HIV實(shí)驗(yàn)室管理及質(zhì)量控制

1、HIV實(shí)驗(yàn)室管理及實(shí)驗(yàn)室管理及質(zhì)量控制質(zhì)量控制衛(wèi)生部有關(guān)衛(wèi)生部有關(guān)HIV檢測(cè)規(guī)范檢測(cè)規(guī)范全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作規(guī)范全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作規(guī)范 -2004年發(fā)布年發(fā)布全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作管理辦法全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作管理辦法 （2006） HIV初篩實(shí)驗(yàn)室初篩實(shí)驗(yàn)室 要有3名以上醫(yī)技人員，內(nèi)含中級(jí)衛(wèi)生技術(shù)職稱人員至少1名從事病毒性疾病血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)工作2年以上接受過(guò)國(guó)家級(jí)或省級(jí)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室舉辦的艾滋病病毒抗體檢測(cè)培訓(xùn)，并獲得上崗證書(shū)。HIVHIV檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的必備條件檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的必備條件一、人員一、人員二、設(shè)備條件二、設(shè)備條件HIV篩查實(shí)驗(yàn)室：篩查實(shí)驗(yàn)室： 有獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)用房（或至少有專用的檢測(cè)臺(tái)），要分清潔區(qū)、半

2、污染區(qū)和污染區(qū)。酶標(biāo)讀數(shù)儀和洗板機(jī)、精確的移液器、普通專用冰箱、離心機(jī)、水浴箱或溫箱、各種污物及消毒設(shè)施、安全防護(hù)用品和恒溫設(shè)施。實(shí)驗(yàn)室的任務(wù)實(shí)驗(yàn)室的任務(wù)篩查中心實(shí)驗(yàn)室篩查中心實(shí)驗(yàn)室（1）對(duì)本地區(qū)按規(guī)定和自愿要求檢測(cè)的對(duì)象作 HIV抗體篩查檢測(cè)。（2）負(fù)責(zé)對(duì)本地區(qū)或本系統(tǒng)內(nèi)其它HIV篩查實(shí)驗(yàn) 室發(fā)現(xiàn)的篩查呈陽(yáng)性反應(yīng)標(biāo)本的復(fù)檢工作。（3）負(fù)責(zé)對(duì)本地區(qū)或本系統(tǒng)內(nèi)其他HIV篩查實(shí)驗(yàn) 室進(jìn)行技術(shù)培訓(xùn)及指導(dǎo)、咨詢服務(wù)、質(zhì)量 管理和質(zhì)量控制等工作。（4）收集、匯總本地區(qū)或本系統(tǒng)內(nèi)其他HIV篩查 實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)數(shù)量及工作情況，上報(bào)省級(jí) HIV確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室。（5）提供檢測(cè)前、后的咨詢服務(wù)。篩查實(shí)驗(yàn)室篩查實(shí)驗(yàn)室

3、（1）對(duì)本地區(qū)按規(guī)定和自愿要求檢測(cè)的對(duì)象作 HIV抗體篩查檢測(cè)；做好檢測(cè)標(biāo)本的登記和 實(shí)驗(yàn)記錄，并做好技術(shù)檔案的管理。（2）及時(shí)將篩查呈陽(yáng)性反應(yīng)的標(biāo)本送HIV抗體篩 查中心實(shí)驗(yàn)室，轉(zhuǎn)送（或直接送）確認(rèn)實(shí) 驗(yàn)室確認(rèn)。（3）定期向當(dāng)?shù)氐腍IV抗體篩查中心實(shí)驗(yàn)室（或省級(jí)HIV確認(rèn)中心）報(bào)告HIV抗體檢測(cè)數(shù)量及情況。（4）提供檢測(cè)前、后的咨詢服務(wù)。艾滋病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理包括質(zhì)量保證、質(zhì)量控制 和質(zhì)量評(píng)價(jià)。一、質(zhì)量保證（QA）（一）行政支持 行政部門(mén)要關(guān)心艾滋病實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)和發(fā)展，保證實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和主要技術(shù)人員的穩(wěn)定，保證實(shí)驗(yàn)室的建筑和設(shè)備需要、給予充足的經(jīng)費(fèi)支持，并進(jìn)行經(jīng)常性監(jiān)督檢查。（

4、二）實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化建設(shè) 艾滋病實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及其建筑、設(shè)施、設(shè)備必須符合艾滋病檢測(cè)工作管理辦法的要求。（三）人員培訓(xùn)及其評(píng)價(jià) 實(shí)驗(yàn)室工作人員上崗前必須接受技術(shù)培訓(xùn)并獲得合格證書(shū)。在工作中要定期或不定期接受復(fù)訓(xùn)。實(shí)驗(yàn)室主管領(lǐng)導(dǎo)應(yīng)定期對(duì)工作人員進(jìn)行評(píng)價(jià)，包括工作的準(zhǔn)確性、效率、執(zhí)行安全條例和規(guī)章制度情況、職業(yè)道德、出勤率以及上崗資格等。（四）標(biāo)本采集、運(yùn)送和處理（五）檢測(cè)方法和試劑的選擇 應(yīng)使用最可靠的檢測(cè)方法和儀器，并定期進(jìn)行評(píng)價(jià)。（六）設(shè)備維護(hù)與校準(zhǔn) 應(yīng)該設(shè)立常用儀器的維護(hù)制度，以保證正常運(yùn)轉(zhuǎn)。推薦方法如下：酶標(biāo)讀數(shù)儀、洗板機(jī) 每天：核對(duì)濾光片波長(zhǎng)，檢查洗板機(jī)管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象。 每周：

5、清潔儀器表面，保護(hù)光學(xué)零件不沾灰。 每月：檢查洗滌時(shí)各孔是否與相應(yīng)的沖洗頭對(duì)位良好，負(fù)壓是否符合規(guī)定要求。 每年：檢查、清洗濾光片，如果出現(xiàn)破裂或霉點(diǎn)則要更換。根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準(zhǔn)程序或使用校準(zhǔn)板，對(duì)濾光片的精密度進(jìn)行保留記錄。1. 根據(jù)使用情況更換必要的部件。 移液器： 一年至少應(yīng)該標(biāo)定一次，發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)隨時(shí)進(jìn)行標(biāo)定。 標(biāo)定方法包括有色溶液光譜分析法、稱量校準(zhǔn)法、同位素計(jì)數(shù)法以及使用配套校準(zhǔn)盒等。標(biāo)定多道移液器時(shí)，必須保證每一個(gè)加樣頭都能夠連續(xù)、準(zhǔn)確地加樣。移液器的精密度應(yīng)在廠家說(shuō)明書(shū)規(guī)定的范圍內(nèi)。 冰箱和孵育箱： 定期檢查溫度并作好記錄，必須每天檢查和記錄低溫及超低溫冰箱的溫度。 4.

6、定期檢查其他儀器設(shè)備。文件和文件管理標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP） 艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要建立覆蓋主要工作內(nèi)容的SOP文件。 SOP由各崗位工作人員起草，實(shí)驗(yàn)室主任審定，并應(yīng)定期修訂。修訂應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)室主管人員的領(lǐng)導(dǎo)下進(jìn)行，每年至少一次。所有工作人員要在所從事工作的SOP文件上簽名表示已經(jīng)閱讀并掌握了有關(guān)的內(nèi)容。SOP通常包括以下內(nèi)容：通常包括以下內(nèi)容：（1） 標(biāo)題和編號(hào)標(biāo)題和編號(hào)（2） 編寫(xiě)和修改日期編寫(xiě)和修改日期（3） 編寫(xiě)和修訂人員姓名編寫(xiě)和修訂人員姓名（4） 方法、目的和原理方法、目的和原理（5） 相應(yīng)的職業(yè)規(guī)范相應(yīng)的職業(yè)規(guī)范（6） 檢測(cè)設(shè)備和試劑檢測(cè)設(shè)備和試劑（7） 其他相關(guān)步驟其他相關(guān)步驟（8）

7、 健康和安全操作指南健康和安全操作指南（9） 結(jié)果的解釋和報(bào)告以及出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)所采取的措施結(jié)果的解釋和報(bào)告以及出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)所采取的措施（10）附錄，包括相關(guān)的附加文件如標(biāo)準(zhǔn)表格、設(shè)備和試劑盒說(shuō)明）附錄，包括相關(guān)的附加文件如標(biāo)準(zhǔn)表格、設(shè)備和試劑盒說(shuō)明書(shū)等。書(shū)等。艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立以下艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立以下SOP:（1） 樣本的接收、登記和處理（2） 檢測(cè)方法和步驟（3） 質(zhì)控品的應(yīng)用方法（4） 儀器的使用與維護(hù)（5） 結(jié)果解釋與報(bào)告（6） 保密程序（7） 檢測(cè)數(shù)據(jù)的記錄（8） 追蹤和處理（9） 實(shí)驗(yàn)室的清理和消毒（10）安全實(shí)驗(yàn)原始記錄表 應(yīng)按實(shí)驗(yàn)要求，設(shè)計(jì)操作的原始記錄表，標(biāo)明空白對(duì)照、陽(yáng)

8、性對(duì)照、陰性對(duì)照、外部對(duì)照以及待檢樣品的位置，便于指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)人員加樣。要注明試劑盒來(lái)源、測(cè)定方法、批號(hào)、有效期、操作人員和復(fù)核人員姓名及檢測(cè)日期。標(biāo)本的登記 收到標(biāo)本后，及時(shí)登記有關(guān)參數(shù)，包括受檢者姓名或代號(hào)、試管編號(hào)、性別、年齡、職業(yè)、送檢單位、人群類別、檢驗(yàn)結(jié)果、送檢日期、報(bào)告日期、備注（必要時(shí)記錄通信地址）等。 HIV抗體復(fù)查送檢單和HIV抗體檢測(cè)確認(rèn)報(bào)告單見(jiàn)艾滋病檢測(cè)工作管理辦法。 HIV陽(yáng)性標(biāo)本的保存記錄 記錄HIV陽(yáng)性標(biāo)本的貯存量、貯存溫度、貯存起始時(shí)間以及標(biāo)本保管人姓名。 文件存檔 實(shí)驗(yàn)原始記錄表、打印數(shù)據(jù)、膜反應(yīng)條帶或其照片、檢測(cè)記錄表、標(biāo)本登記、標(biāo)本保存記錄以及儀器設(shè)備維修和校

9、準(zhǔn)記錄等都應(yīng)該妥善存檔保存5年以上。最好同時(shí)使用計(jì)算機(jī)保存各種文件和記錄。二、質(zhì)量控制（QC）(一)質(zhì)控血清的制備和保存 在所有實(shí)驗(yàn)中必須包含有內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清和外部對(duì)照質(zhì)控血清。 內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清。內(nèi)部對(duì)照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)。每一次檢測(cè)必須使用內(nèi)部對(duì)照，而且只能在同批號(hào)的試劑盒中使用。 外部對(duì)照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測(cè)的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間差異而由實(shí)驗(yàn)室設(shè)置的一套對(duì)照血清，包括強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清。也可以只設(shè)置一個(gè)弱陽(yáng)性對(duì)照，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2-3倍為宜。 外部對(duì)照質(zhì)控血清的制備：1. 收集HIV抗體陽(yáng)性和陰性血清，56 滅活

10、，3000rpm離心15分鐘。弱陽(yáng)性對(duì)照可以用HIV抗體陰性血清梯度稀釋HIV抗體強(qiáng)陽(yáng)性血清并標(biāo)定后得到。按一年使用量配制，用0.2m膜過(guò)濾除菌。 外部對(duì)照質(zhì)控血清的保存： （1）按一周實(shí)驗(yàn)用量分裝、分類、標(biāo)記、封口、-20凍存。 （2）外部對(duì)照質(zhì)控血清不可反復(fù)凍融，一旦融化后應(yīng)該存放2-8，一周內(nèi)使用。 外部對(duì)照質(zhì)控血清的使用 原則上每一次實(shí)驗(yàn)必須使用外部對(duì)照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和穩(wěn)定性。同時(shí)可以了解各批試劑盒的批間差異，繪制質(zhì)量控制圖。1、 先將測(cè)定值從小到大排列：x1，x2，x3xn(x1為最小值，xn為最大值) 2、計(jì)算X和s 3、計(jì)算SI上限值和SI下限值SI值表值表nn3

11、sn2sNn3sn2s31.151.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.56質(zhì)控圖的判定和分析 如果檢驗(yàn)進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)時(shí)，質(zhì)控對(duì)照值超出如果檢驗(yàn)進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)時(shí)，質(zhì)控對(duì)照值超出 2 2s s，則本次，則本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受( ( 失控失控 ) )。 位移：如果幾個(gè)連續(xù)質(zhì)控對(duì)照值位移：如果幾個(gè)連續(xù)質(zhì)控對(duì)照值 (3-5(3-5次次) ) 都落在均值都落在均值( (中中心線心線) )的一邊則稱之為位移，通常表示存在大的變化的一邊則稱之為位移，通常表示存在大的變化 ( ( 失控失控 ) )。 引起位移的原因有使用新批號(hào)的試劑盒、使用新試劑、實(shí)驗(yàn)員的更換、孵育溫引起位移的原因有使用新批號(hào)的試劑盒、使用新試劑、實(shí)驗(yàn)員的更換、孵育溫度的改變、儀器度的改變、儀器 ( ( 移液器移液器 ) ) 故障等。故障等。 趨勢(shì)：當(dāng)幾個(gè)連續(xù)質(zhì)控對(duì)照值趨勢(shì)：當(dāng)幾個(gè)連續(xù)質(zhì)控對(duì)照值(5