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文檔簡介

1、實(shí)驗(yàn)pH對酶活性的影響和最適pH的測定、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解pH對酶的活性的影響機(jī)理；2、掌握如何選擇酶催化反應(yīng)的最適pH和獲得最適pH條件的確定。、實(shí)驗(yàn)原理酶的生物學(xué)特征之一是它對酸堿的敏感性，這表現(xiàn)在酶的活性和穩(wěn)定性易受環(huán)境pH的影響。pH對酶的活性的影響極為顯著，通常各種酶只在一定的pH范圍內(nèi)才表現(xiàn)出活性，同一種酶在不同的pH值下所表現(xiàn)的活性不同，其表現(xiàn)活性最高時(shí)的pH值稱為酶的最適pHo各種酶在特定條件下都有它各自的最適pH。在進(jìn)行酶學(xué)研究時(shí)一般都要制作一條pH與酶活性的關(guān)系曲線，即保持其他條件恒定，在不同pH條件下測定酶促反應(yīng)速度，以pH值為橫坐標(biāo)，反應(yīng)速度為縱坐標(biāo)作圖。由此曲線，不僅可

2、以了解反應(yīng)速度隨pH值變化的情況，而且可以求得酶的最適pH。三、實(shí)驗(yàn)器材與試劑1試劑：磷酸氫二鈉、乙酸鈉、磷酸二氫鈉、檸檬酸、乙酸。2、器材:可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、試管、酸度計(jì)四、操作步驟1.配置緩沖溶液按下表配置緩沖溶液，其溶液pH值以酸度計(jì)測定值為準(zhǔn)。AvV口呂號(hào)L磷酸氫二鈉（ml）L檸檬酸鈉（ml）緩沖液pH1234562.反應(yīng)液的配方準(zhǔn)備二組各6支試管，第一組6支試管中，在每支都加入上表中相應(yīng)的緩沖液，然后加入一定量濃度的蔗糖酶溶液（此時(shí)的蔗糖酶只能用HO稀釋，酶的稀釋倍數(shù)和加入量要選擇適當(dāng)，以便在當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)條件下能得到的光吸收值A(chǔ)520。另一組6支試管也是每支都加入上表中相應(yīng)的緩沖液，但不再加酶而加入等量的去離子水，分別作為測定時(shí)的空白對照管。所有的試管都用水補(bǔ)足到。3.終止反應(yīng)所有的試管按一定時(shí)間間隔加入蔗糖（%）開始反應(yīng)，反應(yīng)5min后分別加入溶液，在按測定酶活力的程序操作，測出A520五、結(jié)果與分析以反應(yīng)速度（葡萄糖量.min-1）為縱坐標(biāo)，以pH為橫坐標(biāo)

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