對蝦白斑綜合癥和肝胰腺壞死癥生態(tài)防控技術

1、對蝦白斑綜合癥和肝胰腺壞死癥生態(tài)防控技術l對蝦是全球性水產養(yǎng)殖種類，也是全球交易量最大的水產品對蝦是全球性水產養(yǎng)殖種類，也是全球交易量最大的水產品（20111802011180其他對蝦養(yǎng)殖國家中國l 我國是全球對蝦養(yǎng)殖產量第一大國，我國是全球對蝦養(yǎng)殖產量第一大國，20121652012165萬噸，占全球養(yǎng)殖萬噸，占全球養(yǎng)殖產量的產量的40%40%Two diseases, WSS and HPNS, have caused huge economic loss in the global culturing shrimp 自自19881988年年WSSWSS爆發(fā)以來，困擾全球對蝦養(yǎng)殖產業(yè)爆發(fā)以

2、來，困擾全球對蝦養(yǎng)殖產業(yè)對蝦白斑綜合癥（對蝦白斑綜合癥（WSSWSS）和肝胰腺壞死癥）和肝胰腺壞死癥(HPNS)(HPNS)是制約全球對蝦養(yǎng)殖產是制約全球對蝦養(yǎng)殖產業(yè)發(fā)展的最主要障礙業(yè)發(fā)展的最主要障礙（年）（噸） 1993-19981993-1998年，我國池塘養(yǎng)殖對蝦年，我國池塘養(yǎng)殖對蝦發(fā)病率發(fā)病率90%90%，發(fā)病池塘對蝦，發(fā)病池塘對蝦死亡率接死亡率接 近近100%100%，年直接經濟損失，年直接經濟損失3030多億。多億。我國對蝦養(yǎng)殖產業(yè)陷入了嚴重的困我國對蝦養(yǎng)殖產業(yè)陷入了嚴重的困 境，境，產量由產量由世界第世界第1 1跌至第跌至第6 6 20082008年，農業(yè)部新修訂的年，農業(yè)部新修

3、訂的一、二、三類動物疫病病種名錄一、二、三類動物疫病病種名錄將白斑將白斑 綜合癥列為綜合癥列為一類動物疫病一類動物疫病 因病導致的對蝦原初產品質量安全問題突出，如氯霉素事件因病導致的對蝦原初產品質量安全問題突出，如氯霉素事件 國際上稱為早期死亡綜合癥（國際上稱為早期死亡綜合癥（EMS）/ 急性肝胰腺壞死癥（急性肝胰腺壞死癥（AHPNS），）， 我國對蝦養(yǎng)殖者稱為我國對蝦養(yǎng)殖者稱為“偷死病偷死病”，我們稱為肝胰腺壞死癥（，我們稱為肝胰腺壞死癥（HPNS）。）。 2013年全球養(yǎng)殖對蝦減產年全球養(yǎng)殖對蝦減產23%，泰國減產，泰國減產54%，我國減產，我國減產17%，廣東減產，廣東減產30%。 養(yǎng)殖

4、時間超過養(yǎng)殖時間超過80天池塘的對蝦天池塘的對蝦HPNS發(fā)生率超過了發(fā)生率超過了80%，前中期發(fā)生，前中期發(fā)生HPNS單造單造 養(yǎng)殖產量只有養(yǎng)殖產量只有300斤斤/畝。畝。 年直接經濟損失超過年直接經濟損失超過50億元。億元。肝胰腺壞死癥（肝胰腺壞死癥（hepatopancreas necrosis syndrome, HPNS） 一一、WSS生態(tài)防控技術生態(tài)防控技術（Ecological techniques for controlling WSS）（一）（一）WSS環(huán)境調控防控技術環(huán)境調控防控技術（ Environmtental factors regulating techniques

5、for controlling WSS ）1、理化脅迫的影響、理化脅迫的影響2、對蝦先天性免疫對、對蝦先天性免疫對WSS發(fā)生的影響發(fā)生的影響 3、環(huán)境調控防控技術、環(huán)境調控防控技術（二）（二）WSS生物防控技術生物防控技術(Biological control techniques for WSS) 病毒潛伏感染病毒潛伏感染對蝦個體對蝦個體個體發(fā)生階段：個體發(fā)生階段：環(huán)境脅迫環(huán)境脅迫誘發(fā)潛伏感染轉為急性感誘發(fā)潛伏感染轉為急性感染染群體爆發(fā)流行階段：群體爆發(fā)流行階段：攝食攝食死蝦導致疾病傳播與爆死蝦導致疾病傳播與爆發(fā)發(fā)關鍵控制點關鍵控制點1 1：調控環(huán)境阻止病毒潛伏調控環(huán)境阻止病毒潛伏感染轉為急

6、性感染感染轉為急性感染關鍵控制點關鍵控制點2 2：消除健康對蝦攝食死亡消除健康對蝦攝食死亡對蝦的生態(tài)位，切斷疾病的傳播途徑對蝦的生態(tài)位，切斷疾病的傳播途徑不攜帶不攜帶WSSVWSSV對蝦個體對蝦個體WSSVWSSV致死對致死對蝦個體蝦個體對蝦種群對蝦種群崩潰崩潰 一、一、WSSWSS流行病學及防控的二個關鍵點流行病學及防控的二個關鍵點WSS epidemiology conclude that WSSV latent infection turn to acute infection by environmental stress in shrimp individual and transm

7、it in shrimp population by healthy shrimp eat dead shrimp with WSSV WSS導致養(yǎng)殖對蝦種群崩潰的主要原因：導致養(yǎng)殖對蝦種群崩潰的主要原因：The root reasons of WSS outbreak in shrimp population 養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)種群單一，缺乏與健康對蝦攝食死蝦養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)種群單一，缺乏與健康對蝦攝食死蝦 的優(yōu)勢競爭者；的優(yōu)勢競爭者；(only shrimp population, without competitor with healthy shrimp )誘發(fā)誘發(fā)WSSV潛伏感染轉為急性感染的

8、環(huán)境因子。潛伏感染轉為急性感染的環(huán)境因子。(We need to understanding environmental factors that induce WSSV latent Infection turning to acute infection in individual shrimp ) （一）（一）WSS在養(yǎng)殖對蝦個體中發(fā)生的環(huán)境基礎與防控技術在養(yǎng)殖對蝦個體中發(fā)生的環(huán)境基礎與防控技術1、理化脅迫的影響、理化脅迫的影響 2、對蝦先天性免疫對、對蝦先天性免疫對WSS發(fā)生的影響發(fā)生的影響 3、環(huán)境調控防控技術、環(huán)境調控防控技術 Y=421.894-28.448X1-1.086X 2

9、-1.44 10-3X 3-1.965X 4式中式中Y為凡納濱對蝦的平均存活時間（為凡納濱對蝦的平均存活時間（h），），X1為為pH，X2為為NO2-N的濃度的濃度（mgL-1），），X3為為WSSV的量（的量（copies），），X4為為NH4+-N的濃度（的濃度（mgL-1）。）。 多種水體理化因子對感染多種水體理化因子對感染WSSV凡納濱對蝦影響凡納濱對蝦影響斑節(jié)對蝦桿狀病毒斑節(jié)對蝦桿狀病毒(MBV)數(shù)量與主要水體理化因子的關系數(shù)量與主要水體理化因子的關系Y= -12.089X1+1.216X2+2.734X3+0.258X4式中式中Y=MBV在斑節(jié)對蝦體內的相對數(shù)量在斑節(jié)對蝦體內的相對

10、數(shù)量; X1=抵抗力抵抗力;X2=對蝦養(yǎng)殖水體的鹽度對蝦養(yǎng)殖水體的鹽度(0/00); X3=對蝦養(yǎng)對蝦養(yǎng)殖水體氨態(tài)氮濃度殖水體氨態(tài)氮濃度(ug/L); X4=對蝦養(yǎng)殖水體亞硝酸氮濃度對蝦養(yǎng)殖水體亞硝酸氮濃度(ug/L) 養(yǎng)殖水體理化因子與病毒數(shù)量和對蝦存活時間的關系養(yǎng)殖水體理化因子與病毒數(shù)量和對蝦存活時間的關系 對蝦對蝦TOLL和和IMD途徑調控白斑綜合癥病毒（途徑調控白斑綜合癥病毒（WSSV）復制）復制 LvDorsal and LvLvRelish regulate WSSV replication 內質網脅迫的非折疊蛋白反應途徑與白斑綜合癥復制的關系內質網脅迫的非折疊蛋白反應途徑與白斑綜

11、合癥復制的關系 Unfolded protein response (UPR) regulate WSSV replication 對蝦抗對蝦抗WSSV途徑途徑 L. vannamei anti-WSSV pathway（1 1）對蝦）對蝦 TLRTLR和和IMDIMD途徑調控途徑調控AMPAMP表達表達LvTLR1-3LvSPZ1-3InfectionMyD88TubeLvPelleLvTRAF6降解LvDorsalCactusAMPs PGRP-LCLvIMDFADDLvIKKsAMPs 降解LvRelish鑒定了對蝦定了對蝦TLR和和IMD信號轉導通路的關鍵基因；信號轉導通路的關鍵基因；

12、闡明了闡明了TLR和和IMD途徑調控抗菌肽表達。途徑調控抗菌肽表達。1、在對蝦先天性免疫途徑調控、在對蝦先天性免疫途徑調控WSSV復制復制 WSSV 利用利用 TLR途徑促進病毒基因表達途徑促進病毒基因表達 WSSV utilizing NF-B activation to favor its replications WSSV InfectionMyD88TubeLvPelleLvTRAF6LvDorsalWSSV449:Tube like proteinViral gene including WSSV069 WSSV303 and WSSV371發(fā)現(xiàn)對蝦發(fā)現(xiàn)對蝦TLRTLR信號轉導途徑可

13、以促進病毒基因表達信號轉導途徑可以促進病毒基因表達 Wang PH，etc. Dev Comp Immunol. 2011 Jan;35(1):105-14. Huang XD, etc. Dev Comp Immunol. 2010 Feb;34(2):107-13.Huang XD, etc. Fish Shellfish Immunol. 2009 Aug;27(2):230-8.Wang PH, etc. Mol Immunol. 2009 May;46(8-9):1897-904Yang LS, etc. Mol Immunol. 2007 Mar;44(8):1999-2008.W

14、SSV抑制了抑制了cactus-dorsal負調控途徑負調控途徑WSSV的復制依賴對蝦的復制依賴對蝦NF-kB活性活性Litopenaeus vannamei NF-B is required for WSSV replicationRandal J. et al. 20022、UPR pathways regulated WSSV replicationFig.1 凡納濱凡納濱XBP1 mRNA特征分析特征分析。(A) XBP1 mRNA的二級結構的二級結構. (B) DTT刺激和熱激引起刺激和熱激引起XBP1 mRNA的切割的切割. (C) XBP1 mRNA切割位點分析切割位點分析. 方

15、框之內的序列為預測切割位點，方框之內的序列為預測切割位點，AS1和和AS2為兩種實際切割位點為兩種實際切割位點. (D) 切割之后切割之后XBP1（XBP1s）的編碼區(qū)的）的編碼區(qū)的變化變化。（1）UPR XBP1途徑及其對途徑及其對WSSV基因表達的調控基因表達的調控Fig.3 LvXBP1s對非折疊蛋白反應效應基因對非折疊蛋白反應效應基因Bip的激活作用。的激活作用。（A）報告基因結構示意圖。（）報告基因結構示意圖。（B）LvXBP1上調上調LvBip的表的表達。達。Fig.2 環(huán)境脅迫對環(huán)境脅迫對IRE1-XBP1 通路的通路的影響。（影響。（A）熱激引起的）熱激引起的LvXBP1 mR

16、NA切割。（切割。（B）WSSV感染引起的感染引起的LvXBP1 mRNA切割。切割。Yi-Hong Chen， 2012，Developmental and Comparative ImmunologyLvXBP1sLvXBP1s以以UPREUPRE序列依賴的序列依賴的方式激活方式激活wsv083wsv083（1）UPR XBP1途徑及其對途徑及其對WSSV基因表達的調控基因表達的調控LvATF4以以ATF/CRE序列依賴的方式激活序列依賴的方式激活wsv023 （2）UPR ATF4途徑及其調控途徑及其調控WSSV基因表達基因表達通過通過RNAi 分別敲低分別敲低LvATF4和和LvXBP

17、1后進行后進行WSSV攻毒實驗。與對照組相比，攻毒實驗。與對照組相比，dsLvATF4或是或是dsLvXBP1干擾組死亡率明顯降低。干擾組死亡率明顯降低。DsLvATF4 treatmentedDsLvXBP1 treatmentedWSSV與宿主相互作用與宿主相互作用UPR BRLZ轉錄因子參與轉錄因子參與WSSV基因轉錄調控基因轉錄調控Yi-Hong Chen，Developmental and Comparative Immunology. 2012GFPPBSATF424h48h72h（A）wsv023 48小時干擾效果（B）wsv023 RNAi 攻毒死亡率統(tǒng)計 （1）宿主）宿主-病

18、毒病毒 LvCTL1 (lectin)-WSSV Far-WesternLvCTL1NC 點雜交點雜交Pull-Dwon經鑒定的囊膜經鑒定的囊膜蛋白蛋白Fig 9. WSSV感染試驗中，重組感染試驗中，重組LvCTL1對對L. vannamei具有保護作用具有保護作用Fig 8. 鑒定若干與鑒定若干與LvCTL1與相互作用的與相互作用的WSSV囊膜蛋白囊膜蛋白Zhi-Ying Zhao, Fish and Shellfish Immunology.2007Zhi-Ying Zhao, Journal of Virology. 20093、對蝦抗、對蝦抗WSSV途徑途徑2 2、免疫信號通路、免疫

19、信號通路-RNAi-RNAiFig 6. L. vannamei 體內的體內的RNAi有效且具有特異性有效且具有特異性Fig7. WSSV攻毒實驗中，針對病毒的基因的攻毒實驗中，針對病毒的基因的siRNA對對凡納濱凡納濱蝦具有保護作用蝦具有保護作用Yue Wu，Aquaculture. 2007LvPashaLvSVCs啟動子啟動子LvArs2LvTRBP1LvAgo2LvDicer2miRNAsiRNAsiRISC/siRLCLvArs2與與LvPasha、LvDicer2相互作用相互作用 L。 vannamei siRISC復合物亞基間相互作用復合物亞基間相互作用Yi-Hong Chen，

20、 2011，Developmental and Comparative ImmunologyYi-Hong Chen， 2012，F(xiàn)ish and Shellfish ImmunityLvDicer2上調上調LvSVCs的表達的表達 3 3、對蝦核酸誘導抗病毒免疫、對蝦核酸誘導抗病毒免疫 對蝦可能具有類似脊椎動物對蝦可能具有類似脊椎動物的干擾素誘導抗病毒途徑的干擾素誘導抗病毒途徑測定指標正常范圍必須采取措施的閾值測定周期pH8.2-8.88 或9或日波動0.52次/天DO3-632次/天NH4+-N0-0.10. 151次/天NO2-N0-0.10.21次/天H2S0-0.010.0151次/

21、天余氯00.11次/5天鹽度按蝦種和季節(jié)定1次/5天透明度30-5060或201次/3天總堿度80-160601次/7天總硬度80-120601次/7天弧菌0-500 3000個/ml1次/5天總菌0-100010000個/ml1次/5天總氮1次/5天總磷100-300ppm300或501次/5天可溶性鈣20-50100或101次/5天白班病毒0100個/mg組織1次/10天 4、理化因子調控防控對蝦病毒病個體發(fā)生、理化因子調控防控對蝦病毒病個體發(fā)生建立了測水調水理化因子指標體系建立了測水調水理化因子指標體系 1）高位池對蝦養(yǎng)殖模式中的應用）高位池對蝦養(yǎng)殖模式中的應用凡納濱對蝦每造平均單產達凡

22、納濱對蝦每造平均單產達9噸噸/公頃，最高達公頃，最高達75噸噸/公頃；公頃；斑節(jié)對蝦每造平均單產達斑節(jié)對蝦每造平均單產達6噸噸/公頃，最高達公頃，最高達10.7噸噸/公頃。公頃。高位蝦池高位蝦池病害控制技術病害控制技術水質調控技術水質調控技術高效環(huán)保飼料高效環(huán)保飼料高位高位池對池對蝦養(yǎng)蝦養(yǎng)殖模殖模式式集成集成 傳統(tǒng)蝦池改造傳統(tǒng)蝦池改造管理方便管理方便2）地膜對蝦養(yǎng)殖模式）地膜對蝦養(yǎng)殖模式凡納濱對蝦每造平均單產達凡納濱對蝦每造平均單產達8噸噸/公頃，最高達公頃，最高達30噸噸/公頃；公頃；斑節(jié)對蝦每造平均單產達斑節(jié)對蝦每造平均單產達6噸噸/公頃，最高達公頃，最高達10噸噸/公頃。公頃。地膜蝦池地

23、膜蝦池病害控制技術病害控制技術水質調控技術水質調控技術高效環(huán)保飼料高效環(huán)保飼料地膜地膜池對池對蝦養(yǎng)蝦養(yǎng)殖模殖模式式集成集成 利用了對蝦廣鹽性利用了對蝦廣鹽性 切斷切斷WSSV部分的水平傳播途徑部分的水平傳播途徑 減少了病毒病暴發(fā)的風險減少了病毒病暴發(fā)的風險 3）低鹽度對蝦養(yǎng)殖模式）低鹽度對蝦養(yǎng)殖模式低鹽度蝦池低鹽度蝦池病害控制技術病害控制技術水質調控技術水質調控技術高效環(huán)保飼料高效環(huán)保飼料低鹽度低鹽度對蝦養(yǎng)對蝦養(yǎng)殖模式殖模式集成集成 （二）對蝦WSS生物防控基礎與技術 （1 1）健康對蝦攝食死亡對蝦健康對蝦攝食死亡對蝦是是WSSWSS傳播的主要途傳播的主要途徑徑 1、對蝦WSS生物防控基礎（2

24、 2）在對蝦養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)中，引入）在對蝦養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)中，引入魚類魚類作為攝作為攝食死亡對蝦食死亡對蝦優(yōu)勢競爭者優(yōu)勢競爭者，阻斷健康對蝦攝，阻斷健康對蝦攝食死亡對蝦，食死亡對蝦，切斷切斷WSSWSS的傳播途徑的傳播途徑（3 3）根據攝食能力、攝食方式、活動能力和）根據攝食能力、攝食方式、活動能力和生態(tài)適應性，篩選出生態(tài)適應性，篩選出1818種魚類，種魚類，開展魚類對開展魚類對健康對蝦、患病對蝦和死亡對蝦攝食能力、攝健康對蝦、患病對蝦和死亡對蝦攝食能力、攝食選擇性等生物防控關鍵參數(shù)的研究食選擇性等生物防控關鍵參數(shù)的研究（4 4）揭示了凡納濱對蝦規(guī)格與感染）揭示了凡納濱對蝦規(guī)格與感染WSSVWSSV

25、死亡的時間關系死亡的時間關系（5 5）揭示了）揭示了WSSWSS在養(yǎng)殖凡納濱對蝦種群中的傳播速度在養(yǎng)殖凡納濱對蝦種群中的傳播速度（6 6）建立了對蝦）建立了對蝦WSSWSS生物防控數(shù)學模型生物防控數(shù)學模型確定了用于生物防控的魚類及規(guī)格、數(shù)量等技術參數(shù)確定了用于生物防控的魚類及規(guī)格、數(shù)量等技術參數(shù) Mathematical models for WSS transmission and the biocontrol of WSS in a shrimp population in a pond2 2、建立了、建立了7 7套適合不同鹽度和地區(qū)的生物防控技術套適合不同鹽度和地區(qū)的生物防控技術（1 1

26、）對蝦）對蝦WSSWSS草魚生物防控技術草魚生物防控技術( (鹽度鹽度8 8以下以下) ) Biological control of WSS by grass carp（2 2）對蝦）對蝦WSSWSS革胡子鯰生物防控技術革胡子鯰生物防控技術( (鹽度鹽度6 6以下以下) ) Biocontrol of WSS by claris catfish （3 3）對蝦）對蝦WSSWSS草魚和革胡子鯰聯(lián)合生物防控技術草魚和革胡子鯰聯(lián)合生物防控技術( (鹽度鹽度6 6以下以下) ) Combined biological treatment of WSS by grass carp and claris

27、 catfish （4 4）對蝦）對蝦WSSWSS美國紅魚生物防控技術美國紅魚生物防控技術( (所有鹽度所有鹽度) ) Biocontrol of WSS by red drum（5 5）對蝦）對蝦WSSWSS軍曹魚生物防控技術軍曹魚生物防控技術( (鹽度鹽度1515以上以上) ) Biocontrol of WSSV by cobia （6 6）日本囊對蝦）日本囊對蝦WSSWSS石斑魚防控技術石斑魚防控技術( (鹽度鹽度1313以上以上) ) Biocontrol of by groupers（7 7）對蝦）對蝦WSSWSS羅非魚生物防控技術羅非魚生物防控技術( (鹽度鹽度2020以下以下)

28、 ) Biocontrol of WSSV by tilapia傳統(tǒng)養(yǎng)殖模式生態(tài)防控模式舉例：舉例：對蝦對蝦WSSWSS革胡子鯰生物防控技革胡子鯰生物防控技術，術，在一個有在一個有110110口池塘的養(yǎng)殖口池塘的養(yǎng)殖場應用，養(yǎng)殖成功率場應用，養(yǎng)殖成功率100%100%，產量，產量提高提高2-52-5倍倍 對蝦病毒病草魚生物防控技術對蝦病毒病草魚生物防控技術 適合鹽度適合鹽度6 6以下養(yǎng)殖區(qū)；以下養(yǎng)殖區(qū)； 適合對蝦苗種密度低于適合對蝦苗種密度低于1010萬尾萬尾/ /畝；畝； 對蝦苗種養(yǎng)殖對蝦苗種養(yǎng)殖20203030天，每畝投放天，每畝投放30306060尾，每尾尾，每尾1kg1kg左右的草魚。

29、左右的草魚。 比照對蝦養(yǎng)殖的正常管理方法，培好水后，投放比照對蝦養(yǎng)殖的正常管理方法，培好水后，投放1.0cm左右的蝦苗，每畝左右的蝦苗，每畝10萬尾以下。萬尾以下。由于草魚在鹽度大于由于草魚在鹽度大于6的水體中攝食能力較弱，所以選用草魚的養(yǎng)殖水體的鹽度在的水體中攝食能力較弱，所以選用草魚的養(yǎng)殖水體的鹽度在6以下范圍以下范圍內。如果養(yǎng)殖水體的鹽度大于內。如果養(yǎng)殖水體的鹽度大于7.5，可用添加淡水的方法降低鹽度，將鹽度控制在上述范圍，可用添加淡水的方法降低鹽度，將鹽度控制在上述范圍內。適時投放草魚。對蝦養(yǎng)殖到內。適時投放草魚。對蝦養(yǎng)殖到2030日左右，對蝦病害暴發(fā)前投放草魚。投放的草魚數(shù)量日左右，

30、對蝦病害暴發(fā)前投放草魚。投放的草魚數(shù)量不能少于不能少于30尾尾/畝，每尾畝，每尾1kg以上，并可根據放養(yǎng)蝦苗的密度適當增加，但不能超過以上，并可根據放養(yǎng)蝦苗的密度適當增加，但不能超過60尾尾/畝。畝。 To determine the capacity of fish in controlling WSS, we performed the experiments in four sizes of shrimps (1.3 g, 2.5 g, 5.0 g, 7.8 g). We released one 1-kg grass carp with 750 healthy shrimps in 1

31、0 m2 tank. In this setting, we released different number of infected shrimps (see Exp. Table 4). Stars (*) represent the number of infected shrimps successfully controlled by one 1-kg grass carp while clear circles (o) represent the number of infected shrimps that failed to be controlled by one 1-kg

32、 grass carp. Based on the model 3, we simulated to determine the threshold (red line) of the number of infected shrimps controlled by one 1-kg grass carp. The red line is simulated highest value of one 1-kg fish that can control the number of infected shrimps with different weights of shrimps. 爆發(fā)流行期

33、爆發(fā)流行期 環(huán)境調控防控技術應用期環(huán)境調控防控技術應用期 環(huán)境調控防控與生物防控環(huán)境調控防控與生物防控集成技術應用期集成技術應用期白斑綜合癥在我國養(yǎng)殖對蝦發(fā)病率由白斑綜合癥在我國養(yǎng)殖對蝦發(fā)病率由90%90%下降到下降到5%5%以下，以下，基本消除了對蝦白斑綜合癥對我國對蝦養(yǎng)殖業(yè)的威脅?；鞠藢ξr白斑綜合癥對我國對蝦養(yǎng)殖業(yè)的威脅。中國對蝦養(yǎng)殖產量（中國對蝦養(yǎng)殖產量（1991-20121991-2012）（一）肝胰腺壞死癥病因（一）肝胰腺壞死癥病因（二）肝胰腺壞死癥生態(tài)防控技術（二）肝胰腺壞死癥生態(tài)防控技術（三）對蝦養(yǎng)殖容納量探討（三）對蝦養(yǎng)殖容納量探討二、肝胰腺壞死癥病因分析與生態(tài)防控技術二

34、、肝胰腺壞死癥病因分析與生態(tài)防控技術Ecological control techniques for hepatopancreas necrosis sydrome 正常肝胰腺正常肝胰腺肝胰腺壞死癥肝胰腺壞死癥（1） 對蝦肝胰腺壞死癥組織病理分析對蝦肝胰腺壞死癥組織病理分析（2 2）對蝦樣品采集和細菌分離）對蝦樣品采集和細菌分離 分別在分別在中國廣東省番禺、珠海、中山、江門、陽江、茂名、湛江、惠州、汕中國廣東省番禺、珠海、中山、江門、陽江、茂名、湛江、惠州、汕尾、河北省唐山、廣西省、海南省等地尾、河北省唐山、廣西省、海南省等地采樣，取采樣，取“空腸空胃空腸空胃”等癥狀的等癥狀的 172尾尾病

35、蝦病蝦的的肝胰腺、腸道、血淋巴和患病仔蝦進行細菌分離，分別涂布肝胰腺、腸道、血淋巴和患病仔蝦進行細菌分離，分別涂布LB、TCBS、BHI等培養(yǎng)等培養(yǎng)基并進行純化，基并進行純化，共收集共收集1435株細菌株細菌。 采用傳統(tǒng)微生物學鑒定方法、采用傳統(tǒng)微生物學鑒定方法、16S rDNA基因擴增、基因擴增、BIOLOG Gen /Gen Microstation自動微生物鑒定自動微生物鑒定系統(tǒng)等方法，系統(tǒng)等方法，鑒定細菌鑒定細菌941株，分別屬于株，分別屬于10個屬，個屬，73種細菌。種細菌。 人工感染人工感染 用副溶血弧菌用副溶血弧菌V1、蘇云金芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌Z7、V1+Z7混合菌分別注射

36、感染混合菌分別注射感染對蝦，在感染后對蝦，在感染后6天全部死亡，死亡率天全部死亡，死亡率100%，表現(xiàn)典型肝胰腺壞死癥狀。，表現(xiàn)典型肝胰腺壞死癥狀。對照組死亡率為對照組死亡率為12%，沒有肝胰腺壞死癥狀。，沒有肝胰腺壞死癥狀。其中：其中：鑒定有副溶血弧菌的對蝦鑒定有副溶血弧菌的對蝦51尾，占鑒定對蝦總數(shù)的尾，占鑒定對蝦總數(shù)的52.6%；鑒定有蠟樣芽胞桿菌的對蝦鑒定有蠟樣芽胞桿菌的對蝦27尾，占鑒定對蝦總數(shù)的尾，占鑒定對蝦總數(shù)的27.8%；鑒定有霍亂弧菌的對蝦鑒定有霍亂弧菌的對蝦23尾，占鑒定對蝦總數(shù)的尾，占鑒定對蝦總數(shù)的23.7%；鑒定有嗜水氣單胞菌的對蝦鑒定有嗜水氣單胞菌的對蝦19尾，占鑒定

37、對蝦總數(shù)的尾，占鑒定對蝦總數(shù)的19.6%；鑒定有蘇云金芽胞桿菌的對蝦鑒定有蘇云金芽胞桿菌的對蝦17尾，占鑒定對蝦總數(shù)的尾，占鑒定對蝦總數(shù)的17.5%；鑒定有金橙黃微小桿菌的對蝦鑒定有金橙黃微小桿菌的對蝦14尾，占鑒定對蝦總數(shù)的尾，占鑒定對蝦總數(shù)的14.4%；其他細菌也分別在不同尾蝦中檢出。其他細菌也分別在不同尾蝦中檢出。HPNS不是有單一某種細菌所導致不是有單一某種細菌所導致 抗性基因檢測結果抗性基因檢測結果抗性基因抗性基因strAfloRSul1Sul2gyrA第一批第一批4525594080第二批第二批10613918第三批第三批258233586合計合計80399584184百分比百分比

38、22.99%11.21%27.29%24.14%52.87% （3）病毒性病因分析）病毒性病因分析 對蝦對蝦WSSV、IHHNV、MBV、BP、TSV、YHV、IMNV等等11中病毒檢測和人工感染，證明中病毒檢測和人工感染，證明HPNS不是由不是由病毒所致。病毒所致。 亞硝酸氮亞硝酸氮 N均值均值（SD)均值的均值的 95% 置信區(qū)間置信區(qū)間顯著性顯著性下限下限上限上限發(fā)病前發(fā)病前4天到天到發(fā)病當發(fā)病當天濃度最大值天濃度最大值20497.160（509.205）258.845735.475P=0.022沒發(fā)病塘濃度最大值沒發(fā)病塘濃度最大值775.000（95.1898）-13.036163.0

39、36發(fā)病前發(fā)病前4天到天到發(fā)病當發(fā)病當天濃度天濃度平均平均值值20429.915（414.543）235.903623.927P=0.025沒發(fā)病塘濃度平均值沒發(fā)病塘濃度平均值718.486（18.3561）1.50935.462 分別比較發(fā)病塘與沒發(fā)病塘亞硝酸氮濃度最大值和平均值，通過單因素方差分析，P0.05,差異顯著。結果表明，亞硝酸氮與發(fā)病具有密切關系。根據結果分析得亞硝酸氮對發(fā)病的閾值為：163ug/L259ug/L。達到或者超過閾值，認為很可能誘發(fā)對蝦發(fā)病。亞硝酸氮和氨氮對發(fā)病的影響亞硝酸氮和氨氮對發(fā)病的影響 （4）環(huán)境因素分析）環(huán)境因素分析（5）飼料投喂量與對蝦發(fā)病的關系）飼料投

40、喂量與對蝦發(fā)病的關系在第40天，第50天，第70天的養(yǎng)殖時間點上，茂名示范點生病塘的當天平均投喂量都極顯著（P0.01)的高于塘沽示范點各正常養(yǎng)殖塘。正常塘平均畝產557.36斤，發(fā)病塘平均畝產479.2斤。時間示范點樣本量平均值（斤/萬尾畝）平均值（斤/畝）標準差顯著性檢驗第40天投料量茂名（生?。?72.6816.89 0.50816P=0.000塘沽（正常）160.412.11 0.17549第50天投料量茂名（生?。?73.3820.92 0.81227P=0.000塘沽（正常）160.884.07 0.47407第70天投料量茂名（生?。?3.8723.01 1.26945P=0.0

41、01塘沽（正常）161.798.15 1.12595 小結： 通過發(fā)病時減料前后水質濃度對比可知，飼料投喂量是影響水質因子的重要因素。（5）停止投料對水體理化因子的影響）停止投料對水體理化因子的影響 （6）放苗密度與對蝦發(fā)病的關系）放苗密度與對蝦發(fā)病的關系樣本量平均值(萬尾/畝)標準差顯著性檢驗正常143.8791.3180P=0.002生病36.8000.3464單因素方差分析顯示：在溫州示范點，發(fā)病的養(yǎng)殖塘的平均放苗密度極顯著的大于沒發(fā)病的塘 （P=0.0020.01）。（一）肝胰腺壞死癥病因研究與分析（一）肝胰腺壞死癥病因研究與分析1、肝胰腺壞死癥發(fā)生與條件致病菌的關系、肝胰腺壞死癥發(fā)生

42、與條件致病菌的關系2、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有毒藻類的關系3、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有害理化影子的關系、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有害理化影子的關系4、肝胰腺壞死癥發(fā)生的生態(tài)系統(tǒng)問題1.00E+052.10E+064.10E+066.10E+068.10E+061.01E+071.21E+07123456789各塘水體總菌發(fā)病前后對比發(fā)病前發(fā)病后1.00E+043.00E+045.00E+047.00E+049.00E+041.10E+051.30E+051.50E+051.70E+05123456789各塘水體弧菌發(fā)病前后對比發(fā)病前發(fā)病后珠海：發(fā)病前后水體細菌弧菌數(shù)量珠海：發(fā)病前后水體細菌弧菌數(shù)量（1）1-

43、6號塘發(fā)病后水體總菌弧菌數(shù)量下降，7-9號塘發(fā)病后水體總菌弧菌數(shù)量上升。（2）1-6號塘發(fā)病后采取換水、停料的措施，使得水體細菌弧菌數(shù)量下降。7-9號塘在臺風雨天過后發(fā)病，結合藻類分析推測，由于陰雨天氣導致藻類死亡，營養(yǎng)物質不能轉化使得細菌弧菌數(shù)量上升，導致發(fā)病。珠海：發(fā)病前后蝦體細菌弧菌數(shù)量珠海：發(fā)病前后蝦體細菌弧菌數(shù)量1.00E+063.00E+065.00E+067.00E+069.00E+061.10E+071.30E+071.50E+07123456789各塘發(fā)病前后蝦體總菌對比發(fā)病前發(fā)病后1.00E+056.00E+051.10E+061.60E+062.10E+062.60E+0

44、63.10E+063.60E+064.10E+06123456789各塘發(fā)病前后蝦體弧菌對比發(fā)病前發(fā)病后 各塘發(fā)病后蝦體總菌數(shù)量相比發(fā)病前有明顯下降。說明發(fā)病前蝦體細菌數(shù)量已經達到對蝦不能承受的程度，而發(fā)病后，經過停料換水等處理，對蝦體內的細菌數(shù)量有所下降。 結合藻類分析的數(shù)據，發(fā)現(xiàn)藻類數(shù)量低于正常養(yǎng)殖水體中藻類數(shù)量，珠?；爻靥辽鷳B(tài)系統(tǒng)并不完整，從而導致致病性細菌的大量繁生，最終導致對蝦發(fā)病。海南：發(fā)病前后水體細菌弧菌數(shù)量海南：發(fā)病前后水體細菌弧菌數(shù)量0.00E+005.00E+041.00E+051.50E+052.00E+052.50E+055月18日5月23日5月27日5月31日6月5

45、日6月10日水體總菌變化圖水體總菌變化圖102103104105202203102、202塘，27號發(fā)病105塘，31號發(fā)病103塘，6月2號發(fā)病104、203塘，6月7號發(fā)病0.00E+002.00E+034.00E+036.00E+038.00E+031.00E+041.20E+041.40E+041.60E+041.80E+045月18日5月23日5月27日5月31日6月5日6月10日水體弧菌變化圖水體弧菌變化圖102103104105202203102、202塘，27號發(fā)病105塘，31號發(fā)病103塘，6月2號發(fā)病104、203塘，6月7號發(fā)病海南：發(fā)病前后蝦體細菌弧菌數(shù)量海南：發(fā)病前

46、后蝦體細菌弧菌數(shù)量0.00E+005.00E+041.00E+051.50E+052.00E+052.50E+053.00E+055月18日5月23日5月27日5月31日6月5日6月10日蝦樣總蝦樣總菌菌變化圖變化圖102103104105202203102、202塘，27103塘，6月2號0.00E+005.00E+021.00E+031.50E+032.00E+032.50E+033.00E+033.50E+035月18日5月23日5月27日5月31日6月5日6月10日蝦樣蝦樣弧菌弧菌變化圖變化圖102103104105202203102、202塘，27號發(fā)病105塘，31號發(fā)病103塘，

47、6月2號發(fā)病104、203塘，6月7號發(fā)病104、203塘，6月7號發(fā)病105塘，31號發(fā)病 海南養(yǎng)殖對蝦蝦體總菌弧菌數(shù)量較低，與珠海相比低2個數(shù)量級，結合理化因子分析，推測在藻類和益生菌的調控作用發(fā)揮到最大之后，氨氮等理化因子上升，池塘生態(tài)環(huán)境主要受到理化因子的脅迫。 蝦發(fā)病后水體總菌升高的有4口塘，下降的有11口塘；水體弧菌升高的有8口塘，下降的有7口塘。 結合氣候和藻類檢測情況，導致細菌升高的原因與降雨倒藻有關，停料等因素導致細菌數(shù)的下降。電白：電白： 蝦發(fā)病后蝦體總菌升高有6口塘，下降的有9口塘；蝦體弧菌升高有7口塘，下降有8口塘。 結合氣候和藻類檢測情況，導致細菌升高的原因與降雨倒藻

48、有關，停料等因素導致細菌數(shù)的下降。電白電白（一）肝胰腺壞死癥病因研究與分析（一）肝胰腺壞死癥病因研究與分析1、肝胰腺壞死癥發(fā)生與條件致病菌的關系2、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有毒藻類的關系、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有毒藻類的關系3、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有害理化影子的關系4、肝胰腺壞死癥發(fā)生的生態(tài)系統(tǒng)問題發(fā)病前后，水體優(yōu)勢藻為微囊藻的占總發(fā)病池塘的57.1%，以顫藻為優(yōu)勢藻的池塘占了35.7%，以綠藻為優(yōu)勢藻的池塘占了21.4%，以卵囊藻、偽魚腥藻和色球藻為優(yōu)勢藻的池塘各占了14.3%。以微囊藻、顫藻等有毒藻類為優(yōu)勢藻的池塘占總發(fā)病池塘的92.8%。 （一）肝胰腺壞死癥病因研究與分析（一）肝胰腺壞死癥病因研究與

49、分析1、肝胰腺壞死癥發(fā)生與條件致病菌的關系2、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有毒藻類的關系3、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有害理化影子的關系、肝胰腺壞死癥發(fā)生與有害理化影子的關系4、肝胰腺壞死癥發(fā)生的生態(tài)系統(tǒng)問題海南六口塘均在不同時候有不同程度的發(fā)病，其中102,104,202,203發(fā)病后幾天內有所緩解，發(fā)病程度較輕，103,105發(fā)病幾天后情況有所加重。對比發(fā)病前后各理化因子變化，得出，氨氮與發(fā)病情況相關性較大。00.10.20.30.40.50.60.70.80.9102103104105202203mg/L發(fā)病前后氨氮變化發(fā)病前后氨氮變化發(fā)病前2天發(fā)病前1天發(fā)病發(fā)病后1天發(fā)病后2天00.511.521021

50、03104105202203mg/L發(fā)病前后無機氮變化發(fā)病前后無機氮變化發(fā)病前2天發(fā)病前1天發(fā)病發(fā)病后1天發(fā)病后2天00.20.40.60.811.2102103104105202203mg/L發(fā)病前后硝酸鹽變化發(fā)病前后硝酸鹽變化發(fā)病前2天發(fā)病前1天發(fā)病發(fā)病后1天發(fā)病后2天00.020.040.060.080.10.120.14102103104105202203mg/L發(fā)病前后亞硝酸鹽變化發(fā)病前后亞硝酸鹽變化發(fā)病前2天發(fā)病前1天發(fā)病發(fā)病后1天發(fā)病后2天00.511.522.533.54102103104105202mg/L海南海南-下雨前后無機氮總和變化下雨前后無機氮總和變化下雨前2天下雨前

51、1天下雨下雨后1天下雨后2天00.511.522.53102103104105202mg/L海南海南-下雨前后下雨前后硝酸鹽硝酸鹽變化變化下雨前2天下雨前1天下雨下雨后1天下雨后2天00.050.10.150.2102103104105202mg/L海南海南-下雨前后下雨前后亞亞硝酸鹽變化硝酸鹽變化下雨前2天下雨前1天下雨下雨后1天下雨后2天00.20.40.60.811.21.41.6102202103203104105mg/L海南海南-下雨前后氨氮變化下雨前后氨氮變化下雨前兩天下雨前一天下雨下雨后一天下雨后兩天海南海南此次養(yǎng)殖過程中只下過一場雨，對比下雨前后各態(tài)氮以及無機氮的變化，可以看出

52、在降雨后一天氨氮，無機氮，硝態(tài)氮均明顯上升（尤其是氨氮），這可能是由于陰雨天氣帶來的藻類大量死亡，對無機氮的吸收作用明顯降低，同時對蝦排泄物積累以及藻類死亡會分解出氨氮排放到池塘內，造成氨氮急劇上升。臺風影響下，藻類大量死亡，對無機氮吸收作用減弱，臺風過后3天氨氮和無機氮總量均驟升。00.20.40.60.811.21.41.61.81號塘2號塘3號塘4號塘5號塘6號塘7號塘8號塘9號塘mg/L臺風影響下氨氮變化臺風影響下氨氮變化臺風臺風臺風臺風后1天臺風后2天臺風后3天臺風后4天00.20.40.60.811.21.41.61.81號塘2號塘3號塘4號塘5號塘6號塘7號塘8號塘9號塘mg/L

53、臺風影響下無機氮變化臺風影響下無機氮變化臺風臺風臺風臺風后1天臺風后2天臺風后3天臺風后4天珠海珠海00.20.40.60.811.2102103104105202203mg/L控料前后氨氮變化控料前后氨氮變化前2天前1天控料當天控料后1天控料后2天控料后3天控料后4天控料后5天00.511.522.53103104105202203mg/L控料前后無機氮總和變化控料前后無機氮總和變化前2天前1天當天后1天后2天后3天后4天后5天00.020.040.060.080.10.120.14102103104105202203mg/L控料前后亞硝酸鹽變化控料前后亞硝酸鹽變化前2天前1天當天后1天后2

54、天后3天后4天后5天00.511.522.5103104105202203mg/L控料前后硝酸鹽變化控料前后硝酸鹽變化前2天前1天當天后1天后2天后3天后4天后5天海南：海南：控料后5天，水體營養(yǎng)鹽輸入穩(wěn)定，氨氮總體呈現(xiàn)一個下降的態(tài)勢，無機氮總體呈現(xiàn)稍微下降至穩(wěn)定，控料五天后硝酸鹽先下降后升高（后期升高部分主要是氨氮轉化），控料過程中發(fā)病緩解，對蝦狀態(tài)逐漸變好，無機氮穩(wěn)定且其中有害理化因子氨氮的逐漸轉化為硝酸鹽。0102030405060708000.511.522.533.544.54176441766417674176941770417714177241773417744177541776

55、41777417784177941780417814178241783417854178641787417884178941790417914179241793417944179541796417974179841799418004180141802418034180441805Column02Column03103號塘三氮以及投料量號塘三氮以及投料量103（氨氮）103號（硝酸鹽）103號（亞硝）103號塘（投料量）千克（千克（Kg）毫克毫克/升（升（mg/L）發(fā)病發(fā)病加重加重緩解緩解下雨下雨陰天陰天010203040506070809000.511.522.533.544.54176441

56、76641767417694177041771417724177341774417754177641777417784177941780417814178241783417854178641787417884178941790417914179241793417944179541796417974179841799418004180141802418034180441805Column02Column03105號塘三氮以及投料量號塘三氮以及投料量105（氨氮)105號（硝酸鹽）105號（亞硝）105號塘（投料量）千克（千克（Kg）毫克毫克/升（升（mg/L）發(fā)發(fā)病病緩緩下雨下雨陰天陰天 海南海

57、南電白：電白：天氣變化對水體含氮量的影響天氣變化對水體含氮量的影響 天氣由晴轉多云，水體三態(tài)氮升高；由多云轉為降雨后，水體三態(tài)氮升高；由降雨轉多云，水體三態(tài)氮均降低。淡水中非離子氨占氨態(tài)氮的百分比含量（換算表）淡水中非離子氨占氨態(tài)氮的百分比含量（換算表）From United States Environmental Protection Agency National Library Network溫度和溫度和PH與非離子氨在氨態(tài)氮中的百分比含量成正相關與非離子氨在氨態(tài)氮中的百分比含量成正相關引自：鄒玲媛,承憲成. 非離子氨(UIA)水質評價指標及換算方法J. 水產科學. 2002(02)一

58、般海水一般海水(S = 34 , I = 0.7)(S = 34 , I = 0.7)中非離子氨占氨態(tài)氮的百分比含量（換算表）中非離子氨占氨態(tài)氮的百分比含量（換算表）溫度和溫度和pH與非離子氨在氨態(tài)氮中的百分比含量成正相關，且對比淡水換算表，鹽度（離子強度）與非離子氨與非離子氨在氨態(tài)氮中的百分比含量成正相關，且對比淡水換算表，鹽度（離子強度）與非離子氨在氨態(tài)氮中的百分比含量成負相關在氨態(tài)氮中的百分比含量成負相關電白：電白：藻類數(shù)量和天氣變化對藻類數(shù)量和天氣變化對pH變化值的影響變化值的影響 藻類數(shù)量升高，水體藻類總光合作用增強，水體早晚pH之差增大，藻類數(shù)量降低，藻類總光合作用降低，水體早晚p

59、H之差減小。 天氣由晴天轉陰雨天，藻類光合作用降低，水體早晚pH之差減小，由陰雨天氣轉多云，藻類光合作用增強，水體早晚pH之差增大。實際上，對蝦池塘藻類、條件致病菌和營養(yǎng)鹽（含氨氮、亞硝酸鹽）之間實際上，對蝦池塘藻類、條件致病菌和營養(yǎng)鹽（含氨氮、亞硝酸鹽）之間發(fā)生了三個發(fā)生了三個“級聯(lián)效應級聯(lián)效應”：1、第一、第一“級聯(lián)效應級聯(lián)效應”：氣候變化（臺風、溫度劇變、陰雨等），藻類大量死亡：氣候變化（臺風、溫度劇變、陰雨等），藻類大量死亡 營養(yǎng)鹽增加營養(yǎng)鹽增加+池底腐敗池底腐敗 水體細菌（含弧菌）數(shù)量增加水體細菌（含弧菌）數(shù)量增加條件致病菌脅迫；條件致病菌脅迫；2、第二、第二“級聯(lián)效應級聯(lián)效應”：長

60、周期的天氣晴朗溫度適合的情況下，容易產生老化藻類和：長周期的天氣晴朗溫度適合的情況下，容易產生老化藻類和老化益生菌（非功能性藻類和非功能性益生菌）老化益生菌（非功能性藻類和非功能性益生菌）造成有害理化因子、有毒藻類造成有害理化因子、有毒藻類和條件致病菌的脅迫。和條件致病菌的脅迫。 3、第三個、第三個“級聯(lián)效應級聯(lián)效應”：功能性藻類、功能益生菌和理化調節(jié)劑等發(fā)揮最大功能：功能性藻類、功能益生菌和理化調節(jié)劑等發(fā)揮最大功能池塘營養(yǎng)鹽無法有效消減池塘營養(yǎng)鹽無法有效消減造成有害理化因子脅迫和有毒藻類的脅迫。造成有害理化因子脅迫和有毒藻類的脅迫。維持池塘生態(tài)系統(tǒng)功能性藻類和功能性益生菌狀態(tài)、消減池塘水體和