zhǔn)確度、精密度較高，檢出限、回收率均能滿足檢測(cè)要求的特點(diǎn)。該研究增加了羅丹明B的液相檢測(cè)選擇，是食品檢測(cè)方法上的又一新突破。參考文獻(xiàn)1黃保軍，李建軍，屈凌波.羅丹明B熒光光譜機(jī)理的研究J.天津師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版，2005,25(3:8-10.2盧士英，鄒明強(qiáng).食品中常見(jiàn)的非食用色素的危害與檢測(cè)J.中國(guó)儀器儀表,200火8:45-50.

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